第一章 引言 1
一、遗传工程的概念 1
二、遗传工程的发展概况 1
三、遗传工程所需的微生物学原理 3
第二章 遗传工程的载体 6
一、质粒载体 6
二、单链噬菌体克隆载体 10
三、双链噬菌体载体 13
四、粘粒载体 20
一、原核生物染色体DNA的提取 23
第三章 DNA的提取 23
二、染色体外DNA的分离 24
三、质粒DNA的快速提取 26
四、真核生物染色体DNA的提取 26
五、DNA浓度和纯度的光学分析 27
第四章 限制性内切酶 29
一、寄主的限制和修饰 29
二、三类限制性内切酶 30
三、限制性内切酶的纯化 35
四、限制性内切酶反应的终止 35
五、识别序列的增加和改造 36
二、DNA分子的可见性 41
一、电泳的原理 41
第五章 凝胶电泳 41
三、电泳图谱 42
四、凝胶系统 43
五、凝胶电泳对外界条件的敏感性 43
六、指示染料 44
七、转移—吸印／杂交分析 44
八、探针的制备——缺口平移法 47
第六章 DNA的连接 49
一、大肠杆菌和T4噬菌体的DNA连接酶 50
二、DNA片段在体内和体外的连接 51
三、影响连接反应的因素 52
四、平齐末端的连接 53
第七章 细菌转化 55
一、细菌转化的原理 55
二、细菌转化的方法 57
三、转化的评估指标 59
第八章 重组转化体的鉴定 61
一、表现型的鉴定 61
二、质粒的提取、纯化和重新转化 63
三、限制性酶切图谱的绘制 63
四、原位（菌落）杂交 65
五、免疫检测法 65
六、重组质粒上的基因定位 69
七、利用翻译系统对目的基因进行深入研究 72
第九章 克隆的策略 74
一、目标DNA性质对制定克隆策略的主导作用 75
二、选择和筛选方法的可利用性 76
三、大鼠前胰岛素原基因的克隆 79
第十章 克隆基因在大肠杆菌（E.coli）中的表达 81
一、促使外源基因表达的原理和技术 81
二、强化外源基因表达的原理和技术 84
三、调控序列的分离及其鉴定 89
一、cDNA的合成和克隆 92
第十一章 cDNA的合成和克隆 92
二、cDNA克隆的鉴定 96
第十二章 基因文库的构建 102
一、外源DNA（即供体DNA）的制备 103
二、载体DNA的制备 108
三、连接、体外包装和扩增 109
四、用噬菌体λ和粘粒两种载体构建基因文库的比较 110
第十三章 DNA的序列分析 111
一、Maxam和Gilbert的序列分析法 112
二、Sanger的序列分析法（末端终止法） 115
三、Sanger法与M13克隆系统相结合 118
四、DNA序列连续测定法 119
第十四章 酵母的遗传工程 124
一、酵母的质粒 125
二、酵母基因的克隆 129
三、利用酵母遗传工程生产乙型肝炎疫苗 132
四、利用酵母研究分子生物学 134
第十五章 植物的基因工程 139
一、Ti质粒 139
二、Ti质粒的改造及其应用 145
三、嵌合基因（chimaericgenes）的构建 150
四、植物细胞的转化 155
五、植物基因转移的成就 156
六、花椰菜花叶病毒 159
七、单子叶植物遗传工程的进展 160
第十六章 哺乳动物的基因工程 164
一、哺乳动物细胞的选择标记 164
二、SV40病毒载体 167
三、其他病毒载体系统 172
四、基因导入的方法 175
五、外源基因在哺乳动物细胞中的表达 177
第十七章 重组DNA技术用于医药工业 181
一、用重组DNA技术生产胰岛素 181
二、用重组DNA技术生产干扰素 186
索引 189