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第一章 实验室基本设备及常用试剂 1

一、基本设备 1

(一)显微镜 1

(二)切片机 4

(三)冷冻切片箱(Cryostal) 6

(四)磨刀机 6

(五)自动脱水机 6

(六)恒温箱与干燥箱 6

(七)冰箱 7

(八)离心机 8

(九)天平 8

(十)酸度计 8

(十一)定时钟 8

(十二)一般手术器械及维修工具 8

(十三)木器设备 8

(十四)染色缸与染色架 9

(十五)载玻片与盖玻片 10

(十六)常用玻璃器皿 10

(十七)浸蜡及包埋用具 11

(十八)其它切片用具 11

二、常用试剂 12

1.蛋白甘油 12

2.盐酸-酒精 12

3.石炭酸-二甲苯 12

4.碳酸锂饱和水溶液 12

5.碘酒 12

6.Lugol碘液 12

7.苯胺水 12

8.生理盐水 13

9.Ringer液 13

10.Locke液 13

11.升汞饱和水溶液 13

12.清洁液(洗液) 13

13.酒精稀释液 14

第二章 取材及固定 15

一、动物致死法 15

二、取材注意事项 16

三、组织固定法 17

(一)固定的方法 17

(二)固定的目的 18

(三)注意事项及影响固定的因素 18

(四)固定剂浸入组织深度参考表 19

(五)固定液 19

1.单纯固定液 20

(1)酒精 20

(2)甲醛 20

(3)升汞 22

(4)醋酸 22

(5)苦味酸 23

(6)重铬酸钾 24

(7)锇酸 24

(8)铬酸 26

(9)丙酮 26

(10)三氯醋酸 26

2.混合固定液 26

(1)酒精-甲醛液(AF液) 26

(2)Carnoy液 27

(3)Bouin液 27

(4)苦味酸-硫酸液 28

(5)Rossman液 28

(6)“Susa”Heidenhain液 28

(7)Romcis液 29

(8)甲醛-醋酸钠(钙)-升汞液 29

(9)Stieve液 29

(10)Orth液 29

(11)Zenker液 30

(12)Helly液 30

(13)Champy液 31

(14)Flemming液 31

(15)Kolmer液 31

(16)Marchi液 31

(17)Verhoeff液 32

第三章 固定后处理及切片 33

一、洗涤与修切 33

二、脱水与透明 34

三、各种包埋法 41

(一)石蜡包埋法 41

(二)火棉胶包埋法 45

(三)碳蜡包埋法 50

(四)明胶包埋法 51

四、切片、粘片及封固 51

(一)切片刀与磨刀 52

(二)石蜡切片法 56

(三)火棉胶切片法 59

(四)冰冻切片法 60

(五)封固与封固剂 63

组织切片制作过程简表 65

第四章 染料、常用染液及常规苏木精-伊红染色法 66

一、染料 66

(一)染料的性质简介 66

(二)染料的分类 71

(三)使用染料时应注意的事项 71

(四)染色原理简介 72

二、常用染液及染色法 74

(一)细胞核常用染色法 74

1.苏木精 74

(1)Hansen铬矾苏木精 75

(2)Mayer酸性苏木精-明矾染色法 75

(3)Mayer钾矾-苏木红染色法 76

(4)Delafield苏木精染色法 76

(5)Ehrlich酸性苏木精染色法 76

(6)Harris苏木精染色法 76

(7)Weigert铁苏木精染色法 77

(8)Mallory磷钨酸苏木精染色法 77

2.卡红(胭脂红、洋红) 77

(1)Grenacher钾矾-卡红染色法 77

(2)Grenacher硼砂-卡红染色法 78

(3)Orth锂卡红染色法 78

(4)Mayer副卡红染色法 78

3.碱性煤焦油染料染色法 79

(1)L？ffer碱性美蓝染色法 79

(2)Mayer硫堇或甲苯胺蓝染色法 79

(3)Metzner铁矾硫堇染色法 79

(4)Winiwarter沙黄染色法 79

(5)Flemming沙黄染色法 79

(6)Babes苯胺沙黄染色法 80

(7)Weigert裨斯麦棕染色法 80

(8)Pappenhein甲基绿染色法 80

(9)碱性品红 80

4.媒染染料细胞核染色法 80

(1)核坚牢红 81

(2)Einarson没食子酸青-铬矾染色法 81

(3)Berube没食子酸青-铬矾染色法 81

(4)Proescher-Arkush天青石蓝B染色法 81

(5)Einarson蒽蓝染色法 82

(6)酸性茜素蓝染色法 82

(二)细胞质常用染料 82

1.伊红 82

2.藻红 83

3.焰红 83

4.酸性品红 83

5.光绿及坚牢绿 83

6.其它 83

(三)脂肪染料 83

三、苏木精-伊红染色法及多色染色法 84

(一)常规苏木精-伊红染色法 84

(二)Damank苏木精-苦味酸-噻嗪红染色法 86

(三)Gray天青石蓝-丽春红2R染色法 87

(四)Cajal品红-苦味酸靛卡红染色法 87

(五)Gabe-MsMartoje三色染色法 88

(六)苏木精-伊红整块染色法 88

第五章 细胞器 91

一、线粒体 91

(一)材料与固定 91

(二)切片与染色 91

1.Heidenhain铁苏木精染色法 91

2.Regaud铁苏木精染色法 92

3.Altmann-Meves酸性品红染色法 92

4.Altmann-Kull酸性品红-甲苯胺蓝染色法 93

5.Seki硫酸钠茜素-品红染色法 94

6.Cowdry漂白法 94

二、高尔基复合体 95

1.Cajal硝酸铀法 95

2.Da-Fano改良Cajal法 95

3.Baker苏丹黑B染色法 96

三、中心体与染色体(细胞分裂) 97

(一)材料的选择 97

(二)固定与切片 97

(三)染色法 97

1.Hickson巴西木素染色法 97

2.Ehrlich-Biondi染色法 98

3.Paulette-Vanerll白细胞及淋巴细胞中心体染色法 99

4.Hall品红-苦味酸-靛卡红染色法 99

第六章 纤维性结缔组织 100

一、胶原纤维 100

1.Van Gieson染色法 100

2.Mallory三色染色法 101

3.武兆发改良Mallory三色法 101

4.Masson三色染色法(改良法) 102

5.Heidenhain“AZAN”染色法 103

二、弹性纤维 105

1.醛品红染色法 105

2.地衣红染色法 106

3.Verhoeff碘-铁苏木精染色法 106

4.碱性蓝B染色法 107

5.Weigert弹性纤维染色法 108

三、网状纤维 109

1.Foot染色法 110

2.Gordon-Sweet染色法 111

3.Humason-Lushbaugh染色法 112

4.Gomori染色法 113

5.Wilder染色法 114

6.综合简便法 115

7.网状纤维镀银块染法 116

四、组织细胞及成纤维细胞 117

1.台盼蓝注射HE染色法 117

2.铁矾苏木精染色法 118

五、成纤维细胞的培养与制备 119

六、肥大细胞(肥大细胞染色简表) 121

七、浆细胞 122

1.天青Ⅱ-伊红染色法 122

2.Unna多色性甲基蓝染色法 123

第七章 软骨及骨 125

一、软骨 125

二、骨 125

1.骨磨片 125

2.镀银法显示骨陷窝及骨小管 126

3.染料染色法显示骨小管 127

(1)酸性品红染色法 127

(2)结晶紫或大力紫染色法 127

4.骨的脱钙及切片 128

三、骨发生 132

1.茜素红-多色性美蓝染色法 132

2.Von Kossa改良法 133

第八章 血液及骨髓 134

一、血液和骨髓涂片技术 134

二、涂片的染色 135

(一)Wright染色法 135

(二)Giemsa染色法 136

(三)Wright-Giemsa混合染色法 136

(四)May-Grünwald染色法 137

三、网织红细胞煌焦油蓝染色法 138

四、血细胞超活体染色法 139

(一)中性红-耶那绿干染色法 139

(二)中性红-耶那绿湿染色法 140

五、骨髓切片 141

苏木精-美蓝-天青Ⅱ-伊红染色法 141

六、血细胞常用组织化学染色法 143

(一)核酸 143

(二)多糖 143

(三)蛋白质 144

(四)酶 144

1.单胺氧化酶显示法 144

2.过氧化酶显示法 145

第九章 肌肉组织 147

(一)Mallory磷钨酸苏木红或苏木精染色法 147

(二)Heidenhain铁矾苏木精染色法 149

(三)碘酸钠-苏木精块染心肌闰盘法 150

(四)平滑肌分离标本制作法 151

第十章 神经组织 153

一、神经组织的处理过程及应注意事项 153

二、神经组织的一般染色 156

三、神经细胞体的染色 156

(一)Golgi镀银法 156

(二)灌注的快速Golgi法 159

(三)Cox法 160

(四)Cox-钨酸盐改变法 160

(五)Nissl法染“虎斑”(“尼氏体”) 162

(六)长期固定于甲醛液的陈旧材料染色法 163

四、脊髓前角细胞分离标本制作法 164

五、神经原纤维及神经末梢 165

(一)Ramon y.Cajal各法 165

1.Cajal氨酒精法(Ⅲ) 165

2.Cajal吡啶法(Ⅴ) 166

3.Cajal水合氯醛法(Ⅵ) 166

(二)Holmes法染神经原纤维 167

(三)Cajal-Favorsky法染周围神经 168

(四)Bielschowsky-Gros-Lawrentjew法 169

(五)Ranson吡啶-银法显示无髓纤维 171

(六)吡啶-银法显示毛囊神经末梢 171

六、De Castro内耳双极神经细胞显示法 172

七、肠肌丛镀银显示法 173

八、胚胎性神经组织的改良银染法(Rager等) 174

九、运动终板、肌梭、腱梭及环层小体的氯化金法(Ranvier改变法) 175

十、显示突触法 177

(一)Golgi-Дейнека法 177

(二)Rasmussen法 178

十一、髓鞘染色法 179

(一)髓鞘漏斗膜(Schmidt-Lantermann裂隙)的Cajal显示法 179

(二)Weigert染髓鞘法 180

(三)Pal-Weigert染髓鞘法 181

(四)Kultschizky改良法 182

(五)Weil髓鞘染色石蜡切片法 183

(六)劳克坚牢蓝-焦油紫同时染髓鞘及尼氏体法(Kiuver-Barrera) 183

十二、溃变纤维显示法 185

(一)Swank-Davenport法 186

(二)Nauta法(1957) 187

(三)Fink-Heimer法(1967) 189

(四)Ebbesson-Robinson双重银法(1970) 190

十三、神经胶质 191

(一)Del Rio-Hortega碳酸银法显示小胶质细胞(Panfield改良法) 192

(二)Grono法显示少突胶质细胞 193

(三)Ramon y Cajal氯化金升汞法显示星状胶质细胞 194

(四)Marchalls法显示小胶质和少突胶质细胞 195

十四、整个人脑切片制作法 196

(一)Mülligan大脑厚切片染色法 197

(二)大脑厚切片油红O染色法 198

(三)Einarson没食子酸青染质灰质神经细胞法 199

(四)Weil苏木精染髓鞘法 200

十五、辣根过氧化酶HRP微量注射与离子透入法 201

(一)辣根过氧化酶微量注射法 201

(二)辣根过氧化酶离子透入法 203

第十一章 血管，血管注射技术，心脏及淋巴器官 205

一、毛细血管及大网膜铺片 205

(一)Wright染色显示毛细血管 205

(二)镀银法显示内皮 205

二、各型动、静脉的染色 206

苏木精-复制伊红染色法显示大动脉弹性膜 207

三、血管注射技术 208

(一)注射胶液的配制 208

(二)注射过程 209

四、心脏 210

五、淋巴器官 210

第十二章 消化系统及呼吸系统 211

一、消化系统 211

(一)取材与固定 211

(二)消化管的上皮细胞 212

1.表面上皮的PAS染色 213

2.胃腺主细胞(酶原细胞)染色 214

3.胃底腺壁细胞(盐酸细胞)染色 214

4.小肠潘氏细胞(Paneth细胞)染色 214

5.嗜银或亲银细胞 214

(三)胰腺 218

1.Mallory-Heidenhain-Azan染色法 218

2.Gomori醛复红染色法 220

3.Gomori铬明矾-苏木精-焰红法 221

(四)肝脏 222

1.贮脂细胞 222

2.胆小管 223

3.肝Kupffer细胞(星状细胞)显示法 224

二、呼吸系统 225

(一)取材、固定包埋及染色 225

(二)纤毛运动新鲜标本观察法 226

(三)肺泡上皮镀银法(Jeker) 226

(四)肺泡Ⅱ型细胞染色法(McNary) 227

(五)气管上皮分离标本制作法 227

第十三章 泌尿及生殖系统 229

一、泌尿系统 229

(一)肾的常规染色 229

1.球旁细胞结晶紫染色法(ilarada) 229

2.Bowie球旁细胞颗粒的猩红-乙基紫染色? 230

(二)膀胱的一般染色 230

二、生殖系统 231

(一)两性生殖器官一般染色 231

(二)睾丸间质细胞染色法(Threadgold) 231

第十四章 内分泌腺 232

(一)甲状腺滤泡旁细胞染色法 232

(二)肾上腺嗜铬细胞染色法(Wiesel) 233

(三)肾上腺嗜铬细胞染色法(Orth) 233

(四)肾上腺脂滴 233

(五)松果体细胞改良染色法(Achucarro-IIorlega) 234

(六)脑下垂体 234

1.垂体神经部 235

2.垂体腺部 235

(1)Adams-Swettenham法 235

(2)Paget-Eccleston法 236

第五章 皮肤、眼球及内耳 238

一、皮肤 238

(一)皮肤一般染色 238

(二)黑色素细胞 238

1.多巴黑色素反应石蜡切片法 239

2.多巴黑色素反应冰冻切片法 240

3.-SH基的铁氰化物显示法 241

4.-SS基的过甲酸-Schiff显示法 242

(三)细胞间桥 243

二、眼球 243

(一)Szent-Gyorgyri固定眼球切片法 243

(二)复方甲醛固定眼球法 244

三、内耳 245

内耳一般染色 245

第十六章 胚胎标本制作法 246

一、两栖类胚胎标本的制作 246

(一)卵的受精 246

(二)卵裂、囊胚、原肠胚及神经胚 246

(三)固定与固定液 247

1.Gilson升汞-硝酸混合液 247

2.Romeis升汞-三氯醋酸混合液 247

3.Gilson-Petrunkewistch混合液 247

4.Smith改良Tellyesniezky液 247

5.Whitman脱胶膜法 248

6.Schultze脱胶膜法 248

(四)脱水及包埋 248

(五)染色 248

二、鸡胚标本的制作 248

(一)孵育法 248

(二)取胚法 249

(三)固定 250

1.MeClung甲醛-硝酸混合液 250

2.Kleinenherg苦味酸-硫酸混合液 250

(四)染色 250

(五)切片及完整标本制作 251

三、猪胚标本的制作 251

HE整体染色法及连续切片 251

四、小白鼠胚胎标本的制作 254

(一)小白鼠的选择 254

(二)胎龄的确定 255

(三)取材 255

(四)标本制作 255

鼠胚透明标本骨骼染色法(Dawson改变法) 256

第十七章 脱落细胞涂片染色法 258

一、癌细胞涂片染色法 258

(一)取材注意事项 258

1.女性生殖道脱落细胞的取材 258

2.食管脱落细胞的取材 258

3.痰液脱落细胞的取材 258

4.胸、腹水中脱落细胞的取材 259

5.胃液、尿液中脱落细胞的取材 259

6.乳腺及前列腺分泌物的取材 259

(二)固定 259

(三)染色 260

1.常规HE染色法 260

2.巴氏(Papanicolaou)涂片染色法 260

3.邵氏(Shorr)染色法 264

4.改良的May-Grünwald-Giemsa染色法 264

5.吖啶橙荧光染色法 265

二、性染色质染色法 266

(一)取材 266

(二)固定 266

(三)染色 266

1.Moore焦油紫染色法 267

2.Guard猩红-坚牢绿染色法 267

三、羊水细胞染色 268

第十八章 染色体技术 270

一、染色体简介 270

二、实验室设备 270

(一)仪器 270

(二)器材 270

(三)培养基及其它试剂 271

1.199培养液 271

2.1640培养液 271

3.0.5%水解乳白蛋白培养液 271

4.0.85%生理盐水 271

5.植物血凝素 271

6.200单位/毫升肝素溶液 272

7.0.5微克/毫升秋水仙素溶液 272

8.3.5%NaHCO3溶液 272

9.0.075M氯化钾溶液 272

10.磷酸缓冲液(pH6.8) 272

三、普通染色体标本显示法 272

(一)微量全血培养法 272

(二)骨髓直接培养法 274

(三)骨髓短期培养法 274

(四)羊水细胞培养法 274

四、染色体分带技术 275

(一)G-带显示法 275

(二)C-带显示法 275

五、姊妹染色体单体差别染色法 276

第十九章 常用的组织化学方法 279

一、核酸 279

(一)Feulgen反应显示DNA 279

(二)甲基绿-派洛宁反应显示DNA和RNA 282

(三)甲基绿-派洛宁改良法 282

(四)Brachet甲基绿-派洛宁改良法 283

(五)Schiff块染显示DNA法 284

二、碳水化合物 285

(一)简介 285

(二)多糖 285

1.糖原组织化学技术简介 285

2.高碘酸Schiff反应(PAS)显示糖原 287

3.Best卡红显示糖原 288

(三)粘蛋白与粘多糖 289

1.染色特点简介 289

2.标准阿利新蓝染色法 291

3.不同电解质浓度的阿利新蓝染色法 291

4.不同pH阿利新蓝染色法 292

5.醛品红-阿利新蓝染色法 292

6.PAS-阿利新蓝染色法 293

7.天青A异染性染色法 293

三、蛋白质与氨基酸 294

(一)蛋白质的性能及鉴定 294

(二)汞-溴酚蓝法显示蛋白质 295

(三)显示碱性蛋白质的坚牢绿法 296

(四)显示蛋白质结合性氨基的茚三酮-Schiff反应 296

(五)二硝基氟苯(DNFB)法 297

(六)显示酪氨酸的Millon反应 299

(七)显示酪氨酸、色氨酸、组氨酸的四氮盐偶联反应 299

(八)显示色氨酸的对二甲胺基苯甲醛-亚硝酸盐法 300

(九)显示精氨酸的坂口8-羟基喹啉反应法 301

(十)用酶的消化作用鉴定蛋白质 303

1.胰蛋白酶、胃蛋白酶及糜蛋白酶 303

2.胶原酶 304

3.弹性蛋白酶 304

4.附录：蛋白质活性基团的封闭法 304

四、脂肪 305

(一)脂肪染色简介 305

(二)油红O染色法 305

(三)苏丹Ⅲ+Ⅳ混合染色法 305

(四)苏丹黑B染色法Ⅰ 306

(五)苏丹黑B染色法Ⅱ 307

(六)硫酸耐尔蓝法 307

(七)锇酸染色法 308

五、酶类 308

(一)酶类的性能 308

(二)磷酸酶-硷性磷酸酶与酸性磷酸酶 309

(三)Gomori-Takamatsu钙钴法显示硷性磷酸酶 309

(四)重氮盐偶联法显示硷性磷酸酶 311

(五)Gomori铅法显示酸性磷酸酶 312

(六)重氮盐偶联法显示酸性磷酸酶 312

(七)钠-钾三磷酸腺苷酶(简写ATPase)显示法 313

(八)镁激活三磷酸腺苷酶的铅法 314

(九)非特异性酯酶显示法 314

(十)吐温显示脂酶法(Gomori) 315

(十一)吐温显示脂酶法(Marlin) 316

(十二)硫代胆硷法显示胆硷酯酶(Koelle) 317

(十三)Koelle法整块染色显示胆硷酯酶 319

(十四)Karnovsky-Roots直接法显示胆硷酯酶 320

(十五)琥珀酸脱氢酶Nitro BT显示法 322

第二十章 放射自显影术 323

一、放射自显影术简介 323

二、实验常用的设备和试剂 323

(一)暗室 323

(二)标记物 323

(三)感光材料 324

(四)底层液 325

(五)显影液(D-19b) 326

(六)定影液(F-5) 326

三、整体动物放射自显影法 326

四、显微放射自显影法 327

(一)切片法 327

(二)涂片法 328

五、体外培养细胞的放射自显影法 329

六、应用放射自显影技术注意事项 330

第二十一章 荧光显微镜技术 331

一、荧光显微镜技术简介 331

二、荧光染料(荧光色素) 331

1.硷性荧光染料 332

2.酸性荧光染料 332

3.中性荧光染料 332

三、荧光显微镜 333

(一)光源 334

(二)滤片系统 334

1.激发滤片 334

2.吸热滤片及吸热并吸收紫外线滤片 335

3.阻断滤片 336

4.中性滤片 336

(三)显微镜 336

四、荧光显微镜的使用方法 336

五、荧光染色方法 337

(一)末梢血液吖啶橙荧光染色法 337

(二)肥大细胞吖啶橙荧光染色法 338

(三)细胞内DNA和RNA吖啶橙荧光染色法 339

(四)显示细胞内DNA和RNA吖啶橙荧光快速染色法 340

(五)同时显示两种核酸和类脂质的荧光染色法 340

(六)显示细胞核DNA的荧光Feulgen反应法 341

(七)显示组织细胞内粘蛋白的荧光PAS反应法 342

(八)显示淀粉样物质的荧光染色法 343

(九)显示去甲肾上腺素的荧光法 343

(十)Y小体的荧光染色法 344

(十一)显示钙及铝的荧光染色法 344

六、免疫荧光技术 345

(一)免疫荧光抗体技术的基本原理 345

1.直接法 346

2.间接法 347

3.补体法 347

(二)免疫荧光抗体技术 347

1.免疫动物 348

2.制备抗血清 349

3.提取免疫球蛋白 349

4.制备荧光抗体 350

5.荧光抗体的染色法 353

七、荧光抗体方法在医学生物学中的应用 354

第二十二章 超薄切片法 357

一、取材 357

(一)实验动物的取材 357

(二)骨髓标本的取材 358

(三)血液标本的取材 358

(四)细胞悬浮液的取材 358

二、固定 359

(一)固定剂 360

1.戊二醛 360

2.多聚甲醛 360

3.锇酸 360

(二)固定液的配制 361

1.戊二醛固定液 361

2.多聚甲醛-戊二醛混合固定液 362

3.锇酸固定液 362

(三)灌注固定法 363

(四)固定后的冲洗 364

三、脱水 365

四、包埋 366

(一)环氧树脂812包埋法 367

(二)环氧树脂618包埋法 368

(三)包埋方法 370

1.胶囊包埋法 370

2.对有方向性标本的包埋法 370

五、切片 371

(一)修块 371

(二)光学切片与染色 372

(三)铜网及支持膜的制作 373

(四)玻璃刀与刀槽的制作 374

(五)切片的厚度 377

(六)切片过程中出现缺陷及消除方法 377

六、电子染色法 379

(一)整块染色法 380

1.醋酸铀染色法 380

2.磷钨酸染色法 380

(二)切片染色法 380

1.醋酸铀染色法 380

2.铅染色液 381

3.染色工具 382

(三)防止标本污染应注意的事项 387

第二十三章 显微镜摄影 388

一、基本设备 388

1.显微镜 388

2.相机 389

3.翻拍台架 389

4.光源 390

二、感光材料 390

(一)胶片 390

(二)相纸 395

三、显微镜摄影的装置、操作与曝光 397

1.设备的装置 397

2.操作 397

3.曝光 398

4.摄影记录 400

5.未染色标本的摄影与黑白负片的选择 401

6.需要彩色摄影的切片标本 401

7.取景 401

四、显微摄影与翻拍技术 402

1.显微摄影 402

2.翻拍技术 404

五、滤色镜的应用 406

六、印相与放大 407

(一)黑白照片的印制 407

(二)黑白照片的放大 408

(三)彩色幻灯片、照片印制与放大时的校色 408

七、感光材料曝光后的显影加工 412

1.黑白负片的显影过程 413

2.黑白负片显影配方简介 413

3.显影液各成分的特性 415

4.显影的操作过程 416

5.影响显影的因素 417

八、几种试剂性能简介 419

九、暗室的设备和布置 422

附录 424