第一篇 植物制片技术 2
第一章 植物制片的目的和方法概述 2
第一节 植物制片的目的、类型和方法 2
第二节 植物制片的一般流程 3
一、一般制片的步骤 4
二、石蜡制片的主要步骤 4
三、半薄切片的主要步骤 5
第三节 常用仪器、用具、药品 5
一、常用仪器 5
二、常用实验用具 6
三、常用文具 6
四、药品及染料的规格 6
第四节 制片前的准备工作 7
一、玻璃器皿的清洁 7
二、实验计划、制片日程表 8
第二章 石蜡制片法 9
第一节 材料的选择与分割 9
一、取样 9
二、植物器官的分割 10
三、染色体制片取样 11
第二节 固定与保存 11
一、固定的原理和方法 12
二、固定液 13
三、固定操作步骤 15
四、材料的冲洗 15
五、固定时需要注意的问题 16
六、常用器具 17
第三节 脱水 17
一、脱水的目的 18
二、常用的脱水剂及脱水与复水方法 18
三、脱水时注意事项 18
第四节 透明 19
一、透明的目的 19
二、常用的透明剂 19
三、透明的方法 19
第五节 浸蜡 20
一、浸蜡的目的 20
二、浸蜡方法和步骤 20
第六节 包埋 21
一、包埋剂 21
二、石蜡的种类 21
三、石蜡的选择 22
四、各级石蜡的配制与包埋前的准备 22
五、包埋方法 23
第七节 切片 24
一、切片机、切片刀种类及应用 25
二、切片机的组成与使用 25
三、切片刀的准备 26
四、蜡块的分割、修整与固着 27
五、切片方法与步骤 27
六、石蜡切片过程易出现的问题及解决的办法 27
第八节 展片与粘片 28
一、展片、粘片 28
二、常用粘贴剂及其配制 29
三、展片、粘片方法及注意事项 30
第九节 脱蜡与透明 30
一、脱蜡与透明 30
二、石蜡制片中常用的脱蜡剂与透明剂 31
三、脱蜡方法 31
第十节 染料与染色 31
一、染色的目的 31
二、染料的分类 31
三、几种常用染料的性质及配制 32
四、染色原理简介 36
五、一般的染色方法 36
六、染色注意事项 37
第十一节 封藏 39
一、封藏的目的 39
二、封藏剂种类 39
三、封藏方法 39
第三章 石蜡制片实例 40
一、根尖纵切片制片法 40
二、茎的纵、横切片制片法 41
三、叶横切片制片法 43
四、花芽纵切片制片法 44
五、子房纵切片制片法 45
六、花生子叶横切片制片法 47
七、线粒体制片法——雷加特氏法 47
第四章 其他切片法 49
第一节 徒手切片法 49
一、徒手切片概述 49
二、徒手切片实例 49
第二节 冰冻切片法 50
一、冰冻切片概述 50
二、冰冻切片机 50
三、冰冻切片方法 51
四、冰冻切片注意事项 51
第三节 滑走切片法 51
一、滑走切片法概述 51
二、滑走切片机组成与使用 52
三、滑走切片法研究木材结构注意事项 52
四、滑走切片实例 54
第五章 非切片制片法 56
第一节 压片、涂片制片法 56
一、压片、涂片制片方法及在植物学研究中的应用 56
二、压片制片法 56
三、涂片制片法 58
第二节 整体制片法 59
一、整体透明法 60
二、蚕豆叶或鸭跖草叶表皮制片 62
三、小麦叶表皮制片 62
四、棉胚乳整体制片 63
第三节 离析法 64
一、木材解离制片 64
二、胚囊酶法分离技术 65
第六章 半薄切片、超薄切片与扫描电镜样品制备 67
第一节 半薄切片和超薄切片法常用试剂 67
一、几种常用固定液的配制 67
二、脱水剂 69
三、渗透剂 69
四、包埋剂 69
五、常用染料 71
第二节 半薄切片制样方法 73
一、半薄切片方法简介 73
二、半薄切片制样步骤 73
三、半薄切片法在植物学研究中的应用 77
第三节 超薄切片制样方法 78
一、超薄切片制样步骤 79
二、超薄切片法在植物学研究中的应用 84
第四节 扫描电子显微镜样品的制备 85
一、整体样品表面结构观察的制样方法 85
二、扫描电子显微镜制样中的关键步骤 86
三、扫描电子显微镜在植物学研究中的应用 89
第五节 冷冻超薄切片制样方法简介 90
一、冷冻超薄切片原理 90
二、冷冻超薄切片方法 90
三、低温包埋技术 92
四、冷冻超薄切片在植物学研究中的应用 94
第七章 原位杂交与组织化学 95
第一节 原位杂交技术 95
一、植物染色体原位杂交技术 95
二、RNA原位杂交技术 100
第二节 组织切片原位PCR 104
一、原位PCR技术的基本原理 104
二、基本类型 104
三、原位PCR基本步骤 105
第三节 植物组织化学 106
一、核酸的测定 106
二、细胞内含物的测定 107
三、细胞壁物质的测定 109
第四节 GUS及荧光检测 110
一、GUS组织化学染色 110
二、免疫组织化学检测 111
三、非免疫荧光标记 111
第二篇 显微镜与显微摄影技术 114
第八章 显微镜 114
第一节 显微镜基本知识 114
一、显微镜的种类 114
二、透镜成像的基本知识 115
三、光路简介 116
四、复式显微镜结构原理 116
五、显微镜的参数 117
第二节 显微镜的结构和性能 120
一、光学系统 120
二、机械部件 123
三、推进器和显微测微尺 125
四、显微镜的保养 127
五、显微镜的维护 128
第三节 几种常用显微镜简介 131
一、复式显微镜的原理、结构与使用 131
二、体视显微镜的原理、结构与使用 135
三、荧光显微镜的原理、结构与使用 141
四、倒置显微镜的原理、结构与使用 147
五、激光共聚焦显微镜简介 150
六、电子显微镜的原理、结构与使用 150
第四节 几种显微技术的应用 156
一、荧光显微术 157
二、相差显微术 159
三、微分干涉术 161
四、偏光显微术 164
五、暗视野显微术 166
第九章 显微摄影成像装置 168
第一节 摄影和照相机的发展历史 168
一、摄影术的含义和发明 168
二、照相机的发明和发展 169
第二节 照相机的类型和结构 170
一、照相机的类型 170
二、照相机的主要结构 172
第三节 照相机的使用方法 174
一、曝光和曝光量 174
二、调焦 175
三、控制景深 176
四、控制清晰度 176
五、数码相机简介 177
六、CCD相机简介 183
第十章 显微摄影技术 184
第一节 显微摄影技术概论 184
一、图像采集 184
二、图像存储 184
三、图像处理 185
四、图像转换 185
五、显微成像技术的展望 185
第二节 近距离摄影 185
一、构图 186
二、测光、曝光 186
三、表现力 186
四、近距离拍摄实例 186
五、消费型相机佳能Power ShotProl结构功能简介 187
第三节 小物体（微距）摄影 188
一、正确操控相机 188
二、微距拍摄实例 190
三、专业数码单反相机NikonD200结构功能简介 191
第四节 超微距摄影（解剖镜摄影） 194
一、超微距摄影装置 194
二、超微距摄影实例 195
第五节 高倍率显微摄影（显微镜摄影） 197
一、高倍率显微摄影装置 197
二、高倍率显微摄影实例 198
第六节 获得高质量显微图像与常见拍摄问题分析 199
一、相机握持的方式 200
二、如何判别一张模糊的图像 201
三、显微摄影采用的器材 201
四、如何虚化背景、突出主体 202
五、如何在暗弱光线下不使用闪光灯进行拍照 202
六、怎样合理使用曝光补偿 202
七、如何微距拍摄具有大面积绿色叶片背景的小花 203
八、怎样正确使用相机的白平衡 203
九、解剖镜下（超微距）摄影如何调光 203
十、高倍率显微摄影如何正确调焦 203
十一、Photoshop软件后期处理时如何适度锐化 204
十二、Photoshop软件后期处理时如何去除数码图像阴霾 204
第十一章 显微图像分析处理 205
第一节 显微图像处理 205
一、显微图像获得的几种方式 205
二、图像存储格式 205
三、图像处理方法 206
四、图像输出方式 208
五、发表文章电子图版的基本要求 208
第二节 专业显微图像处理分析软件 208
一、SimplePCI软件 208
二、Image-Pro Plus（IPP）软件 209
三、MetaMorph（MM）软件 211
四、Cytogenetics细胞遗传学工作站 212
五、两款免费的专业显微图像分析软件 212
六、显微图像分析对硬件的基本要求 213
第三篇 植物显微技术实验指导 216
实验一 石蜡制片法（一） 216
一、实验目的与原理 216
二、实验材料 216
三、实验试剂及用具 216
四、操作步骤 216
五、实验效果 218
实验二 石蜡制片法（二） 219
一、实验目的与原理 219
二、实验材料 219
三、实验试剂及用具 219
四、包埋的操作步骤 219
五、包埋的效果 221
实验三 石蜡制片法（三） 222
一、实验目的与原理 222
二、实验材料 222
三、实验试剂及用具 222
四、操作步骤 222
五、实验结果分析 224
实验四 石蜡制片法（四） 225
一、实验目的与原理 225
二、实验材料 225
三、实验试剂及用具 225
四、操作步骤 225
五、实验结果分析 227
实验五 半薄切片法 228
一、实验目的与原理 228
二、实验材料 228
三、实验试剂及用具 228
四、操作步骤 228
实验六 超薄切片法 232
一、实验目的与原理 232
二、实验材料 232
三、实验试剂及用具 232
四、操作步骤 232
五、实验结果 233
实验七 冰冻切片法 234
一、实验目的与原理 234
二、实验材料 234
三、实验试剂及用具 234
四、操作步骤 234
五、冰冻切片实例：拟南芥花序轴横切片 235
六、冰冻切片法中影响样品形态的问题原因及解决方法 236
实验八 原位杂交技术 237
一、实验目的与原理 237
二、实验材料 237
三、实验试剂及用具 237
四、操作步骤 237
五、实验结果 240
实验九 显微镜和显微摄影（一） 241
一、实验目的与原理 241
二、实验材料 241
三、实验仪器 241
四、操作步骤 241
实验十 显微镜和显微摄影（二） 245
一、实验目的与原理 245
二、实验材料 245
三、实验仪器 245
四、操作步骤 245
实验十一 显微图像分析处理的基本方法 249
一、实验目的与原理 249
二、实验材料 249
三、实验仪器 249
四、操作步骤 249
附录1几种常用的固定液 251
附录2几种常用的脱水剂及脱水方法 253
附录3几种常用的透明剂及透明方法 253
附录4几种常用的粘贴剂、封藏剂与包埋剂 254
一、粘贴剂 254
二、封藏剂 254
三、包埋剂 254
附录5几种缓冲液的配制 255
一、原位杂交用缓冲液的配制 255
二、半薄切片用缓冲液的配制 255
附录6几种常用染料的性质及配制 256
一、染料 256
二、常用染料染色对象 256
主要参考文献 258