第一章 总论 1
第一节 有关免疫学的基本概念 2
一、抗原 2
1.异物性 2
2.物理性状 3
3.化学组成 4
4.抗原的特异性 4
二、抗体 5
三、补体 7
第二节 免疫细胞化学技术概述 7
一、抗体的制备 7
二、组织固定、包埋和标本制作 8
三、免疫染色 10
四、免疫细胞化学结果的判断 13
一、蛋白质 17
第二章 免疫血清的制备 17
第一节 免疫原的种类 17
二、多糖质 18
三、核酸 18
第二节 免疫原的制备 19
一、组织抗原 19
二、微生物抗原 19
三、免疫球蛋白抗原 19
四、载体抗原 20
1.载体蛋白 20
2.偶联剂 21
五、免疫原的鉴定 22
1.蛋白质抗原 22
三、途径 23
二、动物 23
第三节 制备免疫血清的条件 23
2.微生物抗原 23
一、抗原 23
四、剂量 24
五、次数和间隔 24
六、效价测定 25
七、佐剂 25
第四节 几种常用免疫血清的制备方法 26
一、兔抗人r-球蛋白免疫血清制备法 26
二、兔抗豚鼠C3球蛋白免疫血清制备法 26
三、羊抗兔r-球蛋白免疫血清制备方法 27
四、兔抗人SIgA血清的制备法 27
五、抗IgG和抗IgM的免疫血清制备法 27
六、抗正常人全血清的免疫血清制备法 27
2.不完全抗体 28
3.杂交抗体 28
第五节 抗体 28
1.完全抗体 28
一、抗体的种类 28
4.单克隆抗体 29
二、抗体的纯化 30
1.盐析法 30
2.DEAE-纤维素层析法 32
3.琼脂糖(Agarose)免疫吸附法 33
三、抗体的鉴定方法 34
1.原理 35
2.琼脂处理 35
3.琼脂板制备 35
6.染色 36
4.加样和扩散 36
5.结果分析 36
四、抗体的保存 37
第三章 免疫荧光细胞化学技术 38
第一节 免疫荧光细胞化学的原理 38
一、直接法 39
1.检查抗原法 39
2.检查抗体法 40
二、间接法 40
1. 检查抗体法(夹心法) 40
2. 检查抗体法 40
3.检查抗原法 40
2.间接检查组织内抗原法 41
四、双重免疫荧光标记法 41
1.直接检查组织内免疫复合物法 41
三、补体法 41
五、对照试验 42
1.直接法 42
2.间接法 42
3.补体法 42
第二节 荧光抗体的制备 44
一、荧光素 44
1.异硫氰酸荧光素(FITC) 44
2.四乙基罗达明(RB200) 45
3.四甲基异硫氰酸罗达明(TMRITC) 47
二、荧光素标记抗体的方法 47
1.FITC标记抗体的方法 47
2.四乙基罗达明标记抗体方法 51
3.四甲基异硫氰酸罗达明标记抗体方法 52
1.染色特异性和敏感性的测定 53
三、荧光抗体的质量控制 53
2.F/P比值的测定 54
四、荧光抗体的保存 56
第三节 免疫荧光细胞化学染色方法 56
一、标本制作 56
二、荧光抗体染色方法 56
1.直接法 56
2.间接法 57
3.补体法 58
4.膜抗原荧光抗体染色法 59
5.双重染色法 59
第四节 荧光显微镜检查法 60
一、荧光显微镜 60
三、荧光抗染色法 60
6.荧光抗体再染色法 60
1.光源 61
2.滤色系统 62
3.反光镜 65
4.聚光器 65
5.物镜 66
6.目镜 66
7.落射光装置 66
二、荧光显微镜标本制作要求 67
1.载玻片 67
2.盖玻片 67
3.标本 67
4.封裱剂 67
5.镜油 67
四、荧光图象的记录方法 68
三、使用荧光显微镜的注意事项 68
一、非特异性染色的主要因素 69
第五节 非特异性染色的消除法 69
二、清除非特异性染色的方法 70
1.动物脏器粉末吸收法 70
2.透析法 71
3.葡聚糖凝胶G50柱层析法 72
4.DEAE纤维素柱层析法 72
5.荧光抗体稀释法 73
6.纯化抗原法 73
7.纯化抗体法-免疫吸收法 74
8.伊文氏兰(Evans blue)衬染法 74
第四章 免疫酶细胞化学 77
第一节 酶标抗体法 77
一、酶的种类及其特点 77
1.偶联剂 80
二、酶标抗体的制备 80
2.戊二醛标记法 81
3.过碘酸盐氧化法 83
三、酶标抗体的纯化 85
1.多聚体的分离 85
2.非标记抗体的分离 85
3.亲和层析 86
四、染色方法、原理及步骤 86
1.染色方法及原理 86
2.间接染色法步骤及优点 88
五、酶标抗体的改进 89
1.HRP标记抗体片段技术 89
2.两种酶标记抗体的放大法 90
第二节 非标记抗体酶法 91
1.基本原理 92
一、酶桥法 92
2.染色步骤 93
二、PAP法 94
1.PAP的制备及特征 94
2.PAP法基本原理及染色程序 96
3.操作注意事项 101
4.血清特异性检验 105
5.PAP法的评价 106
6.PAP法的改进 107
7.PAP双重标记法 109
8.PAP法在铺片中的应用 111
第五章 亲和组织化学技术及免疫细胞化学技术的某些进展 115
1.ABC技术 116
二、几种抗生物素-生物素染色法 116
一、基本原理 116
第一节 抗生物素-生物素免疫染色法 116
2.BRAB技术 119
3.LAB技术 120
第二节 葡萄球菌蛋白A(SPA) 121
一、SPA的性质 121
二、SPA的应用 123
三、SPA在免疫细胞化学染色中的应用 124
1.SPA-HRP用于间接法步骤 125
2.SPA-HRP用于PAP法操作步骤 125
3.SPA-HRP的制备 126
第三节 凝集素 127
一、凝集素的特性 128
二、凝集素的应用 128
1.直接法 130
三、凝集素在免疫细胞化学中的应用 130
3.糖-凝集素-糖法 131
2.间接法 131
四、HRP标记凝集素法及抗凝集素抗体的制备 134
1.HRP标记凝集素法 134
2.抗凝集素抗体的制备 135
第四节 免疫细胞化学技术的某些新进展 136
一、光镜免疫金技术 136
1.有关胶体金的基本概念 137
2.免疫金技术 137
二、免疫金银技术 138
1.基本原理 138
2.银显影液的配制 139
3.染色步骤 140
三、半抗原交联抗体法 142
4.评价 142
四、分子杂交免疫细胞化学技术 144
第六章 电子显微镜免疫细胞化学技术 152
一、电子显微镜免疫细胞化学技术概述 152
1.组织固定与取材 152
2.免疫染色 153
3.包埋 155
4.对照试验 161
二、免疫铁蛋白技术 162
1.基本原理 162
2.铁蛋白的提取和纯化 162
3.铁蛋白与免疫球蛋白的结合 163
4.电镜标本的制备方法 164
1.基本原理 165
三、免疫酶细胞化学技术 165
2.电镜标本制备方法 166
四、免疫电镜胶体金标记法 168
1.基本原理与评价 168
2.胶体金标记抗体液的制备 169
3.电镜水平的免疫金染色法 174
4.胶体金标记蛋白A技术(PAg法) 177
5.胶体金双标记技术 179
五、凝集素电镜标记技术 180
第七章 蛋白质和多肽激素的放射免疫测定 185
一、RIA的基本原理 185
2.抗体 187
4.B与F的分离技术 187
3.标记抗原 187
1.标准品 187
二、RIA建立的基本条件 187
5.放射性探测仪器 188
三、放射性碘标技术 188
1.125I与131I的特性 188
2.放射性碘可标记的基团 188
3.常用标记方法 190
4.标记抗原的分离纯化 192
5.标记率和放射性比度的计算 196
6.125I-抗原的免疫活性鉴定 197
7.125I-抗原的贮存 198
四、RIA的抗血清 198
1.抗血清的来源 198
2.抗血清的选择 198
3.抗血清的质量鉴定 200
五、标准曲线 206
2.标准曲线的制做 207
1.RIA的反应系统 207
3.标准曲线的免疫动力学解释 209
4.标准曲线的斜率及其影响因素 211
六、样品制备及其测定 214
1.组织样本制备方法 214
2.血样本制备 215
3.脑脊液的制取 215
4.样品测定加样量的确定 216
5.样品测定 217
七、RIA的质量控制及方法学评价 217
2.质量控制类别 218
3.“效点系统”评分法 218
1.质量控制的目的 218
八、RIA方法的缺点 223
第八章 免疫细胞化学技术在临床病理学中的应用 225
第一节 免疫细胞化学技术在淋巴网状组织肿瘤的诊断与鉴别诊断方面的应用 226
一、正常淋巴网状组织免疫细胞化学 226
二、淋巴网状组织肿瘤的免疫学分型 231
1.B细胞淋巴瘤 231
2.T细胞淋巴瘤 231
3.组织细胞与网状细胞肉瘤 232
4.组合型淋巴瘤 232
5.何杰金氏病 232
6.恶性组织细胞增生症 233
三、鉴别诊断 234
1.恶性淋巴瘤与假性淋巴瘤鉴别 234
2.恶性淋巴瘤与圆细胞未分化癌或肉瘤鉴别 234
第二节 中间丝抗体在临床病理中的应用 235
3.确定少见部位的原发淋巴瘤诊断 235
一、抗角蛋白抗体 237
二、抗波纹蛋白抗体 238
三、抗结蛋白抗体 239
四、抗胶质纤维酸性蛋白抗体 239
五、抗神经丝抗体 240
第三节 S-100蛋白免疫组织化学标记在临床病理诊断中的应用 241
一、S-100蛋白的生物特性及其在正常组织中的分布 241
二、S-100蛋白在肿瘤诊断中的应用 243
1.中枢神经系统肿瘤 243
2.雪旺氏细胞肿瘤 244
3.黑色素细胞肿瘤 245
4.APUD细胞肿瘤 246
5.其它非神经脊起源组织肿瘤 247
三、肿瘤间质中反应性S-100蛋白阳性细胞的意义 248
第四节 凝集素组织化学在肿瘤病理学中的应用 252
一、概述 252
二、凝集素受体的标记方法 253
三、凝集素在肿瘤病理学的应用 254
1.凝集素作为组织分化成熟的标记 254
2.凝集素作为特异性细胞类型的标记 255
3.肿瘤细胞的凝集素受体改变 255
4.不同种瘤的分化标志 257
5.肿瘤生物学行为的标志 258
第五节 肌动蛋白在肿瘤病理诊断中的应用 265
一、梭形细胞肿瘤的鉴别诊断 265
二、肌上皮细胞的病理学意义 266
三、横纹肌肉瘤的诊断 267
第六节 第Ⅷ因子相关抗原在临床病理诊断中的应用 267
三、良性肿瘤 268
一、正常组织 268
二、炎性病变 268
四、恶性肿瘤 269
第七节 免疫细胞化学在内分泌肿瘤诊断中的应用 270
一、垂体前叶腺瘤 270
二、胰岛细胞瘤 271
三、甲状腺肿瘤 271
四、性类固醇激素受体检测及其应用 271
第九章 免疫细胞化学在微生物学和寄生虫学中的应用 284
第一节 在细菌学中的应用 284
一、甲组溶血性链球菌的快速检查法 288
二、脑膜炎双球菌的快速检查法 289
三、致病性大肠杆菌的快速检查法 289
五、钩端螺旋体的检查法 290
四、其他细菌 290
六、梅毒螺旋体的检查法 291
第二节 在病毒学中的应用 293
一、病毒抗原定位 293
二、病毒感染过程 294
三、肿瘤与病毒 294
四、病毒计数 294
五、病毒的快速诊断 295
1.病毒的检查 297
2.抗体的检查 298
第三节 在寄生虫学中的应用 298
二、疟疾 299
3.荧光抗体 299
4.检查方法 299
2.待检血清 299
1.抗原 299
一、血吸虫病 299
1.抗原标本 300
2.待检血清 300
3.荧光抗体 300
4.染色方法 300
5.结果判断 300
第十章 免疫细胞化学在神经科学中的应用 302
一、确定神经递质的性质、定位和分布 302
二、探查和发现新的神经递质 305
三、追踪神经束的行径及其投射区 306
四、区别神经细胞、神经胶质细胞和神经内分泌细胞 307
五、研究神经递质的超微结构定位 309
六、神经递质共存的研究 313
七、个体和种族发育的研究 315
八、与神经组织培养技术相结合进行神经生物科学的研究 316
九、应用于受体的研究 317
十、神经系统的机能研究 318
第十一章 免疫细胞化学技术与放射免疫分析在临床神经精神病学中的应用 322
一、中枢神经系统感染 323
1.脑炎和脑膜炎 323
2.亚急性硬化性全脑炎 325
二、脑肿瘤 325
三、脑血管疾病 327
四、脑外伤 330
五、脑髓鞘疾病 331
1.多发性硬化 331
2.急性坏死性出血性脑病 331
六、锥体外系疾病 331
1.震颤麻痹 331
2.亨廷顿舞蹈病 332
七、癫痫 333
八、肌肉疾病 334
1.多发性肌炎和皮肌炎 334
2.肌红蛋白尿症 334
3.重症肌无力症 335
4.肌营养不良症 336
九、痛症 336
十、痴呆 338
十一、精神病 339
第十二章 免疫细胞化学技术在自身免疫性疾病中的应用 343
第一节 自身抗体的免疫细胞化学检查法 345
一、常规检查法 345
三、荧光显微镜检查 346
第二节 免疫细胞化学技术在自身免疫性疾病诊断中的应用 346
二、对照试验 346
一、抗核抗体 347
1.抗核抗体的荧光形态及临床意义 350
2.ANA的滴度与病情的关系 352
二、双莲DNA抗体(dsDNA)的检测 353
1.用马疫锥虫抗原检测抗dsDNA抗体法 353
2.用短膜虫抗原检测抗dsDNA抗体法 354
3.用酸洗脱鼠肝细胞抗原检测dsDNA抗体法 354
三、抗核仁抗体的检测法 355
四、抗组蛋白抗体的检测法 355
五、抗着丝点抗体的检测 356
六、抗甲状腺自身抗体的检测 358
七、平滑肌抗体的检测 360
八、肝细胞膜抗体的检测 362
十、胃壁细胞抗体的检测 364
九、线粒体抗体的检测 364
十一、胃泌素细胞抗体的检测 366
十二、胰岛细胞抗体的检测 366
十三、抗肾小球和肺泡基底膜抗体的检测 367
十四、抗皮肤成分自身抗体的检测 368
十五、唾液腺外分泌导管上皮自身抗体的检测 370
十六、抗横纹肌自身抗体的检测 371
十七、肾上腺自身抗体的检测 371
十八、类风湿因子的检测 371
十九、其他自身抗体的检测 372
第十三章 免疫细胞化学与图像分析 376
一、应用范围 378
二、灰度 379
三、面积与长度 381
四、图像分析仪工作程序 382
1.标本成像 383
2.图像获取 383
3.加强图像 383
4.检测 383
5.阴影校正 385
6.测量 386
7.资料分析 386
8.其它事项 386
9.没有图像分析仪可否进行图像分析？ 387
10.实例介绍 388
11.图像分析与体视学 390
五、图像分析仪的主要生产厂家简介 393
第十四章 流式细胞光度计在免疫细胞化学中的应用 397
第一节 概述 397
第二节 细胞分析和分离的基本原理 399
第三节 FCM对免疫荧光染色的周围血白细胞的分析 401
一、细胞的制备 402
1.全血染色后溶解红细胞 404
2.红细胞被溶解后再染白细胞 405
3.用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出单个核细胞 405
4.荧光标记抗体的细胞染色 406
二、操作基本方法和图像分析 408
1.使用前的调试和校准 408
2.标本分析 410
三、淋巴细胞亚群的测定及其在临床医学中的意义 416
1.T淋巴细胞亚群的测定：百分数、绝对值以及CD4/CD8比值 418
2.艾滋病以及HTLV-Ⅲ感染 419
3.白血病和淋巴瘤的表现型 421
4.FCM对正常B细胞和B细胞肿瘤的分析 423
附录：免疫细胞化学常用试剂介绍 430
一、固定剂 430
1.4%多聚甲醛-0.1M磷酸盐缓冲液 430
2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 431
3.Bouin s液及改良Buin s液 431
4.Zambonis s(Stefanini s)液 432
5.PLP液 432
6.Karnovsky s液 433
7.0.4%对苯酯 434
8.PFG液 434
9.碳二亚酰胺-戊二醛液 435
10.四氧化锇 436
二、缓冲液 437
1.0.2M磷酸盐缓冲液 437
3.Karasson-Schwlt s磷酸盐缓冲液 438
2.0.01M磷酸盐缓冲生理盐水 438
4.0.5MTris-HCl缓冲液 439
5.Tris缓冲生理盐水 439
6.Triton-TBS(-PBS) 439
7.0.1M二甲胂酸钠缓冲液 440
8.几种常用的不同pH值缓冲液配制表 440
三、显色液 446
1.DAB显色液 446
2.4-氯-1-萘酚显色液 446
3.3-氨基-9-乙基卡唑(AEC)显色液 447
4.TMB显色液 448
四、粘合剂 449
1.铬矾明胶液 449
1.甘油-TBS及甘油-PBS 450
2.甘油-明胶(冻) 450
3.多聚赖氨酸 450
五、封固剂 450
2.甲醛-明胶液 450
3.液体石蜡 451
4.DPX 451
六、酶消化液 451
1.0.1%胰蛋白酶 451
2.0.4%胃蛋白酶 451
3.0.06%Pronase 452
七、其它 452
1.蔗糖溶液 452
2.Triton X-100 453
3.甲醇-H2O2液 454
4.常用生理盐液 454
简字表 457