第一篇 生物化学实验室规则及基本操作 1
1 实验室规则 1
2 预习报告要求 1
3 实验记录要求 1
4 实验报告书写要求及参考格式 2
4．1实验报告的格式 2
4．2实验报告的内容 2
4．3实验结果 3
5 仪器的清洗与清洁 3
5．1初用玻璃仪器的清洗 3
5．2使用过的玻璃仪器的清洗 3
5．3石英和玻璃比色皿的清洗 3
5．4塑料器皿的清洗 3
5．5玻璃和塑料器皿的干燥 4
6 清洗液的配制及使用 4
6．1铬酸洗液的配制 4
6．2其他洗涤液 4
7 移液器的种类和使用 4
7．1滴管 4
7．2移液管（吸管） 5
7．3微量进样器 5
7．4自动取液器 5
8 定量容器的种类和使用 6
8．1量筒、量杯 6
8．2容量瓶 7
9 溶液的混匀 7
9．1搅拌 7
9．2旋转 7
9．3弹打 7
10 实验室意外情况及处理措施 8
10．1着火 8
10．2爆炸 8
10．3中毒 9
10．4外伤 9
10．5触电 10
第二篇 基本生化实验技术 11
1 分光光度技术 11
1．1紫外和可见光光谱 11
1．2荧光光度分析 17
1．3原子吸收光谱 18
2 电泳技术 19
2．1电泳技术总论 19
2．2纸电泳和乙酸纤维薄膜电泳 23
2．3聚丙烯酰胺凝胶电泳 23
2．4琼脂糖凝胶电泳 28
2．5免疫电泳 29
2．6等电聚焦电泳 30
2．7毛细管电泳 31
2．8电泳结果处理 34
3 色谱技术 36
3．1色谱技术概述 36
3．2凝胶色谱 42
3．3离子交换色谱 50
3．4亲和色谱 56
3．5具体的一些色谱方法 62
3．6高效液相色谱 66
4 PCR技术 70
4．1 PCR基本原理 70
4．2 PCR的基本过程 70
4．3 PCR实验技术要点 71
4．4提高PCR扩增特异性 73
5 膜分离技术 74
5．1透析 74
5．2超滤 75
6 免疫技术——酶联免疫吸附测定法（ELISA） 76
6．1原理 76
6．2操作要点 76
7 生物大分子制备技术 81
7．1概述 81
7．2生物大分子制备的前处理 82
7．3生物大分子的分离纯化 84
7．4样品的保存 85
第三篇 实验部分 87
第一部分 糖类实验 87
实验一 还原糖和总糖的测定（3，5-二-硝基水杨酸法） 87
实验二 可溶性总糖的蒽酮比色法测定 88
实验三 费林试剂法测定总糖 89
实验四 磷钼酸比色法测定血糖 91
实验五 黏多糖——肝素钠效价的测定 93
实验六 淀粉的提取及性质实验 94
实验七 淀粉与纤维素的测定 95
实验八 肝糖原的提取及鉴定 97
实验九 果胶的提取与胶冻的制备 98
实验十 可溶性糖的硅胶G薄层色谱 99
实验十一 糖的聚酰胺薄层色谱 101
实验十二 细菌细胞壁糖的薄层色谱 102
实验十三 葡萄糖-1-磷酸的制备及其纯度的测定 104
第二部分 脂类实验 107
实验十四 脂肪的碱水解及组分鉴定 107
实验十五 粗脂肪的定量测定——索氏抽提法 108
实验十六 皂化值的测定 109
实验十七 酸值的测定 110
实验十八 碘值的测定 111
实验十九 卵磷脂的提取及鉴定 113
实验二十 磷硫铁法测定血清胆固醇 114
实验二十一 分光光度法测定胆红素（改良J-G法） 115
实验二十二 红细胞膜的制备及其成分分析（磷脂、胆固醇） 116
第三部分 氨基酸和蛋白质类实验 120
实验二十三 氨基酸的纸色谱 120
实验二十四 薄层色谱法分离氨基酸 122
实验二十五 甲醛滴定法测定氨基酸 123
实验二十六 华勃氏呼吸计法测定L-谷氨酸 124
实验二十七 旋光法测定谷氨酸 127
实验二十八 蛋白质的沉淀反应、颜色反应、两性反应、电荷及等电点的测定 128
实验二十九 粗蛋白的定量测定——微量凯氏定氮法 132
实验三十 紫外光吸收法测定蛋白质含量 135
实验三十一 双缩脲法测定蛋白质含量 137
实验三十二 考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）测定蛋白质含量 138
实验三十三 Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质 139
实验三十四 尿素对蛋白质的变性作用 141
实验三十五 蛋白质DNS分析法（DNS—Cl膜色谱技术） 142
实验三十六 乙酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 144
实验三十七 垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 146
实验三十八 等电聚焦电泳测定蛋白质等电点 147
实验三十九 SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量 149
实验四十 凝胶色谱法测定蛋白质相对分子质量 151
实验四十一 酪蛋白的提取 152
实验四十二 植物叶蛋白的提取 153
实验四十三 细胞色素C的制备及其测定 155
第四部分 核酸类实验 158
实验四十四 质粒DNA的碱裂解法提取与纯化 158
实验四十五 植物组织中核酸的提取和测定 160
实验四十六 酵母RNA的分离与组分鉴定 162
实验四十七 DNA的琼脂糖凝胶电泳 163
实验四十八 RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳 165
实验四十九 DNA重组 167
实验五十 PCR聚合酶扩增DNA 168
实验五十一 逆转录聚合酶（PCR）链反应 169
第五部分 酶类实验 170
实验五十二 过氧化氢酶和过氧化物酶的作用 170
实验五十三 温度、pH、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响 172
实验五十四 大麦萌发前后淀粉酶活力的比较 174
实验五十五 枯草杆菌蛋白酶活力的测定 175
实验五十六 转氨酶GPT、 GOT活性的测定 177
实验五十七 脲酶的动力学研究 178
实验五十八 糖化型淀粉酶活力的测定 183
实验五十九 蛋清溶菌酶的制备及活力测定 184
实验六十 正交法测定对酶活力影响的几种因素 185
实验六十一 碱性磷酸酶的分离与纯化 188
实验六十二 结晶乳酸脱氢酶（LDH）的制备 190
实验六十三 琥珀酸脱氢酶的活性测定及丙二酸的抑制作用 191
实验六十四 辣根过氧化物酶的制备及酶比活力的测定 192
实验六十五 发色底物测定大曲中α-葡萄糖苷酶活力 195
实验六十六 酵母蔗糖酶的纯化及性质研究 197
实验六十七 固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测 201
实验六十八 亲和色谱法纯化胰蛋白酶 202
第六部分 维生素类实验 205
实验六十九 维生素A的测定（三氯化锑比色法） 205
实验七十 还原型维生素C的测定 206
实验七十一 总维生素C的测定——2，4-二硝基苯肼比色法 207
实验七十二 荧光法测定维生素B2（核黄素） 209
实验七十三 高效液相色谱法测定脂溶性维生素 210
第七部分 代谢类实验 212
实验七十四 肌糖原的酵解作用 212
实验七十五 发酵过程中无机磷的利用 214
实验七十六 糖酵解中间产物的鉴定 215
实验七十七 氨基转移反应的定性鉴定 216
实验七十八 脂肪酸的β-氧化 218
第八部分 其他实验 220
实验七十九 辛酸-硫酸铵法从人血清中纯化免疫球蛋白（IgG） 220
实验八十 免疫电泳技术 221
实验八十一 ELISA法测定单克隆抗体的效价 222
实验八十二 分光光度法测定叶绿素含量 224
附录 226
附录1 一些常用化合物的溶解度（20℃） 226
附录2 酸、碱溶液的配制 226
附录3 常用酸碱体积分数、相对密度和物质的量浓度的关系 226
附录4 某些有机溶剂的主要物理常数 228
附录5 一些常用酸碱指示剂 228
附录6 混合指示剂 229
附录7 氧化还原染料 229
附录8 染料和荧光标准试剂 229
附录9 生物发色团 230
附录10 某些重要生化物质的摩尔消光系数 230
附录11 氨基酸的一些物理常数 231
附录12 元素的相对原子质量表 232
附录13 调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃） 233
附录14 调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃） 233
附录15 气体干燥剂 234
附录16 液体干燥剂 234
附录17 易变质及需要特殊方法保存的试剂 234
附录18 冷却剂 234
附录19 常用缓冲溶液的配制 235
参考书目 240