重组DNA简明教程PDF电子书下载

第1章 细胞内基因作用的确定 1

细胞是一切生命的基本单位 2

细胞像是可以扩充的微型工厂，能同时合成几千种不同的分子 2

细胞的分子可划分成小分子与大分子 3

特异的细胞催化剂——酶能有效地决定细胞中的化学反应 4

特定蛋白质的肽链具有独特的氨基酸序列 4

酶的功能表现要求其多肽链具有精确的折叠 6

分子活化成高能形式可促进其化学反应 7

通过代谢图可具体地了解细胞代谢 8

酶不能决定多肽链中氨基酸的次序 8

孟德尔的豌豆杂交试验首次揭示遗传决定物（基因）的颗粒性 9

染色体是细胞遗传特性的携带者 10

“一个基因一种蛋白质”假说 14

第2章 DNA是主要的遗传物质 16

DNA无例外地定位在染色体上 16

除DNA外细胞还含有RNA 17

遗传分子的生物学测定方法的发现 19

病毒是可装配的遗传单元，能从一个细胞移向另一个细胞 21

体积与形状互补的分子彼此具有引力 23

DNA直径的确定 24

由有规律的5′—3′磷酸二酯键将DNA或RNA的核苷酸连接起来 24

DNA的碱基组成随不同生物体有显著变化 25

DNA具有高度有序的形状 26

DNA的基本单位是由两条相互缠绕的多核苷酸链（即双螺旋）所组成 28

双螺旋是由碱基对之间的氢键维系在一起的 29

DNA互补性是其自我复制能力的核心 30

DNA复制过程中双链分开的证明 33

DNA分子既可变性又能复性 34

分开G-C碱基对要比分开A-T碱基对难些 34

回文结构促进链内氢键的形成 36

在DNA中5-甲基胞嘧啶能代替胞嘧啶 36

染色体只含单一的DNA分子 37

病毒是均一DNA分子的来源 37

λ噬菌体DNA可插入大肠杆菌染色体上一个特异的位点 39

异常转导的噬菌体可提供细菌染色体的特异片段 40

质粒是自主复制的微染色体 41

环状DNA分子可能是超卷曲（supercoiled）的多数双螺旋是右旋螺旋，但在特定条件下某些DNA核苷酸序列可出现左旋螺旋 46

第3章 遗传密码的阐明 49

在突变的血红蛋白分子中鉴定出氨基酸的取代 49

细微结构遗传学的发展 49

基因与其多肽产物均为共线性（colinear） 51

RNA将DNA的信息携带到细胞质中蛋白质合成的位置上 53

在RNA模板上氨基酸是如何编排的？ 54

核酸和蛋白质合成过程中酶和模板的作用 55

蛋白质合成是自氨基末端走向羧基末端 56

3种类型的RNA参与蛋白质合成 56

密码子含3个碱基的遗传学证据 61

RNA链的合成和转译都是自5′至3′方向进行的 61

利用合成的mRNA选定密码子 61

1966年6月遗传密码终于全部破译 62

“摆动”常常使一种tRNA可识别多种密码子 62

遗传密码具有普遍性吗？ 64

校正基因tRNA引起遗传密码的错读 65

普通大小的基因至少含有1200碱基对 65

特异RNA分子合成的起始和终止信号都编码在DNA序列中 66

发展更加精确的系统用于体外转译外源mRNA 69

第4章 控制基因表达的遗传单元 71

阻遏物控制诱导酶的合成 71

几种功能相关的细菌基因集中在一个操纵子上 72

启动子是RNA合成的起始信号 74

阻遏物的分离和鉴定 75

阻遏物分子的组成性合成 75

基因转录的正调节 77

弱化作用 77

转译的控制 78

早年在探索高等动植物基因调节时所遇到的困难 82

爪蟾核糖核蛋白体RNA基因的纯化 82

真核生物mRNA具有帽、尾结构 83

真核DNA组成核小体 84

真核生物的3种RNA聚合酶 84

动物病毒是高等细胞基因表达的模型体系 86

RNA病毒是通过双链DNA的中间体复制的 87

第5章 构建重组DNA分子的方法 89

核酸序列分析法的发展 89

限制性内切酶在DNA链上进行序列特异的切割 90

限制性内切酶切割谱型是高度特异的 93

限制性内切酶切割片段的产生导致新的有力的 99

DNA序列分析法的发展 99

寡核苷酸可用化学方法合成 100

EcoRI酶产生含粘性末端的片段 102

许多酶参与DNA的复制 104

平整末端的DNA分子可用酶加上粘性末端 106

小型质粒是克隆外源基因的载体 107

已可对高等生物的DNA进行分子分析 108

科学家对无限制的基因克隆的危险性表示忧虑 110

Asilomar会议提出重组DNA研究的操作守则 112

“安全”细菌和质粒载体的发展 113

第6章 克隆基因的分离 113

何以要使用药物颉抗的质粒 114

克隆基因用的探针 115

cDNA的合成与克隆 117

特异cDNA克隆的鉴定 119

在λ噬菌体中克隆基因组的片段 124

粘性质粒可以克隆较大的外源DNA片段 128

用染色体巡查分析冗长的真核DNA 130

在M13噬菌体上克隆DNA提高了Sanger序列分析法的速度 132

Southern和Northern印迹分析 135

发展低丰度蛋白质编码基因的克隆操作 137

用寡核苷酸探针筛选基因文库 139

用计算机比较cDNA类型 141

表达型载体可用于分离特异的真核cDNA 141

表达型载体产物的免疫学筛选 144

第7章 真核基因难以想像的复杂性断裂基因的发现 147

在外显子-内含子交界处发现特定的碱基序列 150

自主剪接的发现 152

第一个全序列分析的哺乳动物基因 155

DNA的可译框架可显示出蛋白质的编码区 155

分泌型蛋白质氨基末端的前导序列 156

内含子有时可指示出功能性蛋白质的结构域 158

剪接途径不同使一个基因可产生不同的mRNA 159

在基因的5′末端和3′末端可发现调控区域 159

成簇的基因家族中可能含有残留的进化痕迹 162

mRNA分子的逆转录作用可使基因家族扩大 163

真核生物DNA含有分散的重复序列 164

多肽前体产生蛋白质激素 167

第8章 体外诱变 170

缺失作用 170

插入作用 175

取代作用：胞嘧啶的脱氨基作用 177

取代作用：核苷酸类似物的参入 178

取代作用：核苷酸的错误参入（misincorporation） 179

用序列确定的寡聚核苷酸构建突变体 181

第9章 种系DNA片段重排形成抗体基因 186

抗体分子基本结构的确定 186

由不同基因编码的V片段和C片段 187

应用mRNA探针可支持V和C基因连接的假说 188

从骨髓瘤细胞分离有功能的抗体基因 189

连接之前的V区和C区基因来源于胚胎细胞 189

多个J片段在基因组的C片段处连接 191

编码重链氨基酸的DNA存在3个不连续的区域 192

去掉一定片段的DNA可使VH基因连到两种不同的CH基因上 194

剪接方式不同可使单个细胞合成具有相同VH片段的μ和δ类重链 194

体细胞突变为免疫球蛋白的多样性提供新的来源 195

用基因克隆技术确定主要组织相容性复合物（MHC）基因及其抗体的基因 197

第10章 肿瘤病毒 202

整合型DNA肿瘤病毒的克隆 203

SV40和多瘤病毒的肿瘤蛋白质 204

围绕SV40和多瘤病毒染色质的结构蛋白是由重叠基因所编码 206

SV40和多瘤病毒早期和晚期mRNA合成起始的各种控制信号 207

围绕SV40（和多瘤病毒）DNA复制起点的区域大约有100个碱基对 209

RNA肿瘤病毒（逆转录病毒）的复杂组织结构 211

强致癌逆转录病毒含有特异的致癌DNA序列 212

前病毒能保持与RNA基因组相同的基因序列 212

合成RNA的启动子位于LTR之中 213

逆转录病毒的癌基因常编码蛋白激酶 214

正常细胞的基因是逆转录病毒癌基因的祖先 216

确定逆转录病毒的肿瘤生成作用是否由正常细胞基因的过量表达或错误表达引起 217

弱致癌逆转录病毒的癌症诱导作用 217

关于癌症诱导的理论概括 218

第11章 可移动的基因 220

转座子移动涉及新的子代转座子产生 223

可移动遗传单元的存在可能是所有生物的共同特性 224

将可移动单元用于果蝇胚胎遗传工程 225

RNA肿瘤病毒基因组是从可移动遗传单元进化来的吗？ 229

是否有两类在功能上不同的转座子？ 230

基因取代引起酵母性别转变，即盒式模型 231

基因转换引起锥虫抗原的改变 233

淋病奈瑟Neisseria球菌的基因重排引起抗原变化 236

第12章 DNA导入酵母细胞的实验性控制 238

酵母原生质球对外源DNA的吸收 239

酵母基因在大肠杆菌中的表达 239

穿梭载体 240

酵母也含有质粒 241

加入复制起点可提高转化效率 241

用酵母着丝粒DNA使酵母质粒具有稳定性 243

酵母染色体末端（端粒）的发夹回折结构 244

克隆的DNA在酵母染色体上的定向整合 248

回收性载体 251

基因的组织结构 254

酵母基因表达的调控 255

植物育种的常规方法 257

第13章 冠瘿质粒为载体的植物遗传工程 257

植物细胞培养 258

从植物培养细胞再分化为全植株 258

植物原生质体可再生为完整的植株 259

用原生质体融合产生杂交植株 259

在遗传上工程化的植物 262

冠瘿肿瘤 263

诱导肿瘤的质粒（Ti） 263

Ti质粒突变株 265

TDNA在植物染色体上的整合 265

TDNA是一种转座子吗？ 266

TDNA的孟德尔遗传学 267

Ti质粒DNA可以作为载体使用 267

植物细胞的转化与原生质体 268

Ti质粒的vir片段使TDNA具有移动性 270

“驯化”TDNA载体使单细胞可再生为全植株 270

TDNA插入作用可用来分离植物基因 271

Ti质粒在植物遗传工程上的实际应用 273

第14章 将基因转移到哺乳动物细胞中 274

Ca++对脊椎动物细胞摄取DNA的促进作用 274

胸腺嘧啶脱氧核苷激酶（TK）作为基因转染实验选择标志的原型 275

转化正常细胞的显性作用标志 276

从玉米中分离Ds转座单元 277

基因在细胞内连接后的共转移作用 279

利用显微注射法将DNA导入哺乳动物细胞 280

转染的甲基化DNA的半稳定性遗传 281

转移基因的分离 281

基因转移之后的调节 287

通过DNA转移实验确定特异的人癌基因 289

人癌基因的克隆 291

第15章 病毒载体 296

猴空泡病毒（SV40）载体 296

SV40病毒颗粒作为载体 297

SV40晚期区的取代 297

SV40早期区的取代 297

对表面抗原克隆基因的分析 299

COS细胞中DNA的质粒式复制 303

通过COS细胞融合回收整合的SV40DNA 305

SV40载体中增强子序列的发现 305

牛疣病毒DNA在小鼠细胞中可像质粒那样进行复制 308

RNA肿瘤病毒可用作载体 309

第16章 外源基因导入小鼠受精卵 312

外源基因在染色体上的整合 312

外源基因的整合无染色体特异性 313

外源DNA可稳定地整合到生殖细胞中 313

外源基因在小鼠中的表达 315

MK融合基因在显微注射后的表达 316

MK融合基因的组织特异性表达 317

MK融合基因在后代中表达的变化 317

MGH融合基因的功能表达 318

MuLVDNA的整合 319

用MuLV感染早期胚胎 320

前病毒DNA的显微注射 322

基因植入受精卵所得到的初步线索 323

“克隆化”的动物 323

第17章 重组DNA与遗传病 328

孟德尔遗传 328

先天性代谢差错 329

先天性代谢差错的医治 329

早期诊断与流产 331

遗传疾病的DNA分析 331

β地中海贫血 334

无意义突变和框移突变 334

转录的突变 334

RNA加工的突变 336

镰形细胞贫血症 336

用合成的寡核苷酸诊断α1抗胰蛋白酶缺陷症 338

瓜氨酸血症与精氨酰琥珀酸合成酶mRNA的异常有关 340

通过连锁现象诊断基因突变 340

突变基因的研究 343

人类染色体基因的定位 344

体细胞遗传学 345

人-鼠杂交细胞 346

基因的亚染色体定位 346

染色体易位与癌 350

原位杂交 353

单个染色体的克隆 354

填补细胞遗传学和分子遗传学之间的鸿沟 354

基因治疗的前景 356

为地中海贫血患者导入胚胎血红蛋白 357

第18章 重组DNA工业的研究基础 359

重组DNA技术的商业潜力 359

商业上的基因克隆方法 360

从细菌中获得人胰岛素 360

人胰岛素的结构 360

合成胰岛素“基因” 361

分泌胰岛素原的细菌 363

胰岛素原的cDNA 363

人生长激素的基因克隆 366

人生长激素“基因”的制造 366

关于甲硫氨酸问题 369

不同类型的干扰素 369

人α干扰素在大肠杆菌中的高效表达 372

γ（免疫）干扰素的克隆 372

用于疫苗的病毒蛋白 373

口蹄疫病毒的克隆 374

化学合成的多肽疫苗 374

人乙型肝炎病毒疫苗 375

乙型肝炎抗原的基因克隆 375

重组DNA的研究史 377

附录A 限制性内切酶 390

附录B 重组DNA研究中的其它酶类 396

参考文献 399

汉英术语索引 461