基因工程及其分子生物学基础 基因工程分册 第2版PDF电子书下载

1基因工程的四大要素及实施要点 1

1.1基因工程操作中常用的工具酶 1

1.2基因的分离 6

1.3基因工程载体 14

1.4受体细胞和重组基因的导入 30

1.5基因重组的方法 33

1.6基因重组体的筛选 37

2外源基因在宿主细胞中的高效表达 41

2.1有效的转录起始与基因的高效表达 41

2.2 mRNA的有效延伸和转录终止与基因的高效表达 42

2.3 mRNA的稳定性与基因的高效表达 43

2.4有效的翻译起始与基因的高效表达 43

2.5遗传密码应用的偏倚性与基因的高效表达 45

2.6 mRNA的二级结构与基因的高效表达 50

2.7 RNA的加工与基因的高效表达 50

2.8 mRNA序列上终止密码的选择 50

2.9表达质粒（或载体）的拷贝数及稳定性与基因的高效表达 51

2.10外源蛋白的稳定性与基因的高效表达 51

3基因的融合和融合蛋白的表达 53

3.1利用基因融合技术表达外源基因的缘由 53

3.2基因融合的策略 53

3.3基因融合和重组蛋白的产生 55

3.4基因融合和展示筛选 56

3.5基因融合和蛋白分泌 56

3.6融合蛋白的纯化 57

3.7融合蛋白的位点特异性切割 57

附录 重组蛋白表达和纯化中常用的融合标签 58

4外源基因的分泌表达 63

4.1外源基因在E.coli细胞中的分泌表达 63

4.2外源基因在枯草杆菌中的分泌表达 65

4.3 α-因子前导序列介导的酵母细胞分泌系统 66

4.4外源基因在哺乳动物细胞中的分泌表达 69

5重组蛋白的正确折叠及修饰 71

5.1重组蛋白的可溶性表达和折叠 71

5.2重组蛋白的重折叠 74

5.3外源蛋白在翻译后的修饰 77

6几种真核细胞表达系统 78

6.1哺乳动物细胞表达系统 78

6.2外源基因在哺乳动物细胞中的组成性表达和诱导性表达 86

6.3核型多角体病毒为载体的昆虫（细胞）表达系统 87

6.4转基因动物及其应用 95

6.5转基因植物及其应用 97

6.6 DNA疫苗 98

7分子杂交技术 100

7.1探针与目标核酸相互作用的原理 100

7.2探针的选择和特异性 102

7.3杂交的速率与探针长度、浓度及杂交加速剂的关系 103

7.4杂交的最适条件 105

7.5放射性探针的制备 106

7.6非放射性探针的制备 112

7.7放射性和非放射性标记探针的应用范围 115

7.8 DNA微阵列——基因组芯片 116

8粒子轰击和基因转移 119

8.1粒子轰击技术简介 119

8.2粒子轰击技术的应用范围 119

9聚合酶链反应及其应用 122

9.1聚合酶链反应的原理 122

9.2标准的PCR扩增方案 122

9.3 PCR引物及其设计 123

9.4关于热稳定的DNA聚合酶 133

9.5 PCR对模板质量的要求 134

9.6 PCR反应缓冲液和循环（周期）数 135

9.7 PCR相关技术的原理及其应用 136

10各种生物学展示技术 152

10.1噬菌体展示技术 152

10.2细菌展示技术 157

10.3酵母展示技术 159

10.4核糖体展示技术 160

10.5 mRNA展示技术 162

11基因打靶技术及其应用 166

11.1同源重组与基因打靶 166

11.2组织特异性的基因打靶 171

11.3转座子介导的基因打靶 174

11.4 RNA干涉与基因敲除 178

11.5反义核酸技术 180

11.6细菌基因敲除方法 180

11.7基因打靶技术的应用 181

12 DNA序列分析 183

12.1 Sanger的双脱氧链终止测序法 183

12.2 Maxam-Gilbert DNA化学降解法 186

12.3关于变性聚丙烯酰胺测序凝胶 187

12.4全基因组DNA序列的分析 187

13基因突变 190

13.1寡核苷酸介导的基因突变 190

13.2盒式突变法 200

13.3利用PCR进行DNA序列的突变 201

13.4关于随机突变 205

14寡核苷酸的化学合成 210

14.1寡核苷酸片段固相合成的原理及步骤 210

14.2寡核苷酸片段的纯化及鉴定 214

15蛋白质相互作用及其分析方法 218

15.1蛋白质相互作用的重要性 218

15.2蛋白质相互作用所产生的结果 218

15.3蛋白质相互作用的类型 219

15.4酵母双杂交系统 219

15.5利用绿色荧光蛋白（GFP）片段重组装研究蛋白质相互作用——细菌双杂交法 222

15.6蛋白质相互作用分析的in vitro方法 224

16蛋白质-核酸相互作用 237

16.1研究蛋白质-核酸相互作用的重要性 237

16.2蛋白质-核酸相互作用的类型 237

16.3蛋白质-核酸相互作用分析的in vitro方法 237

17蛋白质工程概述 244

17.1蛋白质分子的结构分析 244

17.2蛋白质的结构预测与分子设计 245

17.3基因工程是实现蛋白质工程的关键技术 246

参考文献 248