1绪论 1
1.1 水曲柳概述 1
1.1.1 水曲柳生物学特性和应用价值 1
1.1.2 水曲柳繁殖研究现状 1
1.2 白蜡树属植物组织培养的研究进展 2
1.2.1 白蜡树属种类及其分布 2
1.2.2 白蜡树属组织培养的研究现状 3
1.3 植物体细胞胚胎发生的研究进展 5
1.3.1 体细胞胚胎发生及其特点 5
1.3.2 体细胞胚胎发生的意义 5
1.3.3 植物体细胞胚胎发生的关键环节 6
1.3.4 植物体细胞胚胎发生的影响因素 7
1.3.5 植物体细胞胚胎发生的组织细胞学研究 9
1.3.6 植物体细胞胚胎发生中活性氧的研究 13
1.3.7 植物体细胞胚胎发生中NO的研究 15
1.4 水曲柳体细胞胚胎发生的研究进展 18
1.4.1 水曲柳体细胞胚胎发生的研究意义 18
1.4.2 水曲柳体细胞胚胎发生的研究现状 18
1.4.3 研究中存在的问题 19
参考文献 20
2水曲柳成熟合子胚体细胞胚胎发生研究 28
2.1 材料与方法 28
2.1.1 试验材料 28
2.1.2 试验方法 28
2.1.3 数据处理与分析 30
2.2 结果与分析 30
2.2.1 水曲柳成熟合子胚的体细胞胚诱导研究 30
2.2.2 水曲柳成熟合子胚的体细胞胚成熟 34
2.3 讨论 35
2.4 本章结论 36
参考文献 37
3外源H2O2和NO对水曲柳体细胞胚诱导的影响 39
3.1 材料与方法 39
3.1.1 试验材料 39
3.1.2 试验方法 39
3.2 结果与分析 41
3.2.1 H2O2对水曲柳体细胞胚胎发生的影响 41
3.2.2 CAT对水曲柳体细胞胚胎发生的影响 42
3.2.3 SNP对水曲柳体细胞胚胎发生的影响 45
3.2.4 PTIO对水曲柳体细胞胚胎发生的影响 48
3.3 讨论 50
3.3.1 H2O2在水曲柳体细胞胚胎发生中的作用 50
3.3.2 NO在水曲柳体细胞胚胎发生中的作用 51
3.4 本章结论 52
参考文献 52
4水曲柳体细胞胚的增殖和植株再生培养 54
4.1 材料与方法 54
4.1.1 试验材料 54
4.1.2 试验方法 54
4.1.3 数据处理与分析 55
4.2 结果与分析 56
4.2.1 水曲柳体细胞胚的增殖 56
4.2.2 次生体细胞胚的形态学观察 56
4.2.3 水曲柳次生体细胞胚的萌发 57
4.2.4 体细胞胚苗的移栽和驯化 59
4.3 讨论 59
4.4 本章结论 59
参考文献 60
5水曲柳体细胞胚增殖材料的筛选和继代次数分析 61
5.1 材料与方法 61
5.1.1 试验材料 61
5.1.2 试验方法 61
5.1.3 数据观察与统计分析 62
5.2 结果与分析 63
5.2.1 水曲柳体细胞胚增殖培养的材料筛选 63
5.2.2 水曲柳体细胞胚增殖培养的继代次数分析 67
5.3 讨论 67
5.4 本章结论 69
参考文献 70
6水曲柳体细胞胚萌发材料的筛选和植株再生能力分析 71
6.1 材料与方法 71
6.1.1 试验材料 71
6.1.2 试验方法 71
6.1.3 数据观察与统计分析 73
6.2 结果与分析 73
6.2.1 水曲柳体细胞胚萌发培养的材料筛选 73
6.2.2 水曲柳体细胞胚萌发培养的继代次数分析 75
6.2.3 水曲柳体细胞胚生根培养的继代次数分析 76
6.2.4 植株的移栽成苗 78
6.3 讨论 78
6.4 本章结论 79
参考文献 79
7水曲柳体细胞胚胎发生中的形态学和细胞生物学观察 81
7.1 材料与方法 81
7.1.1 试验材料 81
7.1.2 试验方法 81
7.2 结果与分析 83
7.2.1 水曲柳体细胞胚胎发生的形态学观察和组织学分析 83
7.2.2 TUNEL细胞凋亡原位检测结果 85
7.2.3 DAPI染色结果分析 86
7.3 讨论 87
7.4 本章结论 88
参考文献 89
8水曲柳体细胞胚胎发生中的生物化学研究 91
8.1 材料与方法 91
8.1.1 试验材料 91
8.1.2 试验方法 91
8.1.3 数据处理与分析 92
8.2 结果与分析 92
8.2.1 活性氧代谢研究 92
8.2.2 超氧阴离子含量测定 93
8.2.3 细胞总死亡量测定 95
8.3 讨论 96
8.4 本章结论 97
参考文献 98
9外源H2O2和NO对水曲柳体细胞胚胎发生中PCD的影响 99
9.1 材料与方法 99
9.1.1 试验材料 99
9.1.2 试验方法 99
9.1.3 数据统计与分析 100
9.2 结果与分析 100
9.2.1 外源H2O2对水曲柳外植体细胞PCD的影响 100
9.2.2 外源NO对水曲柳外植体细胞PCD的影响 102
9.2.3 DAPI染色观察细胞核的形态变化结果 103
9.3 讨论 104
9.3.1 水曲柳体细胞胚胎发生中的PCD现象 104
9.3.2 外源H2O2对水曲柳外植体细胞PCD的影响 104
9.3.3 外源NO对水曲柳外植体细胞PCD的影响 105
9.4 本章结论 106
参考文献 106
10外源H2O2对外植体细胞死亡和体细胞胚胎发生的影响 107
10.1 材料与方法 107
10.1.1 试验材料 107
10.1.2 试验方法 107
10.1.3 数据统计与分析 108
10.2 结果与分析 108
10.2.1 细胞总死亡量分析 108
10.2.2 细胞内H2O2含量分析 108
10.2.3 细胞内NO含量分析 109
10.2.4 相关性分析 110
10.3 讨论 111
10.4 本章结论 112
参考文献 113
11外源H2O2对外植体细胞H2O2代谢和NO合成的影响 114
11.1 材料与方法 114
11.1.1 试验材料 114
11.1.2 试验方法 114
11.1.3 数据统计与分析 116
11.2 结果与分析 116
11.2.1 细胞内NO和H2O2含量变化 116
11.2.2 ROS相关酶活性变化 117
11.2.3 NO相关酶活性变化 119
11.2.4 相关性分析 120
11.3 讨论 121
11.3.1 外源H2O2对内源H2O2代谢的影响 121
11.3.2 外源H2O2对内源NO合成和代谢的影响 123
11.4 本章结论 123
参考文献 123
12外源NO对外植体细胞死亡和体细胞胚胎发生的影响 125
12.1 材料与方法 125
12.1.1 试验材料 125
12.1.2 试验方法 125
12.1.3 数据统计与分析 125
12.2 结果与分析 126
12.2.1 细胞总死亡量分析 126
12.2.2 细胞内H2O2含量分析 126
12.2.3 细胞内NO含量分析 127
12.3 讨论 128
12.4 本章结论 130
参考文献 130
13外源NO对外植体细胞H2O2代谢和NO合成的影响 132
13.1 材料与方法 132
13.1.1 试验材料 132
13.1.2 试验方法 132
13.1.3 数据统计与分析 132
13.2 结果与分析 132
13.2.1 细胞内NO和H2O2含量变化 132
13.2.2 ROS相关酶活性变化 134
13.2.3 NO相关酶活性变化 135
13.2.4 相关性分析 136
13.3 讨论 137
13.3.1 外源NO对内源H2O2合成和代谢的影响 137
13.3.2 外源NO对内源NO合成和代谢的影响 137
13.4 本章结论 138
参考文献 138
14水曲柳体细胞胚胎发生中细胞内NO合成途径分析 140
14.1 材料与方法 140
14.1.1 试验材料 140
14.1.2 试验方法 140
14.1.3 数据统计与分析 141
14.2 结果与分析 141
14.2.1 NO抑制剂对体细胞胚胎发生的影响 141
14.2.2 细胞内H2O2含量变化 142
14.2.3 细胞内NO含量变化 143
14.2.4 细胞总死亡量分析 144
14.2.5 细胞PCD比例的变化 145
14.3 讨论 146
14.4 本章结论 148
参考文献 148
15结论与研究展望 150
15.1 主要结论 150
15.2 水曲柳体细胞胚胎发生的研究展望 153
编后记 155