普通高等教育“十三五”规划教材 植物基因工程实验技术指南PDF电子书下载

第一篇 核酸分离提取技术 2

第1章 微生物DNA提取技术 2

实验1-1 大肠杆菌质粒DNA提取 2

1-1-1 质粒DNA小量常规提取法 2

1-1-2 质粒DNA小量试剂盒提取法 3

1-1-3 质粒DNA大量提取法 5

实验1-2 农杆菌Ti质粒DNA提取 7

实验1-3 农杆菌双元载体中mini-Ti质粒提取 7

实验1-4 M13噬菌体DNA提取 9

1-4-1 M13噬菌体单链DNA提取 9

1-4-2 M13噬菌体RF DNA提取 9

第2章 植物DNA提取 10

实验2-1 植物细胞总DNA提取 10

2-1-1 可用于PCR的DNA微量制备 10

2-1-2 SDS法 10

2-1-3 CTAB法 11

2-1-4 高盐法提取多糖类植物总DNA 11

2-1-5 食用油中提取DNA的方法 12

实验2-2 植物核DNA提取 13

2-2-1 核DNA的大量提取法 13

2-2-2 核DNA微量提取法 14

2-2-3 核DNA柱式抽提试剂盒法 15

2-2-4 核DNA磁珠法抽提试剂盒法 15

实验2-3 植物叶绿体DNA提取 17

2-3-1 密度梯度离心DNase处理法 17

2-3-2 高盐低pH方法提取叶绿体DNA 18

2-3-3 多糖类植物叶绿体DNA分离提取 19

实验2-4 植物线粒体DNA提取纯化 20

第3章 植物RNA提取技术 22

实验3-1 植物总RNA提取 22

3-1-1 异硫氰酸胍法 22

3-1-2 苯酚法 22

3-1-3 LiCl沉淀法 23

3-1-4 一步提取法 23

3-1-5 植物总RNA提取纯化试剂盒法 23

3-1-6 Fruit-mateTM for RNA purification法 24

3-1-7 RN Aiso for polysaccharide-rich plant tissue法 25

3-1-8 TRIzol法 26

实验3-2 总RNA中mRNA的分离提取 27

3-2-1 层析法 27

3-2-2 poly（A）mRNA提取纯化试剂盒法 27

3-2-3 MagnosphereTM UltraPure mRNA purification Kit法 28

实验3-3 植物microRNA的提取分离 29

3-3-1 microRNA提取试剂盒法 29

3-3-2 miRcute miRNA提取分离试剂盒法 30

第4章 核酸提取物纯度、浓度及定量检测 32

实验4-1 细菌DNA提取物纯度及浓度检测 32

4-1-1 分光光度（紫外吸收）法 32

4-1-2 琼脂糖凝胶电泳法 32

实验4-2 植物DNA提取物纯度及浓度检测 33

4-2-1 分光光度（紫外吸收）法 33

4-2-2 琼脂糖凝胶电泳法 33

4-2-3 荧光光谱法 33

实验4-3 植物RNA提取物纯度及浓度检测 34

4-3-1 分光光度（紫外吸收）法 34

4-3-2 琼脂糖凝胶电泳法 34

第一篇主要参考文献 36

第二篇 基因分离克隆技术 38

第5章 目的基因的PCR扩增技术 38

实验5-1 cDNA合成 38

5-1-1 AMV法 38

5-1-2 M-MLV法 38

5-1-3 第一链cDNA合成试剂盒法 39

实验5-2 基因保守序列的PCR扩增 40

5-2-1 一般的PCR方法 40

5-2-2 PCR酶试剂盒法 40

5-2-3 PCR反应要素 41

5-2-4 PCR反应条件：温度、时间和循环次数 42

5-2-5 常用PCR反应试剂盒 43

实验5-3 反转录PCR（RT-PCR）扩增技术 44

5-3-1 植物总RNA提取 44

5-3-2 反转录PCR（RT-PCR）扩增 44

5-3-3 一步法反转录PCR（RT-PCR）试剂盒法 45

实验5-4 PCR扩增产物的克隆 46

5-4-1 平末端连接 46

5-4-2 TA克隆 52

实验5-5 反向PCR（Reverse-PCR） 55

实验5-6 实时荧光定量PCR 55

5-6-1 样品RNA的抽提 55

5-6-2 RNA质量检测 56

5-6-3 样品cDNA合成 56

5-6-4 梯度稀释的标准品及待测样品的管家基因（β-actin）实时定量PCR 56

5-6-5 制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板 57

5-6-6 待测样品的待测基因实时定量PCR 57

5-6-7 实时定量PCR引物 57

5-6-8 电泳 57

5-6-9 实时荧光定量PCR试剂盒法 57

实验5-7 cDNA末端快速扩增技术（RACE） 59

5-7-1 总RNA的提取 59

5-7-2 反转录PCR 59

5-7-3 RACE方法扩增3’端 59

5-7-4 RACE方法扩增5’端 60

第6章 基因芯片技术分离目的基因 63

实验6-1 制备芯片 63

6-1-1 基片的制备 63

6-1-2 点样探针的制备 64

6-1-3 基因芯片点样 64

实验6-2 样品制备 65

6-2-1 植物RNA提取 65

6-2-2 检测提取的RNA 65

6-2-3 纯化总RNA（Qiagen的RNeasy Mini Kit或Micro Kit） 65

6-2-4 纯化总RNA的定量检测 65

6-2-5 cDNA合成 65

6-2-6 纯化cDNA（Affymetrix GeneChip Sample Cleanup Module） 66

6-2-7 cRNA合成和纯化（GeneChip IVT Labeling Kit） 66

6-2-8 纯化cRNA的定量检测 67

6-2-9 片段化cRNA 67

实验6-3 芯片杂交 67

实验6-4 芯片图像处理 68

实验6-5 芯片数据预处理 69

实验6-6 芯片差异表达基因分析 69

实验6-7 全基因克隆 69

第7章 插入突变分离克隆目的基因 71

实验7-1 T-DNA标签法 71

7-1-1 T-DNA载体的构建 71

7-1-2 对转化后代进行表型分析 71

7-1-3 对突变体进行遗传分析 71

7-1-4 PCR法分离T-DNA插入位点的侧翼序列 71

7-1-5 证实T-DNA的插入导致表型的变异 71

实验7-2 转座子标签法 71

7-2-1 农杆菌介导法把转座子导入目标生物体 72

7-2-2 转座子的初步定位 72

7-2-3 转座子插入突变的鉴定及分离 72

7-2-4 转座子在目标生物体内的活动性能检测 72

7-2-5 分离克隆目的基因 72

实验7-3 sAc/Ds双系统法 72

7-3-1 sAc的转化植株和Ds的转化植株的获得 72

7-3-2 转化株杂交，挑选杂合sAc和Ds的子一代植株 73

7-3-3 Ds在sAc产生的转位酶帮助下转座，产生表型突变株 73

7-3-4 建立对应于变异株的基因文库或cDNA文库 73

7-3-5 筛选对应的基因克隆并了解该基因的特征 73

7-3-6 回复突变株的获得 73

第8章 图位克隆目的基因 74

实验8-1 构建遗传作图群体 74

实验8-2 筛选连锁分子标记 74

实验8-3 突变基因的染色体初步定位 75

实验8-4 基因精细定位 75

实验8-5 构建基因组文库 76

实验8-6 利用分子标记筛选基因组文库 76

实验8-7 PCR扩增测序寻找突变位点 76

实验8-8 基因组高通量测序寻找突变位点 76

实验8-9 验证克隆基因的正确性 77

第9章 基因文库技术分离目的基因 78

实验9-1 cDNA文库构建 78

实验9-2 BAC文库构建 80

实验9-3 YAC文库构建 85

实验9-4 TAC文库构建 89

第10章 差异表达基因的分离技术 92

实验10-1 差别杂交与扣除杂交 92

10-1-1 原代目的基因培养 92

10-1-2 总RNA提取 92

10-1-3 层析法分离提纯目的基因 92

10-1-4 制取cDNA探针 92

10-1-5 cDNA扣除文库的构建 92

10-1-6 cDNA扣除文库的扩增及初步鉴定 94

实验10-2 mRNA差异显示技术（DDRT-PCR） 94

10-2-1 总RNA提取 94

10-2-2 RNA样品中微量DNA的去除 94

10-2-3 建立反转录归类反应体系 95

10-2-4 PCR选择扩增 95

10-2-5 差别条带的回收 95

10-2-6 回收条带的PCR扩增 95

10-2-7 扩增产物的纯化 96

实验10-3 代表性差异（RAD）和抑制性扣除杂交（SSH） 96

10-3-1 总RNA提取 96

10-3-2 磁性球珠分离mRNA 96

10-3-3 抑制消减杂交文库的构建 96

10-3-4 载体的连接及转化 98

10-3-5 插入片段长度的蓝白斑筛选与鉴定 98

10-3-6 菌体的培养与保存 99

10-3-7 序列分析和序列提交 99

实验10-4 交互扣除RNA差别显示技术（RSDD） 99

10-4-1 扣除杂交 99

10-4-2 差异显示 99

10-4-3 表达分析 100

实验10-5 随机引物PCR的RNA指纹法 100

10-5-1 RNA的提取和制备 100

10-5-2 总RNA的DNase处理 100

10-5-3 反转录及PCR扩增 100

10-5-4 差异片段回收及克隆测序 101

第11章 功能蛋白组技术分离目的基因 102

实验11-1 用于双向电泳分析的植物总蛋白提取及浓度测定 102

11-1-1 酚法提取植物总蛋白 102

11-1-2 三氯乙酸沉淀法提取植物总蛋白 103

11-1-3 植物总蛋白提取试剂盒法 103

11-1-4 Bradford法测定蛋白质浓度 105

11-1-5 蛋白质浓度测定试剂盒法 105

实验11-2 双向电泳分离目的蛋白 109

11-2-1 IPG胶条的水合和等电聚焦 109

11-2-2 IPG胶条的平衡 111

11-2-3 SDS-PAGE电泳 111

实验11-3 双向电泳凝胶染色 111

11-3-1 考马斯亮蓝染色法 111

11-3-2 SYPRO Ruby染色法 112

11-3-3 硝酸银（AgNO3）染色法 112

11-3-4 考马斯亮蓝蛋白质染色试剂盒法 113

实验11-4 用于质谱分析的多肽样品制备 113

第12章 酵母双杂交系统分离克隆目的基因 116

实验12-1 双杂交文库构建及筛选 116

实验12-2 酵母双杂交文库筛选目的基因 117

12-2-1 通过酵母配对来筛选目的基因 117

12-2-2 通过共转化的方法筛选目的基因 119

实验12-3 分析阳性相互作用 120

12-3-1 营养缺陷型/报告基因表达/3AT方法重测表型 120

12-3-2 酵母双杂交相互作用基因的最终获得 121

第二篇主要参考文献 123

第三篇 DNA重组及载体构建技术 126

第13章 目的基因克隆载体构建 126

实验13-1 目的基因PCR扩增 126

实验13-2 目的基因插入T载体 126

实验13-3 目的基因与克隆载体的限制性酶切及回收 127

13-3-1 平末端的限制性内切核酸酶单酶切 127

13-3-2 黏性末端的限制性内切核酸酶单酶切 128

13-3-3 限制性内切核酸酶双酶切 128

13-3-4 试剂盒法回收酶切产物 129

13-3-5 采用乙醇沉淀法进行酶切产物的回收 130

实验13-4 目的基因与克隆载体的连接反应 130

实验13-5 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 131

13-5-1 化学法转化大肠杆菌感受态细胞 131

13-5-2 电击法转化大肠杆菌感受态细胞 132

实验13-6 目的基因重组克隆载体的鉴定 132

13-6-1 重组克隆载体的PCR鉴定 132

13-6-2 重组克隆载体的酶切鉴定 133

13-6-3 菌落原位杂交鉴定重组克隆载体 133

13-6-4 α-互补实验鉴定重组克隆载体 136

13-6-5 插入失活鉴定重组菌落 137

第14章 目的基因遗传转化载体构建 138

实验14-1 一元转化系统的中间表达载体的构建 138

14-1-1 共整合载体系统的中间表达载体构建 138

14-1-2 拼接末端载体系统的中间表达载体构建 139

实验14-2 一元载体系统的中间表达载体导入农杆菌 139

14-2-1 平板涂布法 140

14-2-2 纤维素膜固定法 141

实验14-3 二元转化系统的中间表达载体构建 141

实验14-4 二元载体系统的中间表达载体导入农杆菌 142

14-4-1 三亲本杂交法转化农杆菌 143

14-4-2 冻融法直接转化农杆菌 143

14-4-3 电转化法直接转化农杆菌 144

第15章 其他遗传转化载体构建 146

实验15-1 发根农杆菌Ri遗传转化载体构建 146

实验15-2 病毒表达载体构建 147

实验15-3 Tag融合表达的遗传转化载体构建 148

15-3-1 直接构建Tag融合表达的遗传转化载体 148

15-3-2 通过中间载体构建Tag融合表达的遗传转化载体 149

实验15-4 多基因遗传转化表达载体构建 150

15-4-1 融合基因表达法构建多基因表达载体 151

15-4-2 利用普通限制性酶构建多基因独立表达载体 152

15-4-3 利用同尾酶构建多基因独立表达载体 154

第16章 组织特异表达载体构建 158

实验16-1 组织特异性启动子与质粒DNA的酶切及回收 158

实验16-2 组织特异性启动子与载体DNA的连接 158

实验16-3 根特异性表达载体构建 159

实验16-4 种子特异性表达载体构建 160

第17章 DNA重组及特异载体构建新技术 161

实验17-1 DNA重组新技术 161

17-1-1 重组融合PCR法 161

17-1-2 USER酶克隆技术 162

17-1-3 辅助交配遗传整合型克隆 163

17-1-4 无缝克隆技术 163

17-1-5 TALE技术 165

17-1-6 Gateway技术 166

17-1-7 TOPO克隆技术 167

实验17-2 特异载体构建新技术 168

17-2-1 DNA共转化及表达载体的正负向选择克隆载体构建 168

17-2-2 转座子表达载体构建 168

17-2-3 不依赖基因序列和连接反应的克隆载体构建 169

17-2-4 目的基因定位整合表达载体构建 170

第三篇主要参考文献 172

第四篇 目的基因遗传转化技术 174

第18章 根癌农杆菌Ti质粒介导转化目的基因 174

实验18-1 整体植株及组织器官接种根癌农杆菌诱发冠瘿瘤 174

18-1-1 开放性整体植株诱发冠瘿瘤 174

18-1-2 无菌整体植株诱发冠瘿瘤 174

18-1-3 无菌外植体诱发冠瘿瘤 174

实验18-2 冠瘿瘤的离体培养及植株再生 175

实验18-3 农杆菌叶盘法转化 175

18-3-1 农杆菌培养基菌液直接侵染法 175

18-3-2 植物组织培养基菌液间接侵染法 176

18-3-3 cpti基因叶盘法转化甘蓝 176

实验18-4 植物悬浮细胞与农杆菌共培养转化 177

实验18-5 植物原生质体与农杆菌共培养转化 178

第19章 发根农杆菌Ri及病毒质粒介导转化目的基因 180

实验19-1 发根农杆菌整体植株接种及离体器官共培养诱发毛状根 180

实验19-2 毛状根的离体培养及植株再生 180

实验19-3 发根农杆菌介导的目的基因转化 181

实验19-4 病毒介导外源基因转化 182

19-4-1 病毒接种法 182

19-4-2 农感染型质粒介导法（agroinfection） 182

第20章 直接导入法转化目的基因 183

实验20-1 基因枪转化外源基因 183

实验20-2 PEG介导基因转化 184

实验20-3 电激诱导基因转化 185

实验20-4 显微注射导入外源基因 186

实验20-5 激光转化外源基因 186

实验20-6 超声波转化外源基因 187

20-6-1 烟草叶片超声波转化 187

20-6-2 玉米幼胚愈伤组织超声波转化 188

实验20-7 脂质体转化外源基因 188

20-7-1 自制转化脂法 189

20-7-2 使用商品转化脂方法 189

第21章 种质系统介导转化目的基因 191

实验21-1 花粉粒媒体介导外源基因转化 191

21-1-1 花粉粒与DNA混合授粉法 191

21-1-2 花粉培养法 191

21-1-3 柱头切除法 191

21-1-4 花粉粒转化法 191

实验21-2 子房注射导入外源基因 192

实验21-3 穗鞘腔浸泡导入外源基因 192

实验21-4 种子浸泡导入外源基因 192

第22章 遗传转化新技术 194

实验22-1 叶绿体基因转化 194

实验22-2 基因敲除转化 195

22-2-1 RNA干扰转化 195

22-2-2 siRNA的设计及转染真核细胞 199

实验22-3 基因编辑及其遗传转化技术 201

22-3-1 基因组定点编辑技术概述 201

22-3-2 CRISPR/Cas系统的作用机制 202

22-3-3 CRISPR/Cas系统的类型及其特性 202

22-3-4 CRISPR/Cas系统的基本操作程序 203

22-3-5 CRISPR/Cas系统的功能及其应用 204

22-3-6 CRISPR/Cas的遗传转化系统及其实验 205

第四篇 主要参考文献 217

第五篇 转基因植物的检测鉴定 220

第23章 标记基因及报告基因表达检测 220

实验23-1 冠瘿碱检测 220

23-1-1 胭脂碱、章鱼碱检测 220

23-1-2 农杆碱、甘露碱检测 221

实验23-2 NPT-Ⅱ活性检测 221

23-2-1 点渍法 222

23-2-2 纸层析法 223

23-2-3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法 223

实验23-3 GUS活性检测 224

23-3-1 组织化学染色法 225

23-3-2 荧光测定法 225

23-3-3 比色测定法 228

实验23-4 Cat活性检测 228

23-4-1 DTNB比色法 228

23-4-2 薄层层析法 229

23-4-3 试剂盒法 230

实验23-5 Pat活性检测 231

23-5-1 DTNB比色法 231

23-5-2 薄层层析法 232

实验23-6 Dhfr活性检测 232

实验23-7 萤光素酶活性检测 232

23-7-1 光自显影定性检测 233

23-7-2 光分析定量检测 233

第24章 外源基因整合及其特性的检测鉴定 235

实验24-1 转基因植物的Southern杂交检测 235

24-1-1 用作探针的核酸片段的制备 235

24-1-2 32P同位素标记探针的制备、纯化及效率检测 235

24-1-3 生物素标记探针的制备、纯化及效率检测 238

24-1-4 地高辛标记探针的制备、纯化及效率检测 239

24-1-5 植物基因组DNA的大量提取及纯化 240

24-1-6 植物基因组DNA的限制性酶切及纯化 241

24-1-7 酶切产物的电泳及转移用膜和凝胶的准备 241

24-1-8 转膜及固定 242

24-1-9 探针杂交及信号检测 242

实验24-2 外源基因整合的PCR-Southern杂交检测 243

实验24-3 外源基因整合的拷贝数检测 243

24-3-1 利用Southern blot检测转基因植物中外源基因的拷贝数 243

24-3-2 利用real-time PCR检测转基因植物中外源基因的拷贝数 244

24-3-3 利用原位杂交检测转基因植物中外源基因的拷贝数 245

实验24-4 外源基因整合位点检测 246

24-4-1 反向PCR检测外源基因整合位点 246

24-4-2 交错式热不对称PCR检测外源基因整合位点 247

第25章 外源基因表达的检测鉴定 249

实验25-1 外源基因表达的Northern杂交检测 249

25-1-1 植物总RNA提取 249

25-1-2 杂交探针制备 249

25-1-3 Northern杂交 250

实验25-2 外源基因表达的RT-PCR检测 251

实验25-3 外源基因表达的mRNA原位杂交 251

实验25-4 外源基因表达的ELISA检测 253

实验25-5 外源基因表达的Western杂交检测 254

第26章 转基因植物检测新技术 256

实验26-1 生物传感器 256

26-1-1 表面等离子共振生物传感器 256

26-1-2 压电式晶体管生物传感器 258

26-1-3 电化学发光PCR方法 260

实验26-2 侧向流动型免疫检测 261

实验26-3 转基因植物表达产物色谱检测 263

实验26-4 转基因植物毛细管电泳检测 263

第五篇主要参考文献 265

第六篇 转基因植物的生物学特性及表观遗传学检测 268

第27章 转基因植物的遗传特性检测 268

实验27-1 转基因植物的（非）孟德尔遗传规律检测 268

实验27-2 转基因植物的纯（嵌）合性检测 268

实验27-3 转基因植物的遗传稳定性检测 269

第28章 转基因植物目的性状检测及其生理生化指标分析 271

实验28-1 转基因植物目的性状及其变异检测 271

28-1-1 转基因植物目的性状检测 271

28-1-2 转基因植物变异性状检测 272

实验28-2 抗逆转基因植物目的性状的生理指标分析 273

28-2-1 叶片相对含水量（RWC）测定 273

28-2-2 叶片相对电导率测定 274

28-2-3 叶绿素含量测定 274

28-2-4 净光合速率（Pn）、蒸腾速率（Tr）及水分利用效率测定（WUE） 274

实验28-3 抗逆转基因植物生化指标检测与分析 275

28-3-1 可溶性蛋白含量测定 275

28-3-2 游离脯氨酸含量测定 276

28-3-3 脱落酸（ABA）含量测定 276

28-3-4 丙二醛（MDA）含量测定 277

28-3-5 植物逆境保护酶（SOD、 CAT、 POD）活性测定 278

实验28-4 抗逆转基因植物目标性状鉴定与评价 280

28-4-1 转基因植物的抗旱性鉴定 280

28-4-2 转基因植物的耐盐性鉴定 281

28-4-3 转基因植物耐寒性鉴定 282

28-4-4 转基因植物耐热性鉴定 284

第29章 转基因植物的遗传多样性检测 285

实验29-1 转基因植物的RFLP检测 285

实验29-2 转基因植物的RAPD检测 286

实验29-3 转基因植物的SSR检测 287

第30章 转基因植物的表观遗传学检测 289

实验30-1 转基因植物染色质的免疫沉淀实验 289

实验30-2 转基因植物的甲基化敏感扩增多态性（MSAP） 290

实验30-3 转基因植物DNA甲基化改变的变性梯度胶电泳检测 291

第六篇主要参考文献 293

第七篇 生物信息学技术在植物基因工程中的应用 296

第31章 基因分离克隆中的生物信息学技术 296

实验31-1 基因PCR引物设计及评价 296

实验31-2 基因电子克隆中的BLAST比对搜索 299

实验31-3 基因电子延伸中的序列拼接组装 303

31-3-1 使用CAP3进行序列拼接组装 303

31-3-2 使用DNAMAN进行序列拼接组装 303

第32章 基因结构和功能分析中的生物信息学技术 307

实验32-1 基因多序列比对分析 307

实验32-2 基因的分子进化分析 307

实验32-3 基因的完整性分析 310

实验32-4 基因中motif的识别与分析 313

第33章 基因表达分析中的生物信息学技术 316

实验33-1 基因表达仓库（GEO）中数据的获得 316

实验33-2 差异表达基因的筛选 316

实验33-3 差异表达基因的聚类分析 321

第34章 蛋白质结构功能分析中的生物信息学技术 324

实验34-1 蛋白质结构与功能数据库检索 324

实验34-2 蛋白质二级结构预测 325

实验34-3 蛋白质三级结构预测 327

第七篇主要参考文献 330

第八篇 转基因植物的安全性评价检测 332

第35章 转基因植物的环境安全性评价 332

实验35-1 转基因植物的生存竞争性实验 332

实验35-2 转基因植物的杂草性实验 332

实验35-3 转基因植物对靶标生物的影响 333

实验35-4 转基因植物基因飘流检测 334

第36章 转基因植物对土壤微生物群落的影响 335

实验36-1 转基因植物对根圈细菌种群生态的影响 335

36-1-1 稀释平板计数法 335

36-1-2 Biolog ECO平板法 335

实验36-2 转基因植物对土壤微生物群落多样性的影响 336

实验36-3 转基因植物外源基因在土壤微生物中漂移检测 337

第37章 转基因植物的营养学及过敏性检测 338

实验37-1 转基因植物的营养学检测 338

37-1-1 转基因大豆油成分分析检测 338

37-1-2 转基因玉米胰蛋白酶抑制剂抗营养因子的安全性分析 339

实验37-2 转基因植物表达蛋白的模拟胃肠道消化检测 340

实验37-3 转基因植物中外源蛋白的过敏性分析 343

第38章 转基因植物的毒理学检测 345

实验38-1 转基因植物的急性毒性试验 345

实验38-2 转基因植物的慢性毒性试验 345

实验38-3 转基因植物的细胞毒性试验 347

第八篇主要参考文献 348

中英文名词缩写对照 349

附录 352

附录1 主要溶液及缓冲液的配制 352

1-1 质粒提取试剂 352

1-2 DNA提取溶液 352

1-3 电泳溶液 352

1-4 酵母转化试剂 352

1-5 分子杂交试剂 352

1-6 蛋白质电泳试剂 353

1-7 磷酸盐缓冲液 353

1-8 Tris-HCl缓冲液 354

附录2 常用培养基的配制 354

2-1 大肠杆菌LB培养基 354

2-2 蓝白斑筛选培养基 354

2-3 酵母YPD培养基 354

2-4 酵母SC-U基本培养基 354

2-5 酵母SC-U诱导培养基 354

2-6 农杆菌培养基 354

附录3 常用抗生素的配制及使用浓度 355

3-1 卡那霉素 355

3-2 氨苄西林 355

3-3 潮霉素 355

3-4 头孢菌素类 355

附录4 常用相对分子质量标准 355

附录5 常用的测量单位及摩尔数与重量间的换算 356

5-1 常用的测量单位 356

5-2 摩尔数与重量间的换算 356

附录6 DNA片段分子质量及其量与质量的换算 356

附录7 凝胶浓度的有效分离范围 357

7-1 不同浓度琼脂糖凝胶的分离范围 357

7-2 不同浓度SDS-PAGE胶的分离范围 357

附录8 转基因植物主要目的基因、表达蛋白和目的性状 357

8-1 目的性状为抗病菌类基因 357

8-2 目的性状为抗虫类基因 357

8-3 目的性状为抗除草剂类基因 357

8-4 目的性状为品质改良类基因 357

8-5 目的性状为抗旱类基因 358

8-6 目的性状为抗盐碱类基因 358

8-7 目的性状为抗低温类基因 358

8-8 目的性状为养分高效利用类基因 358

8-9 目的性状为次生代谢类基因 358

8-10 目的性状为生物反应器类基因 358

8-11 目的性状为雄性不育类基因 358

8-12 目的性状为筛选类基因 358

附录9 植物基因组大小及拷贝数计算方法 358

9-1 基因DNA定量测定 358

9-2 常见植物的基因组大小和质量 358

附录10 我国转基因生物安全管理法规 360

10-1 我国转基因生物安全管理机构 360

10-2 我国转基因生物安全管理法规 360

附录11 植物基因工程实验守则 360

附录12 植物基因工程实验报告的基本内容和要求 361