第1章 利用MAS技术培育寒区抗瘟水稻品种空育131（Pi1/Pi2）——受体亲本和供体亲本杂交F1代及回交BC1代鉴定选择第1节 绪论 1
一、稻瘟病研究进展 1
二、分子标记技术在水稻育种上的应用 8
三、本研究目的与意义 18
第2节 材料与方法 19
一、水稻材料 19
二、稻瘟病菌菌株 19
三、SSR分子标记 20
四、试剂及其来源 25
五、主要仪器 25
六、主要缓冲液及试剂配制 26
七、SSR分析 28
八、MAS培育水稻品系空育131（Pi1/Pi2）实施方案 32
九、水稻抗稻瘟病鉴定 32
第3节 结果与分析 34
一、前景选择双亲多态性SSR标记筛选 34
二、背景选择双亲多态性SSR标记筛选 35
三、空育131×BL6的F1代真伪杂种鉴别 37
四、（空育131×BL6）×空育131的BC1F1代前景选择 38
五、（空育131×BL6）×空育131的BC1F1代背景选择 39
六、空育131和BL6及BC1F1代入选植株稻瘟病抗性鉴定 41
第4节 讨论 41
一、基于MAS技术的寒区水稻抗稻瘟病育种意义 41
二、利用MAS技术培育水稻空育131（Pi1/Pi2）的前景选择 43
三、利用MAS技术培育水稻空育131（Pi1/Pi2）的背景选择 44
四、简化MAS技术培育水稻品种程序的设想 45
第5节 结论 46
参考文献 47
第2章 利用MAS技术培育寒区抗瘟水稻品种空育131（Pi1/Pi2）——受体亲本和供体亲本回交BC2代及BC3代鉴定选择第1节 绪论 57
一、稻瘟病研究进展 57
二、分子标记辅助选择（MAS）技术 60
三、稻瘟病抗性基因的分子标记定位 65
四、本研究目的与意义 68
第2节 材料与方法 69
一、水稻 69
二、SSR标记 70
三、背景恢复率计算 80
四、抗稻瘟病性田间鉴定 80
第3节 结果与分析 81
一、用于前景选择的SSR标记筛选 81
二、用于背景选择的SSR标记筛选 82
三、BC2F2代前景选择 84
四、BC2F2代背景选择 85
五、BC3F1代前景选择 87
六、BC3F1代背景选择 87
七、稻瘟病抗性田间鉴定 89
第4节 讨论 89
一、MAS技术培育寒区水稻抗稻瘟病品种的意义 89
二、简便有效的DNA分子标记检测技术 91
三、今后进一步开展的工作 92
第5节 结论 93
参考文献 94
第3章 抗虫基因cry2A＊对早粳稻的转化 103
第1节 绪论 103
一、苏云金芽孢杆菌及其杀虫晶体蛋白 103
二、植物基因工程常用启动子 106
三、水稻转化常用筛选标记基因 110
四、密码子偏爱性及Bt基因密码子优化 111
五、本研究目的与意义 113
第2节 材料与方法 114
一、植物材料 114
二、细菌菌株 114
三、基因、质粒和植物表达载体 114
四、试剂盒、主要试剂和仪器设备 116
五、培养基 117
六、目的基因的验证 119
七、根瘤农杆菌介导的水稻遗传转化体系及其优化 122
八、转化水稻的分子检测 126
第3节 结果与分析 130
一、目的基因的验证 130
二、根瘤农杆菌介导的水稻遗传转化体系优化 131
三、转基因水稻植株的获得 135
四、转基因植株T0代PCR检测 136
五、转基因植株T1代株系外源基因表达 137
第4节 讨论 140
一、农杆菌介导获得转cry2A＊基因粳稻的意义 140
二、农杆菌介导粳稻遗传转化体系的改进 141
三、提高外源基因表达的途径 144
四、筛选标记基因 145
五、T1代遗传规律分析 146
第5节 结论 147
参考文献 148
第4章 抗虫基因cry1C＊对早粳稻的转化 156
第1节 绪论 156
一、Bt及Bt基因概述 156
二、农杆菌介导的植物遗传转化 160
三、本研究目的与意义 170
第2节 材料与方法 171
一、实验材料 171
二、实验方法 180
第3节 结果与分析 188
一、目的基因cry1C＊的验证 188
二、农杆菌菌株EHA105B和EHA105N活力比较 189
三、转基因水稻再生苗炼苗方法 191
四、农杆菌介导的水稻遗传转化 192
五、转cry1C＊基因水稻植株T0代PCR检测 193
第4节 讨论 195
一、农杆菌菌株毒力差异及其对植物遗传转化的影响 195
二、转基因水稻再生植株的炼苗 196
三、转pBar-cry1C＊T-DNA片段水稻的生物安全性 196
四、外源基因cry1C＊在水稻基因组中的表达 198
五、今后进一步开展的工作 199
第5节 结论 201
参考文献 202