第一节 超氧阴离子 1
第一章 活性氧的制备 1
第二节 羟自由基 2
第三节 单线态氧 3
第四节 脂自由基 5
第五节 ONOO？ 5
第二章 活性氧的测定方法 7
第一节 电子自旋共振法的应用 7
一、ESR标本处理方法 7
1.冷冻法 7
2.冰冻干燥法 7
3.冷冻成形法 7
二、自旋捕捉技术及样品制备 8
4.直接测定法 8
第二节 羟自由基的测定 9
一、高效液相色谱法 9
二、化学发光法 11
1.邻菲罗啉化学发光法 11
2.酵母化学发光法 12
三、荧光分析法 13
四、分光光度法 14
1.邻二氮菲+Fe2+氧化法 14
2.细胞色素C氧化法 15
3.水杨酸比色法 16
五、气相色谱法 17
1.碘化钾比色法 18
一、分光光度法 18
第三节 过氧化氢的测定 18
2.四氯化钛法 19
3.Fe3+-邻二氮菲分光光度法 20
4.非酶法 21
5.其他分光光度法 22
二、辣根过氧化物酶法 22
1.HRP-酚红法 22
2.HRP-荧光法 23
3.HRP-DCF荧光法 24
4.过氧化物酶-氧化酶法 26
三、NADPH氧化法 27
1.GSH-NADPH氧化法 27
2.Scopoletin-NADPH氧化法 29
2.鲁米诺化学发光法 30
四、化学发光法 30
1.TCPO-ANS化学发光法 30
3.TCPO-TEA化学发光法 31
五、DMTU消耗法 32
六、组织化学法 32
第四节 超氧阴离子的测定 32
一、NBT还原法 32
二、高铁细胞色素C还原法 34
三、荧光法 35
第五节 单线态氧的检测 35
一、发光检测法 36
1.直接检测发光法 36
2.OH？-NaOCl-H2O2-红细胞影泡体系 36
第一节 细胞活力检测 37
3.海萤荧光素发光体系 37
二、ESR法 38
三、荧光分光光度法 39
四、高效液相色谱法 40
一、流式细胞术 41
第六节 呼吸爆发的测定 41
二、共聚焦显微镜法 42
第三章 氧化型低密度脂蛋白 47
第一节 低密度脂蛋白的提纯 47
一、低密度脂蛋白的提取 47
1.超速离心法 47
2.区带离心法 48
3.沉淀法 50
二、纯度鉴定 51
第二节 低密度脂蛋白的氧化 51
一、LDL的氧化修饰 51
1.铜诱导法 51
2.铁诱导法 52
3.巨噬细胞修饰 52
5.丙二醛修饰法 53
4.自由基释放剂法 53
二、LDL氧化修饰度鉴定 54
第三节 氧化型低密度脂蛋白定量 55
一、Ox-LDL的检测 56
二、自身抗体的测定 57
第四章 脂质过氧化 60
第一节 脂质过氧化底物的检测 60
一、氧气的利用 60
二、多不饱和脂肪酸 60
第三节 TBA反应物质的检测 61
一、ESR及自旋捕集法 61
二、化学发光法 61
第二节 脂自由基的检测 61
一、TBA比色法 62
二、TBA荧光法 64
三、组织中过氧化脂质的测定 65
四、血清LPO测定 66
第四节 醛类终产物的检测 67
一、DNPH法 67
二、HPLC法 68
三、GC-MS法 69
四、CHD法 70
第五节 脂氢过氧化物的检测 71
一、碘量法 71
二、谷胱甘肽过氧化物酶法 73
三、FOX法 74
四、氧化还原比色法 77
五、亚甲基蓝法 78
六、环加氧酶法 79
七、二氧荧光素法 81
第六节 荧光产物的检测 81
一、组织匀浆与亚细胞成分中的荧光物质测定 81
二、血清水溶性脂质过氧化物测定 83
一、乙烷的测定 84
第七节 烃类气体的测定 84
二、戊烷的测定 86
第八节 共轭二烯的检测 87
第九节 蛋白质羧基化合物的检测 88
一、氢硼化物还原法 89
二、DNPH比色法 90
三、免疫印迹法 91
第十节 非酶糖化蛋白的测定 94
一、硫代巴比妥酸法 95
二、果糖胺测定 96
三、改良过碘酸钠法 97
四、葡萄糖苯脎分光光度法(GPS法) 98
五、荧光法 99
六、电泳及等电聚焦法 100
1.等电聚焦电泳法 100
2.琼脂糖电泳法 101
七、离子交换层析法 102
八、亲和层析法 102
九、放射免疫法(RIA) 103
十、酶联免疫测定法(ELISA) 103
第五章 超氧化物歧化酶 106
第一节 酶活性测定 106
一、直接法 106
2.肾上腺素法 107
1.脉冲辐射分析法 107
3.改良Marklund法 108
4.联苯三酚自氧化法 110
5.没食子酸法 112
6.6-羟多巴胺法 113
7.亚硫酸盐法 114
二、一般化学法 114
1.细胞色素C还原法(McCord法) 114
2.核黄素-NBT还原法 117
3.黄嘌呤氧化酶-NBT还原法 118
4.MTT法 120
5.亚硝酸盐形成法 121
6.化学发光法 123
7.碱性二甲亚砜法 125
8.四硝基甲烷还原法 126
三、光氧化增强法 126
四、电化学法 128
五、极谱氧电极法 128
六、免疫学方法 130
1.液相竞争放免法(RIA) 130
2.化学发光免疫分析法(CLIA) 132
3.ELISA方法 134
七、电泳法 135
八、原位法 136
1.氰化物抑制法 138
一、MnSOD活性的测定 138
第二节 MnSOD、FeSOD的鉴别与活力测定 138
2.SDS法 139
3.不同pH值法 139
4.DDC法 139
一、CuZnSOD的纯化 140
1.从牛红细胞提纯CuZnSOD 140
二、FeSOD活性测定 140
5.其他方法 140
第三节 SOD的纯化 140
2.从植物中提取CuZnSOD 141
3.从酵母中提取SOD 141
二、MnSOD的纯化 142
三、FeSOD的纯化 143
四、SOD纯度鉴定 144
一、DTNB直接显色法 147
第六章 谷胱甘肽过氧化物酶 147
第一节 含硒酶活性测定 147
二、酶偶联法 151
三、荧光测定法 152
四、PHGPx酶活性测定方法 155
第二节 不含硒酶活性测定 155
第三节 细胞外GPx酶含量测定 155
第四节 酶的提取与纯化 156
一、亲和层析法 156
二、一般层析法 159
三、人红细胞GPx的纯化 160
第七章 过氧化氢酶 163
第一节 活性测定 163
一、钼酸铵比色法 163
二、快速简便法 165
三、紫外速率直接法 166
四、改良比色法 168
五、过硼酸盐底物法 169
六、化学发光法 170
七、氧电极法 171
八、检压测定法 173
九、滴定法 175
十、原位负染色法 176
第二节 提取与纯化 177
一、酵母过氧化氢酶的提纯 177
二、组织过氧化氢酶的提纯 179
第八章 谷胱甘肽代谢酶类 182
第一节 谷胱甘肽还原酶 182
一、活性测定 182
1.分光光度法 182
2.DTNB 183
3.电泳法 185
4.荧光法 186
二、分离与纯化 188
1.红细胞谷胱甘肽还原酶的纯化 188
2.组织谷胱甘肽还原酶的纯化 190
3.酵母谷胱甘肽还原酶的提纯 191
4.两步层析法 192
第二节 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 192
一、活性测定--放射性同位素法 193
二、提取与纯化 195
第三节 谷胱甘肽合成酶 196
一、活性测定--放射性同位素法 196
二、提取与纯化 198
第九章 谷胱甘肽转硫酶 201
第一节 活力测定 201
一、动力学法 201
二、CDNB比色法 202
三、mBrB法 204
四、BPO法 205
五、NBD-Cl法 206
第二节 同工酶分析 207
一、放射免疫分析 207
二、免疫金银法 208
三、等电点聚焦电泳法 209
四、碘染凝胶法 210
五、负染凝胶法 211
第三节 分离与纯化 212
一、Reddy s法 213
二、碱性GST的纯化 215
三、酸性GST的纯化 215
1.亲和层析法 215
2.改良Kwak和Bark法 217
第十章 一氧化氮与一氧化氮合酶 221
第一节 一氧化氮含量测定 221
一、微电极法 221
二、EPR法 223
三、Griess试剂法 224
四、改良微盘测定法 226
五、化学发光法 228
六、液体充气鲁米诺化学发光法 229
七、荧光分光光度法 231
八、NACNO荧光分析法 233
九、硝酸盐还原酶法 234
十、硝酸盐还原酶偶联法 235
十一、示波极谱测定法 237
十二、催化光度法 239
十三、全血NO代谢产物的测定 240
十四、流式细胞术测定NO含量 242
一、NOS样品制备 243
1.组织匀浆 243
第二节 NOS活性测定 243
2.Bredt s法纯化NOS 244
3.Mayer s法纯化NOS 244
4.硫酸铵沉淀法制备NOS 245
二、测定方法 246
1.化学发光法 246
2.放射强度测定法 247
3.血红蛋白法 249
4.荧光分析法 250
5.薄层层析法 251
6.NADP+检测法 252
一、黄递酶组化法 253
第三节 NOS组化技术 253
二、荧光染色法 254
第四节 ONOO？的检测 255
一、直接法 255
二、间接法 256
一、改良比色法 259
第一节 还原型谷胱甘肽测定 259
第十一章 谷胱甘肽 259
二、Beutler改良法 260
三、荧光测定法 261
四、改良荧光法 262
五、高效液相层析法 263
第二节 总谷胱甘肽的测定 264
一、循环法 264
二、Tietze s法 266
第三节 氧化型谷胱甘肽的测定 268
一、乙二醛酶Ⅰ法 268
二、NEM过柱法 269
三、碱水解法 269
四、荧光法 270
五、2-VP法 271
第十二章 其他抗氧化物质 273
第一节 总抗氧化能力 273
一、ORAC测定 273
二、FRAP测定 275
三、TRAP测定 276
第二节 抗坏血酸 277
一、分光光度法 278
1.动力学比色法 279
2.DNPH比色法 280
3.固蓝盐B分光光度法 282
二、荧光分析法 283
三、气相色谱法 285
四、氧化酶法 285
五、高效液相色谱法 285
1.HPLC/uv法 286
2.HPLC/EC法 286
第三节 维生素E 287
一、荧光法 287
二、HPLC-分光光度法 289
三、HPLC-荧光分析法 290
第四节 辅酶Q 292
第五节 铜蓝蛋白 293
一、DPPD法 293
二、TMB法 294
三、ELISA法 295
四、放免法 296
五、火箭电泳法 297
第六节 尿酸 298
一、磷钨酸还原法 298
二、Fe2+氧化比色法 298
三、结晶紫比色法 300
四、340mm分析法 301
五、293mm分析法 302
六、DHBS比色法 303
七、耗氧率分析法 304
第十三章 细胞氧化损伤 307
第二节 DNA损伤检测 308
一、DNA断裂的定性分析 308
二、DNA断裂的定量分析 308
1.二苯胺法 308
2.荧光分光光度法 309
3.Comet法 310
第三节 细胞膜流动性测定 311
一、RT-PCR 315
第十四章 氧化应激与基因表达 315
第一节 基因表达的检测 315
二、斑点(狭缝)杂交 316
三、其他方法 321
第二节 NF-kB的检测 321
一、EMSA法 321
二、共聚焦显微镜法 322
三、原位法 323
第十五章 相关研究方法 326
一、脂质体转染方法 326
二、Lowry s法测蛋白 327
三、细胞数定量 328
附录 329
一、离心机转速与离心力的换算 329
二、常用缓冲液的配制 329
1.常用缓冲液介质的pKa值 329
2.Tris-HCl缓冲液 329
3.温度对50mmol/L Tris-HCl缓冲液pH值的影响 330
4.磷酸钾缓冲液 331
5.磷酸钠缓冲液 331
6.甘氨酸缓冲液 331
7.硼砂-盐酸缓冲液 332
10.柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液 333
9.巴比妥钠-盐酸缓冲液 333
8.硼砂-硼酸缓冲液 333
11.柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液 334
12.醋酸盐缓冲液 334
13.碳酸盐缓冲液 334
14.咪唑-HCl缓冲液 335
15.KCl-HCl缓冲液 335
16.KCl-NaOH缓冲液 336
17.马来酸氢钠-NaOH缓冲液 336
18.平衡盐溶液 336
1.放射性核素测量单位 337
2.放射性核素衰变表 337
四、放射性核素数据 337
三、重铬酸盐清洁液配制方法 337
五、常见市售酸碱的浓度 338
六、常用电泳缓冲液 338
七、凝胶加样缓冲液 339
八、常用层析数据 340
1.常用阴离子交换纤维素 340
2.阳离子交换纤维素 340
3.琼脂糖凝胶的技术数据 340
4.葡聚糖凝胶(Sephadex)的技术数据 340
5.各种凝胶允许的最大操作压 341