绪论 病毒的一般性质及分类 1
一、病毒的一般生物学性质 1
二、病毒的形态与结构 1
三、病毒的化学本质 2
四、病毒对理化因子的稳定性 2
五、病毒的繁殖 3
六、病毒的感染 4
七、病毒的基因、遗传和变异 5
八、机体对病毒感染的反应 6
九、病毒的分类 6
十、病毒的化学治疗 9
第一部分 病毒学常用技术 10
第1章 常用实验器材的准备 10
一、玻璃器材的洗刷消毒 10
二、有机玻璃制品的消毒洗刷 11
三、滤器的清洁消毒 12
四、橡皮塞和橡皮管的清洁消毒 12
第2章 动物实验法 13
一、绪言 13
二、动物实验室及其器材装备 14
三、危险病毒动物实验室工作制度 14
四、实验动物的病毒性感染 14
五、实验动物的选择 16
六、动物接种法 18
七、动物采血法 21
八、感染动物的观察 23
九、感染动物的病理解剖检查 23
十、感染动物尸体及有关材料的处理 24
第3章 鸡胚培养法 25
一、概况 25
二、器材准备 25
三、鸡胚的管理 27
四、鸡胚的解剖与生理 28
五、鸡胚培养技术 28
六、病毒的检查 32
第4章 血清学方法 33
一、绪言 33
二、中和试验 34
(一) 原理 34
(二) 材料与方法 34
1.固定病毒-稀释血清法(用能致组织培养细胞病变的病毒为例) 34
2.固定血清血量-稀释病毒法(以致动物死亡的病毒为例) 35
(三) 判定结果的依据 37
(四) 影响中和试验的一些因素 37
(五) 用途及选择 38
三、补体结合试验 39
(一) 原理 39
(二) 材料制备 39
1.病毒抗原 39
2.免疫血清 39
3.补体 40
4.1%羊红细胞 40
5.溶血素 40
(三) 滴定 40
1.溶血素滴定 40
2.补体的滴定 41
3.抗原的滴定 41
(四) 补体结合试验正式试验步骤 43
(五) 影响补体结合试验的因素 44
(六) 用途及选择 45
四、红细胞凝集及凝集抑制试验 45
(一) 原理 45
(二) 材料与方法 46
(三) 红细胞凝集抑制试验 47
(四) 影响血凝及血凝抑制试验的因素 48
(五) 用途及选择 50
五、免疫荧光试验 51
(一) 原理 51
(二) 材料 51
(三) 操作步骤 53
1.抗血清的制备 53
2.抗体的提纯 53
3.荧光素抗体球蛋白标记法 53
4.去除未结合的游离荧光素的方法 54
5.非特异性染色反应的去除法 54
6.避免目的外的荧光血清染色和自家荧光的方法 55
(四) 免疫荧光的染色方法 55
1.直接法 55
2.间接法 55
(五) 免疫荧光技术在病毒学方面的应用 56
(六) 影响试验的一些因素 57
六、琼脂扩散试验 58
(一) 原理 58
(二) 材料及操作步骤 58
(三) 用途 58
(四) 影响试验的因素 59
七、间接血红细胞凝集试验 59
(一) 原理 59
(二) 材料和方法 59
(三) 试验步骤 60
(四) 结果的判定 61
(五) 影响试验的因素 61
(六) 用途 62
八、微量血清学方法 62
(一) 器具制备 62
(二) 使用方法 63
(三) 试验 63
第5章 病毒的组织培养法 66
一、病毒的组织培养发展史 66
二、组织培养原理 66
(一) 组织来源 67
(二) 单细胞的制备 67
(三) 细胞培养的基本条件 68
(四) 细胞培养液 70
(五) 单层细胞的生长 70
三、组织培养技术 71
(一) 小组织块培养技术 71
(二) 人胚肾或猴肾细胞的培养及维持方法 72
(三) 人胚肺细胞的培养及维持法 73
(四) 人羊膜细胞的培养及维持法 73
(五) 地鼠肾细胞的培养法 74
(六) 传代细胞的培养法 74
(七) 人双倍体细胞的培养法 75
(八) 同管两种细胞培养法 75
(九) 器官培养法 75
(十) 胶原层方法 76
(十一) 组织和细胞的保存方法 76
(十二) 空斑技术 77
四、组织内在污染及技原体污染 78
(一) 猴类病毒 78
(二) 禽类病毒 79
(三) 人组织的内在病毒污染 79
(四) 枝原体的污染 79
(五) 内在病毒及枝原体污染的控制及去除 80
五、组织培养技术在病毒工作中的应用 80
(一) 病毒的分离和鉴定 81
(二) 病毒的滴定 81
(三) 血清中和抗体的测定 82
(四) 疫苗及抗原的制备 82
(五) 病毒繁殖条件的研究 82
第6章 物理学和化学研究技术 83
一、病毒的提纯 83
(一) 物理学纯化方法 83
(二) 化学纯化方法 96
二、病毒的大小及其分子量的测定 96
(一) 超速离心沉淀法 97
(二) 微孔薄膜过滤法 98
三、病毒核酸和病毒蛋白质亚单位的分离和纯化方法 100
(一) 病毒核酸的分离和抽提 100
(二) 病毒蛋白质亚单位的分离 102
(三) 病毒核酸和蛋白质亚单位的分析和分提 104
四、核酸分子杂交 111
(一) 意义 111
(二) 核酸的制备 112
(三) 核酸分子杂交技术 115
第7章 免疫球蛋白的分离和提纯 118
一、概述 118
二、IgG的分离和提纯 118
(一) 盐析法分离提纯IgG 119
(二) 离子交换层析法分离和提纯IgG 120
三、IgM的分离和提纯 122
(一) 离子交换层析法提纯IgM 122
(二) 凝胶过滤法：即19S和7S免疫球蛋白的分离方法 123
四、分泌IgA的分离和提纯 123
(一) 淀粉凝胶平板制备电泳法 123
(二) 凝胶过滤和离子交换层析法 126
五、IgE的分离和提纯 127
六、免疫球蛋白的鉴定 128
(一) 免疫球蛋白的纯度鉴定 128
(二) 免疫球蛋白的生物学性质鉴定 129
(三) 超离心分析法 130
第8章 细胞免疫实验技术 132
一、免疫反应的性质 132
二、细胞免疫的作用方法 133
(一) 免疫淋巴细胞的直接作用 133
(二) 免疫淋巴细胞的间接作用 133
三、细胞免疫体外测定法 133
(一) 移动抑制试验 133
(二) 淋巴母细胞化试验 136
第9章 干扰素 139
一、绪言 139
二、干扰素的特性 139
三、干扰素诱生剂 140
四、干扰素的产生机制和抗病毒作用原理 143
五、人干扰素的制备 144
六、干扰素的测定方法 148
七、干扰素的提纯浓缩 152
八、干扰素的医学上的应用 154
第10章 电子显微镜技术在病毒学上的应用 159
一、电子显微镜 159
二、病毒研究中常用的电镜技术方法 160
(一) 超薄切片技术 160
(二) 病毒悬滴的阴性反差染色 163
(三) 真空喷镀(或真空投影)方法 164
(四) 免疫电镜技术 164
第11章 病毒的分离与鉴定 166
一、病毒的分离 166
(一) 标本的采集和运送 166
(二) 标本的处理 167
(三) 标本的接种 167
二、病毒的鉴定 170
(一) 初步鉴定 171
(二) 最后鉴定 174
第二部分 各论 176
呼吸道病毒感染绪论 176
一、引起呼吸道感染的病毒类型 176
二、关于呼吸道病毒感染的流行病学 176
三、临床表现与病毒类型的关系 177
四、呼吸道病毒的理化性质 178
五、关于呼吸道病毒的血清学性质及抗原性 178
六、呼吸道感染有关病毒的生物学性质 180
七、实验室常用动物和细胞对分离呼吸道病毒的敏感性 180
八、呼吸道病毒的分离和鉴定程序 183
第12章 流行性感冒 185
一、序言 185
(一) 简介和历史 185
(二) 临床表现 185
(三) 病理 185
二、流感病毒的生物理化性状 186
(一) 一般特性 186
(二) 流感病毒的结构、抗原成分和功能 186
(三) 流感病毒的抗原变异 187
(四) 流感病毒的命名 188
(五) 动物感染范围 189
(六) 动物流感病毒 190
(七) 流感病毒在组织培养细胞中的生长能力 190
三、标本的收集和准备 190
(一) 病毒分离标本的采集 190
(二) 血清标本的采集 191
四、实验诊断 191
(一) 目的和原则 191
(二) 临床材料的直接检查 191
(三) 病毒分离 192
(四) 分离物的鉴定 193
(五) 免疫血清的制备 197
(六) 血清学诊断 197
(七) 血清非特异性抑制素去除方法 199
(八) 流感病毒神经氨酸酶和神经氨酸酶抑制试验 200
附：霍乱滤液(受体破坏酶)的制造和效力测定的方法 203
第13章 副流感病毒感染 206
一、概述 206
二、流行病学 206
三、临床表现 206
四、病毒的性质 207
五、病毒的分离和鉴定 208
(一) 病毒的分离 208
(二) 病毒的鉴定 209
(三) 免疫血清制备 209
六、血清学诊断 210
(一) 抗原制备 210
(二) 血清学方法 211
第14章 呼吸道合胞病毒感染 213
一、概述 213
二、流行病学 213
三、临床表现 213
四、病理 214
五、病毒的性质 214
六、病毒的分离和鉴定 215
(一) 病毒的分离 215
(二) 病毒的鉴定 216
(三) 免疫血清制备 216
七、血清学诊断 216
(一) 抗原制备 216
(二) 血清学方法 216
第15章 鼻病毒感染 218
一、概述 218
二、临床表现 218
三、病毒的性质 218
四、病毒的分离和鉴定 220
(一) 提高鼻病毒分离阳性率的要点 220
(二) 病毒的分离 220
1.标本收集及处理 220
2.组织培养 220
(1) 人胎肾细胞培养 220
(2) 人胎肺双倍体细胞培养、传代、核学检查及保存 221
3.标本接种及培养条件 222
4.结果判断 222
(1) 病变特点 222
(2) 干扰试验 222
(三) 病毒的鉴定及定型 222
1.病毒的初步鉴定 222
2.鼻病毒的定型 223
(四) 免疫血清的制备 224
五、血清学诊断 224
第16章 日冕病毒感染 226
一、历史 226
二、临床表现 226
三、病毒的性质 227
四、病毒的分离和鉴定 228
(一) 病毒的分离 228
1.标本的收集和处理 228
2.人胎气管培养 228
3.人胎肺双倍体细胞和人胎肠成纤维细胞培养 229
(二) 病毒的鉴定 229
(三) 免疫血清制备 229
五、血清学诊断 229
(一) 抗原制备 229
(二) 血清学方法 230
第17章 腺病毒感染 231
一、引言 231
(一) 历史 231
(二) 流行病学 231
(三) 临床症状及病理 232
二、病原 233
(一) 形态 233
(二) 病毒的性质 233
1.对理化因子的稳定性 233
2.腺病毒血凝性质及分类 233
3.可溶性抗原 234
4.对鸡胚及实验动物不致病 234
5.腺病毒的致癌性 234
6.在组织培养上的繁殖情况 235
7.腺病毒伴随病毒 235
三、病毒的分离 236
(一) 标本的采集和处理 236
(二) 标本的接种 236
四、病毒的鉴定 236
(一) 免疫血清的制备 236
(二) 新分离病毒的鉴定 237
五、血清学诊断 237
(一) 补体结合试验采用塑料板微量法 237
(二) 中和试验 237
(三) 血凝及血凝抑制试验 238
(四) 其他操作 239
由副粘液病毒引起的急性全身性感染 240
第18章 麻诊 241
一、概述 241
二、流行病学 241
三、临床表现 242
四、病理及发病机制 242
五、病原 243
(一) 形态 243
(二) 化学组成及抗原 243
(三) 对理化因子的稳定性 244
(四) 生物学特性 244
六、实验诊断 245
(一) 标本的采集及病毒分离、鉴定 245
(二) 血清学试验 246
七、预防 247
(一) 减毒活疫苗 247
(二) 灭活疫苗 248
(三) 被动免疫预防 248
第19章 风疹 249
一、概述 249
二、流行病学 249
三、临床表现 249
四、病毒的性质 250
五、病毒的分离的鉴定 253
(一) 病毒的分离 253
(二) 病毒的血清学鉴定 253
六、血清学诊断 254
(一) 补体结合试验 254
1.抗原制备 254
2.补体结合试验步骤 254
(二) 血凝抑制试验 255
1.血凝素制备 255
2.红血球悬液制备 255
3.血清处理 255
(1) 肝素-氯化锰处理法 255
(2) 白陶土处理法 255
4.血凝素及血清稀释液 255
5.血凝抑制试验步骤 256
6.用不同免疫球蛋白血凝抑制试验诊断近期感染 256
(三) 中和试验 256
七、预防 256
第20章 流行性腮腺炎 258
一、简史 258
二、流行病学 258
三、临床表现 258
四、发病机理 259
五、病原学 259
六、实验诊断 261
(一) 病毒的分离和鉴定 261
(二) 血清学试验 263
七、预防 264
虫媒病毒绪论 265
第21章 流行性乙型脑炎 268
一、概述 268
二、临床症状 268
三、病理 268
四、流行病学 269
五、病原 270
六、病毒的分离和鉴定 271
七、血清学诊断 273
(一) 补体结合试验 275
(二) 血凝抑制试验 275
(三) 中和试验 275
八、防治措施 276
第22章 森林脑炎 278
一、临床症状 278
二、病理变化 278
三、流行病学 278
四、病原学 279
五、病毒的分离鉴定 280
六、诊断 280
七、治疗和预防 281
肠道病毒感染 282
第23章 肠道病毒感染 282
一、引言 282
二、流行病学 282
三、临床表现 283
四、病原学 285
五、实验诊断 286
(一) 分离与鉴定 286
1.标本的收集和处理 287
2.免疫血清的制备 287
3.病毒分离 288
4.病毒的鉴定 289
(1) 鉴定程序 289
(2) 中和试验 290
(3) 补体结合试验 291
(4) 血凝抑制试验 292
(二) 血清学检查 293
第24章 病毒性肝炎 295
一、引言 295
二、病原 296
三、甲、乙型肝炎临床鉴别诊断 297
四、乙型肝炎抗原检测技术 298
(一) 对流免疫电泳 298
(二) 间接血球凝集法 299
(三) 反向间接血凝法 301
(四) 免疫血球粘连实验 302
(五) 双向琼脂扩散法 303
(六) anti-HBs免疫血清制备 304
(七) 佛氏(Freund s)佐剂配制 304
(八) 纳氏试剂配法 305
(九) 乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的纯化 305
1.用葡聚糖凝胶G-200柱层析法纯化HBsAg 305
2.用亲和层析法纯化HBsAg 306
(十) 乙型肝炎表面抗体(Anti-HBs)的纯化 307
痘类病毒感染 309
第25章 天花和痘苗病毒 309
一、概述 309
二、临床表现 309
三、病毒的性质 310
四、实验室诊断 312
(一) 标本收集 312
(二) 快速诊断 313
(三) 病毒分离和鉴定 313
(四) 血清学诊断 315
疱疹病毒感染 316
第26章 单纯疱疹病毒感染 316
一、概述 316
二、临床表现 316
三、病毒的性质 318
四、实验室诊断 321
(一) 病毒分离和鉴定 321
(二) 血清学诊断 322
1.补体结合试验 322
2.微量间接血凝试验 323
第27章 水痘-带状疱疹 324
一、概述 324
二、临床表现 324
(一) 水痘 324
(二) 带状疱疹 324
三、病理 325
四、病毒的性质 325
五、实验室诊断 326
(一) 病毒分离和鉴定 326
(二) 血清学诊断 327
第28章 巨细胞病毒感染 328
一、概述 328
二、临床表现 328
三、病理 329
四、病毒的性质 329
五、实验室诊断 330
(一) 病毒的分离和鉴定 330
(二) 血清学诊断 331
其它病毒感染 332
第29章 狂犬病 332
一、流行病学 332
二、病原 332
三、临床表现 333
四、病理和发病机制 333
五、实验诊断 334
六、预防和治疗 335
第30章 呼吸道肠道孤儿病毒感染 338
一、概述 338
二、病毒的性质 338
三、病毒的分离和鉴定 339
四、血清学诊断 340
第31章 肿瘤病毒 342
一、序言 342
二、肿瘤病毒的分类 342
(一) RNA肿瘤病毒 342
(二) DNA肿瘤病毒 343
三、肿瘤病毒的生物学特征 344
四、研究人肿瘤病毒的技术方法 345
五、人类肿瘤病毒 347
第三部分 附录 352
附录一 组织培养试剂 352
I. 基础试验 352
1.抗菌素 352
2.琼脂(3%溶液) 352
3.10%葡萄糖母液 352
4.中性红 353
5.酚红1%溶液 353
6.NaHCO3溶液 353
7.IN NaOH液 353
8.5%小牛血清白蛋白溶液 353
9.Hanks 溶液 354
10.有抗菌素的Hank s溶液的制备 354
11.Earle s液 355
12.2倍Earle s液 355
13.磷酸缓冲盐溶液 356
14.无钙镁磷酸缓冲液 356
15.水解乳蛋白液 356
16.10倍Eagle s母液及使用液 356
17.2倍Eagle s液 358
18.199综合培养基 358
19.细胞冷藏培养液 362
20.RPMI细胞培养基1640 362
21.血清 363
22.Tris［(三)羟甲基氨基甲烷］缓冲液 364
23.台酚蓝 364
24.胰酶 364
25.胰酶-乙二胺四乙酸二钠 365
26.乙二胺四乙酸0.02%溶液 365
Ⅱ.生长液和维持液 365
1.Hank s水解乳蛋白小牛血清生长液 365
2.Eagle s小牛血清生长液 365
3.199综合培养基小牛血清生长液 366
4.RPMI细胞培养基1640小牛血清生长液 366
5.Earle s水解乳蛋白小牛血清维持液 366
6.Earle s水解乳蛋白无血清低pH维持液 366
7.Eagle s小牛血清维持液 367
8.无血清的Eagle s维持液 367
9.无血清的199维持液 367
10.Eagle s小牛血清营养性琼脂 367
11.Earle s液小牛血清营养性琼脂 367
附录二 血清学试剂及有关方法 369
1.Alsever s液 369
2.M/15磷酸缓冲液的配制 369
3.0.01M磷酸缓冲盐水的配制 369
4.10%蛋清盐水 369
5.钙镁盐水 370
6.0.5M碳酸缓冲液(荧光技术用) 370
7.pH7.2磷酸缓冲盐水(PBS) 370
8.pH9.0硼酸盐水 370
9.巴比妥缓冲盐水 370
10.1%支氧胆酸钠分散病毒颗粒法 371
11.反复冻融法制备补体结合抗原 371
12.丙酮浸渍提取抗原法 371
13.丙酮乙醚浸渍抗原法 371
14.蔗糖-丙酮法 371
15.氟化碳提取法 371
16.从血清中去除非特异性血凝抑制物的方法 371
17.肝粉的制备 372
18.弗氏(Freund)佐剂 372
附录三 组织学和细胞学试验 373
I.固定液 373
1.Bouin s固定液 373
2.Zenker s固定液 373
3.Carnoy s固定液 373
4.10%福马林生理盐水固定液 373
Ⅱ.染色 374
1.吖叮橙(Acridine Orange) 374
2.姬姆萨染色 375
3.Feulgen染色 375
4.苏木精-伊红染色 376
5.Castaneda s染色 377
6.麦氏(Mann s)染色 377
7.May-Grūnwald和姬姆萨染色 378
附录四 统计学方法 380
1.平均数 380
2.离势量数 383
3.机率 386
4.标准误 386
5.均数的显著性 387
6.可信限 390
7.变异数分析 390
8.计数资料的显著性测验--x2测验 395
9.直线回归 399
10.附表 401
附录五 其它 408
1.常用实验动物正常体温变动范围 408
2.常用实验动物的正常血象 408
3.离心速度和离心力换算表 409