第一章 绪论 1
一、Cry毒素的分类和命名 2
二、苏云金芽孢杆菌Cry毒素的结构与功能 3
三、苏云金芽孢杆菌制剂及其转基因产品存在的风险 4
四、苏云金芽孢杆菌Cry毒素检测技术 6
（一）生物测定法 7
（二）PCR扩增检测法 7
（三）分子杂交技术 8
（四）免疫学检测方法 9
五、抗体的发展 13
六、噬菌体抗体库技术 15
七、抗体基因的体外高频突变技术 19
第二章 人源化抗苏云金芽孢杆菌Cry1Ab毒素单域抗体的筛选及活性鉴定 21
一、材料与方法 22
（一）材料与试剂 22
（二）方法 24
二、结果与分析 27
（一）特异性重组噬菌体单域抗体的富集 27
（二）单克隆ELISA方法筛选阳性重组噬菌体 28
（三）菌液PCR结果 28
（四）噬菌体单域抗体的氨基酸序列比对 29
三、讨论 30
四、结论 31
第三章 同源建模结合点突变技术构建单域抗体定点饱和突变库 32
一、材料与方法 33
（一）试验材料 33
（二）实验方法 34
二、结果与分析 37
（一）同源建模及分子对接 37
（二）关键氨基酸结合热点分析 39
（三）重叠延伸PCR结果 40
（四）阳性克隆菌落PCR验证 41
（五）重组子双酶切验证 42
（六）突变库构建及鉴定 42
三、讨论 43
四、结论 45
第四章 苏云金芽孢杆菌（Bt）Cry1类毒素共性结构域的分析定位 47
一、材料与方法 48
（一）材料 48
（二）方法 49
二、结果与分析 50
（一）序列比对 50
（二）模板的确定和序列比对 51
（三）同源建模及模型评价 52
（四）5种Cry1类毒素的模型比较 54
三、讨论 55
四、结论 56
第五章 苏云金芽孢杆菌（Bt）Cry1类毒素共性结构域的原核表达、纯化及鉴定 57
一、材料与方法 58
（一）材料 58
（二）方法 59
二、结果与分析 61
（一）共性结构域基因的克隆与序列分析 61
（二）pET-26b-DomainⅠ表达载体的构建及鉴定 62
（三）共性结构域蛋白的表达与纯化 63
（四）Western blot、ELISA和抗原性分析 64
三、讨论 65
四、结论 66
第六章 Cry1类毒素的广谱抗体筛选、鉴定及广谱特异性分析 67
一、材料与方法 67
（一）材料 67
（二）方法 69
二、结果与分析 73
（一）抗Cry1类毒素的广谱抗体的筛选 73
（二）Cry1类毒素广谱抗体阳性克隆的鉴定 74
三、讨论 78
四、结论 80
参考文献 81
附录 96
附录1 试验培养基及相关试剂的配方 96
附录2 核酸电泳相关试剂配方 97
附录3 SDS-PAGE相关试剂配方 97
附录4 SDS-PAGE操作步骤 98
附录5 His Trap HP镍亲和柱缓冲液试剂 99
附录6 ELISA试验所用缓冲液和试剂 100
附录7 Western blot试验所用缓冲液及试剂配方 101
缩写符号说明 102
后记 103