分子医学实验技术PDF电子书下载

第一篇 分子医学实验技术概论 1

第一章 分子医学实验基本要求 1

第一节 实验室规章制度与操作规范 1

一、实验室规章制度 1

二、实验注意事项及应急处理 1

三、实验室基本操作技能 3

第二节 实验记录、数据处理和实验报告 5

一、实验记录 5

二、实验数据的处理和实验误差 5

三、实验报告 8

第二章 分子医学实验样品制备的原则、策略和方法 9

第一节 实验样品制备的基本原则和策略 9

一、实验样品制备的基本原则 9

二、实验样品制备的基本策略 9

第二节 常用实验样品的制备 10

一、血液样品 10

二、组织样品 11

三、微生物样品 11

四、植物样品 11

第三节 生物大分子的制备 11

一、生物材料的选择与预处理 11

二、组织细胞的破碎 11

三、抽提 12

四、生物大分子的分离、纯化 13

五、纯度的分析鉴定 14

六、产物的浓缩、干燥 14

第二篇 分子医学实验常用的技术和方法 15

第三章 离心分离技术 15

第一节 离心的基本原理和基本概念 15

一、离心的基本原理 15

二、离心的基本概念 15

第二节 离心机分类和离心方法 17

一、离心机分类 17

二、离心方法 18

第三节 离心机的使用操作 20

第四章 电泳技术 21

第一节 基本原理 21

一、电泳的基本原理 21

二、影响带电粒子在电场中泳动的因素 22

第二节 电泳技术的分类 23

第三节 电泳装置 23

第四节 电泳结果的检测、分析和回收 25

一、电泳示踪剂 25

二、电泳染色剂 25

三、电泳结果的检测及回收 27

第五节 几种常用的电泳方法 27

一、聚丙烯酰胺凝胶电泳 27

二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 28

三、等电聚焦电泳 28

四、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳 29

五、蛋白印迹 30

六、DNA印迹和RNA印迹 30

第五章 层析技术 32

第一节 基本原理和概念 32

一、层析的基本原理 32

二、层析技术的基本概念 32

第二节 层析技术的分类 33

一、层析的分类 33

二、层析洗脱与检测方法 34

第三节 吸附层析 34

一、吸附层析的原理 34

二、吸附层析的分类 35

三、固定相和流动相的选择 35

四、薄层层析的制板、点样、展层和显色 37

第四节 分配层析 39

一、分配层析的原理 39

二、纸层析 40

第五节 离子交换层析 44

一、离子交换层析的原理 44

二、离子交换剂的类型 45

三、离子交换剂的选择与应用 48

四、离子交换剂的处理、再生和保存 49

五、离子交换层析的操作 49

第六节 凝胶层析 51

一、凝胶层析的基本原理 51

二、凝胶的种类和性质 51

三、柱层析凝胶的选择 54

四、凝胶的处理、保存和凝胶层析的操作 55

第七节 亲和层析 56

一、亲和层析的基本原理 56

二、亲和层析载体、配体的选择和偶联 56

三、亲和层析的操作 58

第八节 高效液相层析 59

一、高效液相层析的原理 59

二、HPLC的操作及注意事项 60

第六章 分光光度技术 62

第一节 分光光度技术原理 62

一、基本原理 62

二、Lambert-Beer定律 63

三、分光光度技术的定量方法 63

第二节 分光光度计的基本结构及使用 64

一、分光光度计的基本结构 64

二、几种常用分光光度计 65

第七章PCR技术 67

第一节PCR的原理及影响因素 67

一、PCR的原理 67

二、PCR的反应体系及主要影响因素 67

第二节PCR技术的应用 69

一、逆转录PCR 69

二、单链构象多态性PCR 70

三、限制性片段长度多态性PCR 70

四、等位基因特异扩增法 70

第三篇 实验项目 71

第八章 蛋白质与酶学实验项目 71

第一节 概述 71

一、蛋白质的分子组成、结构及理化性质 71

二、蛋白质的分离和纯化 71

三、蛋白质的定量 71

四、蛋白质纯度的鉴定 72

五、蛋白质生物活性的测定 72

第二节 实验项目 72

实验一 生物样本中蛋白质的提取 72

实验1-1组织细胞中蛋白质的提取 72

实验1-2细菌细胞中蛋白质的提取 74

实验二 蛋白质含量的测定 75

实验2-1 Kjeldahl定氮法测定蛋白质的浓度 75

实验2-2 Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质的浓度 78

实验2-3考马斯亮蓝法测定蛋白质的浓度 79

实验2-4紫外吸收法测定蛋白质的浓度 80

实验2-5 BCA法测定蛋白质的浓度 80

实验三 蛋白质的电泳分离 82

实验3-1聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 82

实验3-2 SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量 86

实验四 蛋白质印迹技术 91

实验五 等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点 94

实验六 层析技术（凝胶过滤、离子交换、亲和层析、HPLC） 97

实验6-1凝胶层析法分离血红蛋白和DNP-鱼精蛋白 97

实验6-2分子筛层析测定蛋白质相对分子质量 100

实验6-3离子交换层析分离混合氨基酸 103

实验6-4薄层层析分离脂类 105

实验6-5纸层析法验证转氨基作用 106

实验6-6高效液相层析分离蛋白质 108

实验6-7亲和层析纯化植物凝集素及凝集素活性鉴定 113

实验七 底物浓度对酶促反应速度的影响——酸性磷酸酶Km及Vm值测定 117

第九章 流式细胞技术 123

第一节 概述 123

一、流式细胞术的基本原理 123

二、流式细胞术的应用 123

三、流式细胞仪操作规程 125

第二节 实验项目 126

实验八 用质控血检测T淋巴细胞亚群 126

实验九 细胞凋亡的流式实验测定 130

第十章 核酸和染色体实验 133

第一节 概述 133

一、核酸的分子组成与结构 133

二、核酸的理化性质 134

三、核酸的制备和含量测定 135

第二节 实验项目 136

实验十DNA的提取 136

实验10-1真核生物组织细胞基因组DNA的提取 136

实验10-2真核生物血液标本中DNA的提取 138

实验10-3质粒DNA的提取 139

实验十一DNA含量和纯度的测定 142

实验11-1二苯胺显色法测定DNA含量 142

实验11-2 紫外吸收法测定基因组DNA的含量及纯度 143

实验十二RNA的制备 144

实验12-1一步法提取RNA 144

实验12-2 Trizol Reagent一步法提取RNA 145

实验十三 地衣酚法测定RNA含量 147

实验十四 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR） 148

实验14-1一步法RT-PCR 149

实验14-2两步法RT-PCR 150

实验十五 电泳法分离RNA和DNA 151

实验15-1琼脂糖凝胶电泳分离DNA 152

实验15-2 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离RNA 155

实验十六 人类外周血染色体标本制备 157

实验十七 人类染色体G带标本制备及观察 162

实验十八 人类染色体核型分析 164

实验十九 遗传病基因突变检测分析 167

实验19-1 Duchenne型肌营养不良症DMD基因检测 167

实验19-2遗传病基因突变分析 169

实验二十 基因多态性的检测 175

实验20-1 PCR-RFLP法测定CYP2C19m1等位基因 175

实验20-2等位基因特异扩增法分析基因中单碱基突变 177

第十一章 物质代谢与激素调节 180

第一节 概述 180

一、物质代谢的概念 180

二、物质代谢研究的材料与方法 180

第二节 实验项目 181

实验二十一 胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响 181

实验二十二Nelson-Somogyi法测定血糖浓度 182

实验二十三 饱食、饥饿及激素对肝糖原含量的影响 184

实验二十四 血清谷丙转氨酶活性的测定（赖氏法） 186

第十二章 自主创新性实验 188

第一节 概述 188

一、自主创新性实验的分类 188

二、自主创新性实验项目设计需要考虑或注意的问题 188

第二节 自主创新性实验设计 189

一、基本程序 189

二、实验设计的基本思路 189

附录 191

一、常用数据表 191

表1调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25 ℃） 191

表2蛋白质等电点参考值 192

表3常见蛋白质相对分子质量参考值 193

表4核酸、蛋白质换算数据 194

表5 SDS-PAGE分离胶配方表 195

二、常用试剂的配制 196

三、缓冲溶液及配制 199

四、透析袋的处理与保存 212

参考文献 213