第一章 绪论 1
第一节 概述 1
一、毛细管电泳的沿革 1
二、毛细管电泳发展新动向 2
第二节 电泳与色谱 3
第三节 电细管电泳分离模式 4
第四节 毛细管电泳的特点 5
参考文献 7
第二章 毛细管电泳的基本理论 9
第一节 分离过程 9
一、分离的一般过程 9
二、数学描述 10
第二节 基础概念 12
一、电泳、淌度、绝对淌度与有效淌度 12
二、电渗、电渗率及合淌度 14
三、两相分配与权均淌度 16
四、分离模式新归属 17
第三节 分析窗口 17
第四节 理论效率及其表示 18
一、效率方程 18
二、峰加宽因素 19
(一)初始区带宽度 19
(二)分离加宽 19
(三)极限效率 21
参考文献 22
第三章 毛细管电泳仪器系统 23
第一节 毛细管电泳仪基本结构 23
第二节 进样系统 24
一、基本构成 24
二、进样方法 25
第三节 毛细管清洗和缓冲液填灌机构 27
第四节 电源及其回路 28
第五节 毛细管及其温度控制 28
一、检测窗口制作 29
二、温度控制 29
第六节 检测及其数据记录与处理系统 30
一、检测 30
(一)紫外吸收 30
(二)激光诱导荧光 31
二、数据记录与处理 35
参考文献 36
第四章 分离条件选择策略 38
第一节 毛细管电泳模式的选定 38
第二节 基本操作条件选择 39
一、电泳电压 39
二、电泳温度 40
三、毛细管及其洗涤 41
四、进样与聚焦进样 42
(一)电聚焦 42
(二)pH聚焦 43
(三)色谱浓集 44
五、检测条件 44
第三节 分离介质选择 46
一、毛细管区带电泳介质选择 46
(一)pH及其缓冲试剂 46
(二)添加剂 48
(三)溶剂 49
二、毛细管凝胶电泳与非胶筛分介质选择 49
三、胶束电动毛细管色谱介质选择 51
(一)表面活性剂选择原则 51
(二)表面活性剂搜寻策略 53
(三)胶束修饰及其他 53
四、其他模式的介质选择 54
第四节 条件选择流程 55
参考文献 56
第五章 毛细管制作技术 58
第一节 涂层技术 58
一、动态吸着方法 58
二、物理涂布技术 59
三、化学涂层技术 60
(一)活性基团引入 60
(二)引入目标涂层试剂 62
四、溶胶-凝胶技术 64
五、吸附-化学交联 65
第二节 凝胶毛细管制备 65
一、基本问题 65
二、解决策略 66
三、琼脂糖凝胶毛细管的制备 66
四、聚丙烯酰胺凝胶毛细管的制备 67
(一)基础 67
(二)高压灌胶 69
(三)等速电泳灌胶法 70
(四)低压控温悬挂聚合灌胶法 70
五、梯度聚丙烯酰胺凝胶毛细管制备 72
第三节 电色谱毛细管的制备 74
一、柱塞制作方法 74
二、填充柱的制备 75
第四节 特殊技术 76
参考文献 78
第六章 电渗控制 80
第一节 理论控制方法 80
第二节 实用控制方法 81
一、添加剂法 81
(一)增粘剂 82
(二)阳离子 82
(三)两性有机离子及中性有机物 84
二、管壁涂层法 85
第三节 外加电磁场控制法 86
一、电场控制装置 86
二、电渗的单电源四电极控制 89
(一)控制原理 89
(二)控制结果 91
第四节 电渗电场控制的理论与结论 94
第五节 电渗控制在分离中的应用 97
第六节 常用电渗测定方法 99
参考文献 100
第七章 手性分离 103
第一节 毛细管电泳手性分离原理 103
一、手性分离基本策略 103
二、手性消除 103
三、构建手性环境 104
(一)毛细管区带电泳 105
(二)胶束电动色谱 107
(三)毛细管凝胶电泳 109
(四)毛细管电色谱 110
第二节 分离条件选择 110
一、基本原则 110
二、选择策略 111
第三节 手性毛细管电泳的应用与发展动向 115
参考文献 117
第八章 蛋白质分析 119
第一节 基本概念 119
一、蛋白质的淌度 120
二、等电点 121
三、吸附 121
第二节 蛋白质的吸附与控制 121
一、管壁情化处理 122
二、样品处理 122
三、缓冲液处理 123
第三节 蛋白质的尺寸分离 124
一、筛分介质的选择 124
二、缓冲体系的选择 127
三、其他条件 130
第四节 蛋白质等电聚焦 130
一、一步法 131
二、两步法 131
第五节 蛋白质的亲和毛细管电泳 132
一、基本原理 132
二、基本方法 132
第六节 微量制备 133
一、单次收集 134
二、多次重复收集 134
三、多次收集-单次纯化 134
第七节 应用举例 134
一、促红细胞生成素肽谱(指纹图) 134
二、分子量测定 136
三、等电点测定 139
四、其他应用 140
参考文献 141
第九章 DNA及其碎片分析 143
第一节 DNA及其片段分离基础 143
一、毛细管电泳模式选择 143
二、筛分介质 144
三、缓冲体系 145
四、样品处理、进样和检测方法 147
第二节 基本应用 148
一、核苷酸分析 148
二、寡聚核苷酸与单链DNA(ssDNA)片段分离 151
三、双链DNA(dsDNA)分离 154
(一)小片段dsDNA分离与应用 154
(二)大片段DNA(〉2kbp)分离 159
第三节 DNA测序 160
一、DNA测序战略 160
二、DNA比长测序原理 160
三、毛细管电泳测序基本流程 163
参考文献 169
第十章 糖及其缀合物分析 172
第一节 概述 172
一、糖的分类 172
二、糖分析的问题及进展 172
第二节 糖CE的基本策略--使糖带电 173
一、络合带电 173
二、强碱电离 176
三、衍生带电 176
第三节 糖的检测 177
一、非衍生糖的检测 177
(一)电化学检测 177
(二)紫外-可见吸收检测 178
(三)荧光或激光诱导荧光检测 179
二、糖的衍生 179
第四节 糖的电泳分离 182
一、基本分离条件 182
二、单糖电泳 182
三、寡糖电泳 184
第五节 糖缀合物的电泳分离 186
一、神经节苷指的分离 186
二、糖蛋白微观不均一性分析 191
参考文献 199
第十一章 小离子与大细胞分离 201
第一节 红细胞电泳 201
一、背景 201
二、红细胞的特点与电动原理 202
三、细血球的制备 203
四、电泳操作 203
五、基本结果 204
六、血红细胞电泳的问题与克服方法 206
七、其他颗粒物电泳 207
第二节 单细胞分析 207
一、单细胞进样技术 208
(一)插入(打孔)取样 208
(二)整细胞进样 210
二、应用实例 211
(一)单巨细胞5-羟色胺的释放和残留测定 211
(二)单细胞氨基酸柱上衍生CE分析 212
第三节 小离子电泳 213
一、检测 213
(一)直接检测 213
(二)间接紫外检测 216
二、结束语 218
参考文献 219
符号表 223