第一章 概论 1
第一节 非放射性基因诊断技术的概述 1
第二节 DNA探针的非放射性标记 10
第三节 寡核苷酸的人工合成 23
第二章 染色体DNA的制备 36
第一节 染色体DNA分离的原理 36
第二节 外周血(骨髓)的DNA提取 36
第三节 培养细胞的DNA提取 39
第四节 组织DNA的提取 40
第五节 由微量及特殊标本中制备染色体DNA 41
第六节 DNA的浓度测定 43
第三章 细胞总RNA的制备 46
第一节 非超离心一步法 46
第二节 氯化锂沉淀法 48
第三节 超离心法 49
第四节 由血清中提取病毒RNA 51
第五节 总RNA制品的质量控制 52
第四章 重组质粒DNA的制备与DNA片段的回收 54
第一节 质粒DNA的转化 54
第二节 质粒DNA的提取 61
第三节 DNA片段的回收 68
第五章 DNA的非放射性标记 73
第一节 光促DNA的生物素标记 73
第二节 酶促DNA的生物素标记 74
第三节 生物素DNA探针的分离纯化 76
第四节 生物素探针的显色灵敏度的检测 77
第六节 DNA非放射性标记法 79
第五节 地高辛标记DNA 79
第六章 寡核苷酸的非放射性标记 94
第一节 酶促生物素标记寡核苷酸 94
第二节 酶促地高辛标记寡核苷酸 94
第三节 化学法生物素标记寡核苷酸 95
第四节 酶标寡核苷酸 97
第五节 生物素(地高辛)寡核苷酸的显色灵敏度测定 99
第六节 非放射性标记寡核苷酸探针 101
第七章 非放射性探针的斑点杂交 109
第一节 生物素DNA探针杂交灵敏度测定 109
第二节 HRP标记DNA探针的RNA斑点杂交 111
第三节 生物素(地高辛)寡核苷酸探针的斑点杂交 114
第四节 HRP标记寡核苷酸探针的斑点杂交 115
第五节 PCR产物的反相杂交 117
第八章 非放射性标记探针的Soulhern印迹杂交 119
第一节 DNA的限制性内切酶酶解 119
第二节 DNA酶解片段的电泳分离 120
第三节 Southern转移 120
第四节 生物素探针杂交 121
第五节 地高辛标记探针的杂交 121
第六节 HRP标记探针作DNA指纹图 121
第九章 地高辛标记DNA探针的Northern印迹杂交 128
第十章 细胞原位杂交 131
第一节 概述 131
第二节 细胞原位杂交技术：生物素--抗生物素蛋白-AP显色法 131
第三节 细胞核原位杂交技术：生物素--间接免疫荧光法 134
第二节 染色体原位杂交技术：生物素-抗生物素蛋白-AP显色法 139
第一节 概述 139
第十一章 染色体原位杂交 139
第三节 染色体原位杂交技术：生物素--间接免疫荧光法 143
第四节 有关染色体原位杂交的一些技术问题 146
第五节 染色体原位杂交的应用 147
第十二章 非放射性核酸标记物的显示 149
第一节 生物素-抗生物素蛋白-HRP显色体系 149
第二节 生物素-链抗生物素蛋白-AP显色体系 151
第三节 地高辛-抗体-AP显色体系 153
第四节 碱性磷酸酶化学发光检测体系 154
第十三章 聚合酶链反应 156
第一节 基本原理 156
第二节 耐热DNA聚合酶 157
第三节 DNA扩增仪 157
第五节 PCR试剂的制备 158
第四节 DNA样本 158
第六节 引物和探针的选定和纯化 159
第七节 PCR的操作 160
第八节 注意事项 161
第十节 PCR技术的应用 161
第九节 PT/PCR 162
附录 166
一、常用试剂的配制 166
(一)饱和酚 166
(二)氯仿--异戊醇 166
(三)供配制各种溶液用的贮存母液 166
(四)限制酶水解缓冲液 169
(五)常用电泳缓冲液 169
(七)抗菌素液 170
(六)常用凝胶载样缓冲液 170
(八)液体培养基 171
二、有关实验技术 173
(一)玻璃及塑料器皿的硅化 173
(二)菌种的保存 173
三、常用单位的换算 174
(一)重量换算 174
(二)A260单位的换算 174
(三)摩尔的换算 174
(四)蛋白质的换算 174
四、DNA片段标准物 175
(一)pBR322酶切片段 175
(六)核酸碱基对与分子量的换算 175
(五)常见核酸的分子量 175
(二)Lambda噬菌体DNA酶切片段 176
(三)ФX174酶切片段 176
五、常用名词缩写和简称 176
(一)抗生素 176
(二)测量单位 177
(三)分子生物学一些名词与试剂 177
(四)氨基酸 178
六、生化技术补充资料 178
(一)遗传密码表 178
(二)磷酸盐缓冲液 179
(三)酸碱浓度 179
(四)离心速度与离心力的换算 180
(五)限制性内切酶 181