第一篇 苏云金芽孢杆菌HBF-1 3
第一章 杀金龟子幼虫的苏云金芽孢杆菌资源的筛选 3
一、苏云金芽孢杆菌资源筛选现状 3
二、杀金龟子幼虫的苏云金芽孢杆菌资源的分离 4
（一）土样采集 4
（二）分离培养基 4
（三）土样分离 4
（四）分离结果 4
三、苏云金芽孢杆菌对金龟子幼虫效果的生物测定 9
（一）生测方法 9
（二）生测结果 10
四、苏云金芽孢杆菌资源的展望 15
第二章 HBF-1菌株芽孢与编码伴胞晶体基因的特殊性 17
一、芽孢 17
（一）芽孢的结构与功能 17
（二）芽孢的萌发与形成 18
（三）影响HBF-1菌株芽孢萌发的因子 20
（四）HBF-1菌株芽孢的特殊性 24
二、伴胞晶体 28
（一）伴胞晶体的形态特征 28
（二）伴胞晶体蛋白基因及其多样性 29
（三）HBF-1菌株编码伴胞晶体基因的特殊性 30
第三章 苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株的生物学特性 35
一、试验材料与方法 35
（一）试验材料 35
（二）试验方法 36
二、试验结果与分析 37
（一）HBF-1菌株培养特征及细胞学性状 37
（二）HBF-1菌株在LB液体培养基中的生长曲线 37
（三）HBF-1菌株生理生化反应与血清型鉴定 38
（四）HBF-1菌株对抗生素的敏感性 38
（五）HBF-1菌株对氨基酸的需求及缬氨酸生物合成代谢受阻机制 39
（六）HBF-1菌株晶体蛋白的SDS-PAGE分析 40
（七）HBF-1菌株产生β-外毒素的测定 42
第四章 苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株的杀虫机制 43
一、毒素的杀虫机制与昆虫中肠上皮细胞的毒素受体的关系 43
（一）中肠上皮细胞的毒素受体 43
（二）毒素的杀虫机制 44
二、昆虫中肠蛋白酶对杀虫晶体活性的影响 45
（一）昆虫中肠液的酸碱度和蛋白酶组成 45
（二）中肠液酸碱度对杀虫晶体蛋白毒力的影响 46
（三）肠道蛋白酶对杀虫晶体蛋白的活化作用 46
（四）肠道蛋白酶对杀虫晶体蛋白杀虫专一性的影响 47
（五）昆虫中肠液对杀虫晶体蛋白的过度降解与沉淀作用 48
三、关于HBF-1杀虫机制及今后研究方向 49
第五章 苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株发酵工艺及发酵培养基优选 50
一、发酵工艺流程和条件 50
（一）发酵工艺流程 50
（二）发酵工艺条件 50
二、发酵培养基优选与中试生产 52
（一）发酵培养基优选 52
（二）中试生产 55
第六章 苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株的安全性 57
一、动物的安全性 57
（一）动物的安全性试验方法 57
（二）动物安全性试验结果 58
二、农业生态的安全性 59
（一）试验方法 59
（二）研究结果 60
第七章 苏云金芽孢杆菌HBF-1防治金龟幼虫的田间应用技术 64
一、HBF-1悬浮剂防治花生田金龟子幼虫的田间试验 64
（一）田间小区试验 64
（二）田间防治示范 66
（三）HBF-1制剂防治花生田金龟子幼虫应用技术 67
二、防治马铃薯金龟子幼虫田间试验 67
（一）田间小区试验 67
（二）田间防治示范 68
（三）HBF-1制剂防治马铃薯田金龟子幼虫技术 69
三、防治草坪金龟子幼虫田间小区试验 69
四、苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株杀虫剂在应用中的作用和防治效果评价 70
（一）苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株杀虫剂在应用中的作用 70
（二）防治效果评价 72
五、成本核算 72
第八章 转Bt基因植物的现状与HBF-1菌株在转基因植物中的展望 73
一、转Bt基因植物的现状 73
（一）转基因植物发展现状 73
（二）转基因抗虫植物研究 74
（三）转Bt毒蛋白基因植物及其抗虫效应 74
（四）转Bt毒蛋白基因植物的商品应用 75
（五）应用的转Bt基因植物 76
二、HBF-1菌株在转基因植物中的展望 78
第九章 酶联免疫在苏云金芽孢杆菌治理金龟上的应用 81
一、材料和方法 81
（一）细胞培养和晶体制备 81
（二）蛋白含量的测定 82
（三）抗血清的制备 82
（四）酶联免疫法（ELISA） 82
（五）吐温20和Triton X-100对免疫反应的影响 82
（六）土壤中原毒素的提取 83
二、研究结果 84
（一）SDS-PAGE 84
（二）用3种ELISA方法比较抗体和Buibui菌株原毒素间的反应 84
（三）Buibui菌株原毒素和抗体反应的专一性 84
（四）免疫反应中原毒素含量的影响 84
（五）几种Bt原毒素的交叉反应 85
（六）吐温20和Triton X-100对免疫反应的影响 85
（七）直接碱溶法提取土壤中的原毒素 85
（八）涡旋法或Polytron提取土壤中的晶体蛋白 86
三、研究中存在的问题 87
第十章 金龟子的人工饲养及HBF-1菌株的生物测定方法 89
一、材料与方法 89
（一）主要金龟子成虫的采集 89
（二）成虫的饲养与产卵 89
（三）卵的孵化及卵的保存 89
（四）金龟子幼虫的饲养 90
二、金龟子的人工饲养 90
（一）金龟子成虫的采集 90
（二）成虫的饲养与产卵 90
（三）卵的孵化与保存 91
（四）金龟子幼虫的饲养 92
（五）蛹期的饲养管理 93
三、对金龟幼虫高毒力HBF-1菌株生物测定方法 93
（一）对金龟幼虫高毒力菌株的筛选 93
（二）对金龟幼虫高毒力菌株的毒力测定 94
参考文献 94
第二篇 有害金龟治理 105
第一章 中国土壤昆虫研究概况 105
一、中国土壤昆虫研究历史回顾 105
二、中国大陆土壤昆虫的种类 106
三、我国重要土壤害虫发生态势 107
（一）重要土壤害虫种类 107
（二）重要土壤害虫发生情况 107
四、土壤金龟甲研究进展 108
（一）多样性与系统学 108
（二）农作物金龟 110
（三）林果金龟 111
（四）草原金龟 112
（五）烟草金龟 113
（六）草坪金龟 113
（七）防治手段与技术 113
（八）营养学与资源开发利用 113
（九）亚显微形态 114
第二章 土壤金龟的生物学与防治方法 115
一、生物学特点 115
（一）发生世代 115
（二）活动规律 115
（三）越冬虫态 115
（四）取食类型 115
（五）为害虫态 115
二、土壤有害金龟的防治 115
（一）防治研究的阶段及其特点 115
（二）有害金龟的防治方法 116
第三章 中国重要土壤金龟种类识别与发生 118
一、形态特征 118
（一）成虫 118
（二）幼虫 119
二、重要种类识别与发生 124
成虫分科检索表 124
幼虫分科检索表 124
鳃金龟科 125
成虫种检索表 126
幼虫检索表 129
丽金龟科 156
成虫分种检索表 157
幼虫检索表 158
犀金龟科 173
成虫种检索表 173
常见幼虫检索表 174
花金龟科 180
成虫种检索表 181
常见幼虫检索表 182
斑金龟科 188
参考文献 189