动物细胞培养 基本技术和特殊应用指南PDF电子书下载

第1章 绪论 1

1.1 历史背景 1

1.2 组织培养的优点 7

1.2.1 环境控制 7

1.2.2 样品的特征和均一性 8

1.2.3 经济、规模和机械化 8

1.2.4 体内环境的体外模拟 8

1.3 局限性 9

1.3.1 专业技能 9

1.3.2 量的问题 9

1.3.3 去分化和选择 10

1.3.4 细胞的起源 10

1.3.5 不稳定性 10

1.4 体外的主要差异 10

1.5 组织培养的类型 11

第2章 培养细胞的生物学 14

2.1 培养细胞的环境 14

2.2 细胞黏附 14

2.2.1 细胞黏附分子 15

2.2.2 细胞间连接 16

2.2.3 细胞外基质 16

2.2.4 细胞骨架 18

2.2.5 细胞迁移 18

2.3 细胞增殖 18

2.3.1 细胞周期 18

2.3.2 细胞增殖的调控 19

2.4 细胞分化 20

2.4.1 细胞分化的维持 21

2.4.2 细胞去分化 21

2.5 细胞信号传递 24

2.6 能量代谢 25

2.7 培养细胞的起源 26

2.7.1 培养的开始 26

2.7.2 细胞系的演化 27

2.7.3 细胞的衰老 28

2.7.4 连续细胞系的转化与形成 28

第3章 实验室设计、布局及设备 30

3.1 布局、规划和服务设施 30

3.1.1 要求 32

3.1.2 服务设施 34

3.1.3 通风装置 35

3.2 布局 35

3.2.1 无菌操作区 36

3.2.2 层流原理 36

3.2.3 工作台 36

3.2.4 检疫室和防范室 36

3.2.5 培养 37

3.2.6 准备区 40

3.2.7 储存 41

第4章 设备及材料 44

4.1 组织培养实验室的要求 44

4.2 无菌区 46

4.2.1 洁净台 46

4.2.2 手推车 48

4.2.3 无菌液操作——移液和分装 49

4.2.4 倒置显微镜 53

4.2.5 CCD摄像机和监视器 54

4.2.6 解剖显微镜 54

4.2.7 离心机 54

4.2.8 细胞计数 55

4.3 细胞孵育和培养 55

4.3.1 恒温箱 55

4.3.2 湿式CO2培养箱 56

4.3.3 温度记录仪 57

4.3.4 滚动架 57

4.3.5 磁力搅拌器 58

4.3.6 培养器皿 58

4.4 实验准备和杀菌 58

4.4.1 清洗 58

4.4.2 培养基和试剂的制备 59

4.4.3 杀菌 61

4.5 储存 63

4.5.1 消耗品 63

4.5.2 冰箱和冷冻箱 63

4.5.3 冷藏器 64

4.5.4 可控速率冷冻箱 64

4.6 附属设备 64

4.6.1 计算机和网络 64

4.6.2 普通正置显微镜 65

4.6.3 低温冷冻箱 65

4.6.4 共聚焦显微镜 65

4.6.5 PCR循环仪 65

4.7 专用设备 66

4.7.1 显微注射装置 66

4.7.2 集落计数器 66

4.7.3 可离心淘洗机 66

4.7.4 流式细胞仪 66

第5章 无菌技术 67

5.1 无菌技术的目标 67

5.1.1 微生物污染的风险 67

5.1.2 无菌的维持 67

5.2 创造无菌环境的各种因素 68

5.2.1 层流 69

5.2.2 安静的工作区域 71

5.2.3 工作面 71

5.2.4 个人卫生 73

5.2.5 试剂和培养基 73

5.2.6 培养物 73

5.3 灭菌操作 73

5.3.1 擦拭 73

5.3.2 加盖 74

5.3.3 灼烧 74

5.3.4 试剂瓶和培养瓶的操作 74

5.3.5 移液 75

5.3.6 液体倾倒 75

5.4 标准操作程序 76

5.5 仪器和设备 82

5.5.1 培养箱 82

5.5.2 盒装培养物 82

5.5.3 充入CO2气体 82

第6章 安全性、生物伦理及验证 83

6.1 实验室安全 83

6.2 危险性评估 83

6.3 标准操作程序 85

6.4 安全规则 85

6.5 常规安全 86

6.5.1 操作者 87

6.5.2 设备 87

6.5.3 玻璃器皿和锐利物品 87

6.5.4 化学毒性 88

6.5.5 气体 89

6.5.6 液氮 89

6.5.7 灼烧 90

6.6 火 90

6.7 放射性 91

6.7.1 摄入 91

6.7.2 放射性废弃物的处理 91

6.7.3 标记的试剂 91

6.7.4 高能源 91

6.8 生物危害性 92

6.8.1 生物防范水平 92

6.8.2 微生物学安全通风橱（MSC） 94

6.8.3 人体活检材料 96

6.8.4 遗传操作 97

6.8.5 生物危害性废弃物处理 97

6.8.6 熏蒸 97

6.9 生物伦理 98

6.9.1 动物组织 98

6.9.2 人体组织材料 98

6.10 质量保证 99

6.10.1 操作程序 100

6.10.2 质量控制（QC） 100

6.11 验证 100

6.11.1 鉴定 100

6.11.2 来源 101

6.11.3 污染 101

第7章 培养器皿和附着物 102

7.1 附着物 102

7.1.1 细胞的附着和生长 102

7.1.2 常见的附着材料 102

7.1.3 其他替代性附着物 103

7.2 表面处理 103

7.2.1 基质覆盖 103

7.2.2 饲养层 105

7.2.3 非黏附性附着面 106

7.3 培养器皿的选择 107

7.3.1 细胞产量 107

7.3.2 悬浮培养 109

7.3.3 通风 110

7.3.4 取样和分析 111

7.3.5 不均匀生长 112

7.3.6 价格 112

7.4 特殊系统 112

7.4.1 渗透性支持物 112

7.4.2 三维基质 113

第8章 成分明确培养基及补充物 115

8.1 培养基的发展史 115

8.2 物理化学特征 115

8.2.1 pH 115

8.2.2 CO2和碳酸盐 116

8.2.3 缓冲作用 123

8.2.4 氧气 123

8.2.5 渗透压 124

8.2.6 温度 124

8.2.7 黏滞度 125

8.2.8 表面张力和成泡性 125

8.3 平衡盐溶液 126

8.4 完全培养基 126

8.4.1 氨基酸 127

8.4.2 维生素 127

8.4.3 盐类 127

8.4.4 葡萄糖 128

8.4.5 有机补充物 128

8.4.6 激素和生长因子 128

8.4.7 抗生素 128

8.5 血清 129

8.5.1 蛋白质 130

8.5.2 生长因子 131

8.5.3 激素 131

8.5.4 营养物及代谢物 132

8.5.5 脂类 132

8.5.6 矿物质 132

8.5.7 抑制物 132

8.6 培养基和血清的选择 132

8.6.1 批次预约 134

8.6.2 血清的测试 135

8.6.3 热灭活 135

8.7 其他添加物 136

8.7.1 氨基酸水解物 136

8.7.2 胚胎浸出液 136

8.7.3 适应性培养基 136

第9章 无血清培养基 137

9.1 血清的缺点 145

9.2 无血清培养基的优点 146

9.2.1 标准培养基的定义 146

9.2.2 选择性培养基 146

9.2.3 调节细胞增殖与分化 146

9.3 无血清培养基的缺点 146

9.4 血清的替代 147

9.4.1 无血清培养基的商业供应 147

9.4.2 血清替代物 147

9.4.3 无血清传代培养 148

9.4.4 激素 149

9.4.5 生长因子 149

9.4.6 血清中的营养物质 154

9.4.7 蛋白质和多聚胺 154

9.4.8 黏滞度 154

9.5 无血清培养基的选择 154

9.5.1 细胞或产物特异性 154

9.5.2 适应无血清培养基 157

9.6 无血清培养基的研发 157

9.7 无血清培养基的制备 157

9.8 无动物蛋白培养基 158

9.9 小结 158

第10章 准备与灭菌 159

10.1 准备试剂与用品 159

10.2 设备与液体的灭菌 159

10.3 设备 162

10.3.1 玻璃器皿 162

10.3.2 玻璃移液管 165

10.3.3 螺口盖 168

10.3.4 清洁剂的选择 170

10.3.5 种类繁杂的设备 170

10.3.6 可重复使用的灭菌过滤器 171

10.4 试剂与培养基 173

10.4.1 水 173

10.4.2 纯水器的维护 175

10.4.3 平衡盐溶液 175

10.4.4 培养基的配制与灭菌 177

10.4.5 干粉培养基 180

10.4.6 特制培养基 182

10.5 培养基的灭菌 183

10.5.1 可高压灭菌的培养基 183

10.5.2 除菌过滤 183

10.5.3 血清 192

10.5.4 其他试剂的准备与灭菌 195

10.6 培养基的质控、检测和储存 196

10.6.1 质量控制 196

10.6.2 无菌检测 196

10.6.3 培养物检测 197

10.6.4 储存 197

第11章 原代培养 199

11.1 原代培养入门 199

11.1.1 用于解离组织的酶 199

11.1.2 解离过程的共同特点 200

11.2 组织分离 200

11.2.1 小鼠胚胎 200

11.2.2 鸡胚 204

11.2.3 人体活检材料 206

11.3 原代培养的类型 207

11.3.1 原代外植 207

11.3.2 酶的解离作用 210

11.3.3 温胰蛋白酶消化 210

11.3.4 低温预处理的胰蛋白酶消化 213

11.3.5 鸡胚器官原基 216

11.3.6 其他酶解过程 219

11.3.7 胶原酶 220

11.3.8 机械法解离 222

11.3.9 分离活细胞 224

11.3.10 原代培养小结 225

11.3.11 原始记录 225

第12章 传代培养和细胞系 227

12.1 传代培养和扩增 227

12.1.1 交叉污染和鉴定错误 229

12.1.2 支原体污染 231

12.1.3 术语定义 231

12.1.4 细胞系的命名 232

12.1.5 培养物的年龄 233

12.2 选择细胞系 233

12.3 常规培养 234

12.3.1 细胞形态的意义 234

12.3.2 培养基的更换 235

12.3.3 标准的换液方案 236

12.4 传代 238

12.4.1 传代标准 240

12.4.2 单层生长细胞典型的传代方案 241

12.4.3 生长周期和传代比率 243

12.4.4 传代时的细胞浓度 245

12.4.5 悬浮培养细胞的扩增 245

12.4.6 悬浮生长细胞的传代 246

12.4.7 培养条件的标准化 248

12.4.8 抗生素的使用 248

12.4.9 培养记录 249

第13章 克隆培养及筛选 251

13.1 克隆培养 251

13.2 贴壁率的刺激 255

13.2.1 促进克隆生长的条件 255

13.2.2 条件培养基 256

13.2.3 饲养层细胞 257

13.3 悬浮克隆培养 259

13.4 细胞克隆的分离 264

13.4.1 单层贴壁细胞克隆的其他分离技术 267

13.4.2 悬浮细胞克隆 268

13.5 复制性培养 269

13.6 选择性抑制剂 269

13.7 遗传变异细胞的筛选 270

13.8 细胞与基质的相互作用 272

13.8.1 选择性黏附 272

13.8.2 选择性脱壁 272

13.8.3 基质性质 273

13.8.4 选择性饲养层 273

13.8.5 半固体培养基选择 273

第14章 细胞分离 275

14.1 细胞密度及等密度沉降法 275

14.2 细胞体积与沉降速率 279

14.2.1 单位重力沉降 279

14.2.2 离心淘洗分离技术 279

14.3 以抗体为基础的分离技术 280

14.3.1 免疫盘化法 281

14.3.2 免疫磁珠分选 281

14.4 荧光活化的细胞分选法 284

14.5 其他分离技术 285

14.6 初学者如何进行细胞分离实践 286

第15章 细胞鉴定 287

15.1 鉴定的需求 287

15.2 真实性验证 287

15.3 保存记录和身世 288

15.4 鉴定指标 288

15.4.1 种属鉴定 289

15.4.2 谱系或组织标记 289

15.4.3 独特标记物 291

15.4.4 转化 291

15.5 细胞形态学 291

15.5.1 显微镜使用 295

15.5.2 染色 297

15.5.3 细胞学检查所用培养器皿：单层培养 299

15.5.4 悬浮细胞细胞学检查标本的制备 299

15.5.5 光学显微照相技术 302

15.6 共聚焦显微镜 303

15.7 染色体分析 303

15.7.1 染色体显带技术 306

15.7.2 染色体分析 307

15.8 DNA含量 308

15.8.1 DNA杂交 308

15.8.2 DNA指纹技术 308

15.8.3 DNA绘谱 309

15.9 RNA和蛋白质 314

15.10 酶活性 314

15.10.1 同工酶 314

15.10.2 利用Authentikit进行同工酶电泳 315

15.11 抗原标记 318

15.11.1 免疫染色 320

15.11.2 免疫分析 321

15.12 分化 322

第16章 分化 323

16.1 体内表型的表达 323

16.1.1 去分化 323

16.1.2 细胞谱系选择 324

16.2 分化阶段 324

16.3 增殖和分化 324

16.4 定向和细胞谱系 325

16.5 干细胞可塑性 326

16.6 分化标记物 327

16.7 诱导分化 328

16.7.1 细胞相互作用 328

16.7.2 全身性因子 330

16.7.3 细胞-基质相互作用 333

16.7.4 极性和细胞形状 334

16.7.5 氧张力 334

16.8 分化和恶性 334

16.9 应用 334

第17章 转化和永生化 336

17.1 在细胞系鉴定中的作用 337

17.2 什么是转化 337

17.3 遗传不稳定性和异质性 338

17.3.1 遗传不稳定性 338

17.3.2 染色体畸变 339

17.4 永生化 339

17.4.1 衰老的控制 340

17.4.2 病毒基因致永生化 341

17.4.3 人成纤维细胞的永生化 342

17.4.4 端粒酶诱导的永生化 345

17.4.5 淋巴细胞永生化 350

17.4.6 转基因鼠 350

17.5 生长控制异常 350

17.5.1 停泊不依赖性 350

17.5.2 接触抑制 351

17.5.3 血清依赖 353

17.5.4 癌基因 354

17.6 致瘤性 354

17.6.1 恶性化 354

17.6.2 肿瘤移植 355

17.6.3 侵袭力 355

17.6.4 血管发生 356

17.6.5 纤溶酶原活化因子 359

第18章 污染 361

18.1 污染的来源 361

18.1.1 操作者的技术 363

18.1.2 环境 364

18.1.3 层流通风橱的使用和维护 364

18.1.4 湿度恒温箱 364

18.1.5 冷藏库 365

18.1.6 无菌材料 366

18.1.7 引入的细胞系和活组织 366

18.1.8 隔离 366

18.2 微生物污染的种类 366

18.3 污染物的监控 366

18.3.1 可见的微生物污染 367

18.3.2 支原体 368

18.3.3 支原体的荧光染色 369

18.3.4 PCR法检测支原体 370

18.3.5 检测支原体的替代方法 374

18.3.6 支原体检测服务 375

18.3.7 病毒污染 375

18.4 污染培养物的处理 375

18.5 污染的去除 376

18.5.1 细菌、真菌和酵母菌 376

18.5.2 支原体的消除 377

18.5.3 清除病毒污染 378

18.5.4 顽固污染 379

18.6 交叉污染 379

18.7 结论 380

第19章 冻存 381

19.1 冻存的意义 381

19.2 冻存前注意事项 381

19.2.1 鉴定 382

19.2.2 何时冻存 382

19.3 冻存细则 382

19.3.1 细胞冻存的理论背景 382

19.3.2 细胞浓度 382

19.3.3 冻存液 383

19.3.4 冷却速度 383

19.3.5 安瓿 386

19.3.6 低温冰箱 386

19.3.7 培养细胞的冻存 389

19.3.8 冻存记录 391

19.3.9 安瓿的解冻 392

19.3.10 培养瓶冻存 394

19.4 玻璃化保存 394

19.4.1 hES细胞的冻存 394

19.4.2 hES细胞解冻 397

19.5 冻存库的设计和监控 398

19.5.1 冻存管理 399

19.5.2 细胞库存的连续更换 399

19.6 细胞库 400

19.7 细胞的运输 400

19.7.1 冻存安瓿 401

19.7.2 活细胞 401

第20章 定量 403

20.1 细胞计数 403

20.1.1 血细胞计数器 404

20.1.2 电子计数 407

20.1.3 染色的单层细胞 411

20.1.4 流式细胞仪 411

20.2 细胞质量 413

20.3 DNA含量 413

20.4 蛋白质 414

20.4.1 样品的溶解性 414

20.4.2 Bradford分析 414

20.5 合成速率 415

20.5.1 DNA合成 415

20.5.2 蛋白质合成 417

20.6 准备样品用于酶分析和免疫分析 418

20.7 细胞计数 419

20.7.1 原位标记 419

20.7.2 流式细胞术 419

20.8 重复取样 419

20.8.1 数据获得 419

20.8.2 数据分析 420

20.9 细胞增殖 420

20.9.1 实验设计 421

20.9.2 生长周期 421

20.9.3 单层细胞生长曲线的分析 425

20.9.4 培养基体积，细胞浓度和细胞密度 427

20.9.5 悬浮培养 428

20.9.6 生长周期的各个阶段 429

20.9.7 生长曲线的衍生物 430

20.10 贴壁效率 431

20.10.1 集落形成分析 433

20.10.2 自动集落计数 434

20.11 标记指数 434

20.11.1 生长分数 437

20.11.2 有丝分裂指数 438

20.11.3 分裂指数 438

20.12 细胞周期时间 438

20.13 细胞迁移 438

第21章 细胞毒性 439

21.1 活性、毒性和存活 439

21.2 体外局限性 440

21.2.1 药物代谢动力学 440

21.2.2 新陈代谢 440

21.2.3 组织和全身反应 440

21.3 分析的性质 440

21.3.1 生存力 441

21.3.2 存活 443

21.3.3 细胞增殖测定 448

21.3.4 代谢性细胞毒性测定 448

21.3.5 微滴定实验 449

21.3.6 微滴定与克隆存活的比较 453

21.3.7 药物的相互作用 454

21.4 细胞毒性实验的应用 454

21.4.1 抗癌药物筛选 454

21.4.2 肿瘤药物的前瞻性实验 454

21.4.3 药物学实验 455

21.5 基因毒性 455

21.5.1 姐妹染色单体交换的诱变实验 455

21.5.2 致癌性 458

21.6 炎症反应 459

第22章 特殊类型细胞的培养 461

22.1 特殊细胞培养技术 463

22.2 上皮细胞 463

22.2.1 表皮 464

22.2.2 角膜 469

22.2.3 乳腺 471

22.2.4 子宫颈 473

22.2.5 胃肠道 476

22.2.6 肝 478

22.2.7 原代肝细胞培养 478

22.2.8 人肝癌细胞系HepaRG 481

22.2.9 胰 483

22.2.10 肾 485

22.2.11 气管和支气管上皮 487

22.2.12 口腔上皮 489

22.2.13 前列腺 490

22.3 间充质细胞 492

22.3.1 结缔组织 493

22.3.2 脂肪组织 493

22.3.3 肌 495

22.3.4 软骨 501

22.3.5 骨 504

22.3.6 内皮细胞 506

22.4 神经外胚层细胞 512

22.4.1 神经细胞 512

22.4.2 神经胶质细胞 513

22.4.3 内分泌细胞 519

22.4.4 黑素细胞 520

22.5 造血细胞 523

22.6 生殖腺 524

22.6.1 卵巢 524

22.6.2 睾丸 524

第23章 干细胞、生殖细胞和羊水细胞 525

23.1 干细胞 525

23.1.1 胚胎干细胞 525

23.1.2 小鼠胚胎干细胞的诱导 525

23.1.3 小鼠胚胎干细胞的传代培养和扩增 530

23.1.4 人胚胎干细胞的原代培养 532

23.1.5 hES细胞的传代 534

23.1.6 鱼胚胎来源的多能干细胞 535

23.2 生殖细胞 539

23.3 胚外细胞 540

23.3.1 羊水细胞的培养 540

23.3.2 从新生儿或青年来源的细胞 544

23.3.3 成人来源的多能干细胞 544

23.3.4 人骨髓来源间充质干细胞 545

23.3.5 诱导多潜能干细胞 548

23.3.6 小鼠骨髓长期培养 552

23.3.7 人原始造血细胞长期培养 554

23.3.8 造血细胞集落形成分析 559

第24章 肿瘤细胞培养 562

24.1 肿瘤细胞培养中的问题 562

24.2 取材 563

24.2.1 代表性细胞的选择 563

24.2.2 冷冻组织保存 564

24.3 分离 564

24.4 原代培养 565

24.5 肿瘤细胞的选择培养 566

24.5.1 选择培养基 566

24.5.2 汇合饲养层 566

24.5.3 悬浮克隆 569

24.5.4 异种移植 569

24.6 细胞系的建立 570

24.6.1 原代肿瘤培养物的传代 570

24.6.2 连续细胞系 570

24.7 肿瘤细胞培养物的特征 571

24.7.1 肿瘤细胞的异质性 571

24.7.2 组织型培养 572

24.8 特殊类型肿瘤 572

24.8.1 乳腺 572

24.8.2 肺 574

24.8.3 胃 575

24.8.4 结肠 575

24.8.5 胰腺 578

24.8.6 卵巢 578

24.8.7 前列腺 578

24.8.8 膀胱 579

24.8.9 皮肤 579

24.8.10 子宫颈 580

24.8.11 胶质细胞瘤 580

24.8.12 神经母细胞瘤 581

24.8.13 精原细胞瘤 581

24.8.14 淋巴瘤和白血病 581

第25章 三维培养 583

25.1 细胞的相互作用和表型表达 583

25.1.1 细胞密度的作用 583

25.1.2 相互作用 584

25.1.3 模型的选择 584

25.2 器官培养 586

25.2.1 气体和营养物质的交换 586

25.2.2 结构的完整性 586

25.2.3 生长与分化 587

25.2.4 器官培养的限制 587

25.2.5 器官培养的类型 587

25.3 组织型培养 589

25.3.1 凝胶和海绵技术 589

25.3.2 中空纤维 590

25.3.3 球体 590

25.3.4 转动室系统 593

25.3.5 藻酸盐活细胞固定术 594

25.3.6 滤膜培养皿 594

25.3.7 神经聚集物的培养 597

25.4 器官型培养 599

25.4.1 组织等同物 599

25.4.2 组织工程 599

25.5 三维构建物中细胞的成像 601

第26章 规模与自动化 602

26.1 悬浮规模培养 602

26.1.1 连续培养 605

26.1.2 规模和复杂性 606

26.1.3 搅匀和换气 608

26.2 单层规模培养 610

26.2.1 多表面扩增器 610

26.2.2 旋转培养 613

26.2.3 微载体 615

26.2.4 巨型微载体 617

26.2.5 灌流式单层培养 619

26.3 程序控制 620

26.4 自动化 621

26.4.1 机器人细胞培养 621

26.4.2 高产量检测 622

第27章 特殊技术 624

27.1 淋巴细胞的制备 624

27.1.1 隔离的密度 624

27.1.2 淋巴母细胞的转化 625

27.2 放射自显影术 626

27.3 间隔性记录 632

27.4 细胞同步化 634

27.4.1 细胞分离 634

27.4.2 阻断 635

27.5 冷血动物细胞的培养 635

27.5.1 鱼细胞 636

27.5.2 昆虫细胞 636

27.6 体细胞融合 637

27.6.1 细胞杂交 637

27.6.2 移核实验 640

27.7 单克隆抗体的制备 640

第28章 培训纲要 646

28.1 目的 646

28.2 实验制备及操作技巧 647

28.3 基本的细胞培养技术 660

28.4 高阶练习 682

28.5 特殊练习 697

第29章 问题与对策 698

29.1 细胞异常形态 698

29.2 细胞生长缓慢 699

29.2.1 仅限于自己细胞出了问题 699

29.2.2 其他人也遇到同样的问题 699

29.3 培养基 700

29.3.1 试剂配方、准备和存储 700

29.3.2 不稳定试剂 701

29.3.3 配制培养基各种成分的纯度 702

29.4 基质和容器 703

29.5 微生物污染 703

29.5.1 仅限于单个实验者的问题 704

29.5.2 普遍问题 705

29.5.3 室内供气和层流净化工作台 706

29.5.4 特定污染 706

29.6 化学污染 707

29.6.1 玻璃器皿 707

29.6.2 移液管 707

29.6.3 水的纯化 707

29.6.4 低温冻存 707

29.6.5 粉末或气溶胶 708

29.7 原代培养 708

29.7.1 原代培养的存活率低 708

29.7.2 选择细胞错误 709

29.7.3 污染 709

29.8 分化 710

29.9 饲养层 710

29.9.1 常规单层培养 710

29.9.2 克隆培养 710

29.10 传代 711

29.10.1 收获率低或生长缓慢 711

29.10.2 生长不均匀 711

29.11 克隆 712

29.11.1 培养皿形成的克隆数过低 712

29.11.2 培养皿形成的克隆数太多 713

29.11.3 非随机分布 713

29.12 交叉污染和错误标记 713

29.13 冻存 714

29.13.1 复苏时存活率低 714

29.13.2 冻存后细胞形态发生变化 714

29.13.3 冻存细胞丢失 715

29.14 细胞计数 715

29.14.1 血细胞计数板 715

29 14.2 使用电阻抗法电子计数仪 715

第30章 结语 717

附录Ⅰ 计算配制及试剂制备 719

附录Ⅱ 设备及材料来源 733

附录Ⅲ 供应商和其他资源 763

附录Ⅳ 术语 779

附录Ⅴ 交叉污染或鉴定有误的细胞系 789

附录Ⅵ 一般教材与相关期刊 809

参考文献 811

索引 883