序 1
一、绪言 1
目 录 1
二、专一性抗血清的制备 6
Ⅰ．抗原及其纯化 6
（一）抗原 6
（二）抗原纯化的一般方法 8
（四）β—D一半乳糖苷酶的底物配备法 9 9
（三）植物病毒纯化的实例一长叶车前花叶病毒的纯化 9
Ⅱ．机体的特异性免疫反应及生产抗血清的免疫程序 14
（一）机体的免疫反应 14
（二）生产抗血清的免疫程序 19
（一）抗血清效价测定 22
Ⅱ．抗血清效价及其纯度测定 22
（二）抗血清纯度鉴定 23
Ⅳ．植物病毒抗血清制备的实例 25
（一）RMV单价抗血清的制备 25
（二）RMV抗血清效价的测定 28
（三）RMV抗血清纯度的测定 29
三、免疫球蛋白的制备 33
Ⅰ．免疫球蛋白及其性质 33
（一）免疫球蛋白的基本概念 33
（二）免疫球蛋白的化学结构 33
（三）冷乙醇法 33
（三）免疫球蛋白的免疫学功能 35
（四）免疫球蛋白的产生机理 35
（一）饱和硫酸铵沉淀法 36
Ⅱ．免疫球蛋白的制备 36
（二）硫酸钠沉淀法 38
（四）压碎法 1 40
（四）抗体碎片的制备 40
Ⅲ．免疫球蛋白的效价、纯度与定量测定 41
（一）免疫球蛋白的效价测定 41
（二）免疫球蛋白的纯度鉴定 42
（三）免疫球蛋白的定量测定 42
Ⅳ．植物病毒抗血清免疫球蛋白的制备实例 43
（一）饱和硫酸铵法粗提RMV抗血清中的免疫球 43
蛋白IgG 43
（二）RMV抗血清免疫球蛋白IgG的纯度鉴定 44
（三）RMV抗血清免疫球蛋白IgG的效价测定 46
四、标记酶及其制备 47
（一）作为标记抗体用的酶应具备的特点 47
Ⅰ．作为标记抗体用的酶 47
Ⅱ．酶纯化的一般原理和方法 48
（二）现在国内外已用于免疫酶技术的酶 48
Ⅲ．酶纯化的实例 51
（一）辣根过氧化物酶及其制备 51
（二）碱性磷酸酶的制备 61
五、酶标记抗体的制备 65
I．酶与抗体的交联 65
（一）交联方法简述 65
（二）酶与IgG交联的原理 68
（三）使酶与抗体结合的交联剂……………………………7…（四）酶标记抗体的纯化及保存 71
Ⅱ．酶标记抗体制备的实例 74
（一）戊二醛一步法交联辣根过氧化物酶与IgG 74
（二）戊二醛一步法交联碱性磷酸酶与IgG 75
（三）戊二醛二步法交联辣根过氧化物酶与IgG 76
（四）过碘酸氧化法交联辣根过氧化物酶与IgG 78
（五）简易戊二醛二步法交联辣根过氧化物酶与IgG 80
（六）戊二醛—过碘酸钠法交联辣根过氧化物酶与 82
IgG 82
（七）苯二马来酰亚胺法交联半乳糖苷酶和抗体Ig的 83
Fab 83
（八）偶氮桥法交联碱性磷酸酶与IgG 86
（一）酶标记抗体的定量 87
（二）酶（HRP）标记抗体的克分子比值 87
Ⅱ．酶标记抗体的定量及其克分子比值 87
Ⅰ．酶底物的选择 89
（一）在免疫酶技术中作为酶底物的条件 89
（二）酶底物的选择 89
六、酶底物的配备 89
（三）合理使用酶底物 90
Ⅱ．酶底物的配备法 93
（一）辣根过氧化物酶的底物配备法 93
（二）碱性磷酸酶的底物配备法 98
（三）葡萄糖氧化酶的底物配备法 98
七、免疫酶标固相载体方法 101
Ⅰ．免疫酶技术的产生、发展、分类及其命名 101
（一）固相载体 105
Ⅱ．免疫酶标固相载体方法 105
（二）酶联免疫吸附测定（ELISA） 109
（三）ELISA应用实例 112
（四）ELISA应用的一些说明 117
（五）具有吸附能力的小球状物载体方法 125
八、免疫酶标组织化学方法 131
Ⅰ．组织细胞内源过氧化物酶的抑制 131
（一）抑制内源酶的重要性 131
（二）酶抑制的一般概念 134
Ⅱ．组织及组织内有关抗原的固定 136
（一）撕剥表皮 139
（二）徒手切片 139
Ⅲ．标本的制备 139
（三）涂抹法 140
（五）冰冻切片法 141
（六）石蜡切片法 143
Ⅳ．免疫酶标组织化学法原理及实验 145
（一）免疫酶标组织化学法原理 145
（二）免疫酶标组织化学直接法对青菜叶片（横切面） 145
内RMV的定位 145
内TuMV的定位 149
（三）免疫酶标组织化学间接法对青菜叶片（横切面） 149
（四）免疫酶标组织化学简便法对青菜下表皮内RMV 150
的检测 150
九、非标记免疫酶技术 153
Ⅰ．“抗体搭桥”法 154
（一）“抗体搭桥”法原理 154
（二）混合抗体直接法实验程序 155
（三）混合抗体间接法实验程序 157
（四）“杂交抗体”法 157
（五）扩大抗体法 157
Ⅱ．PAP法 158
（一）PAP法原理 158
（二）PAP法一般程序 159
（三）PAP的克分子比例 160
（四）PAP最适实验浓度 161
（五）讨论 162
（六）PAP法对青菜叶片（冰冻切片）内RMV定位 164
的实例 164
Ⅲ．非标记免疫酶固相载体方法 168
十、免疫酶电子显微镜技术 170
Ⅰ．制备电子显微镜样品常识 170
（一）电子显微镜技术中使用的标本支持物 170
（二）超…切片 172
Ⅱ．免疫酶标电镜技术 177
（一）免疫酶标电镜技术的简要介绍 177
（二）免疫酶标电镜技术的一般程序 179
（三）免疫酶标电镜技术的实例 180
Ⅲ．非标记免疫酶电镜技术 183
（一）非标记免疫酶电镜技术的基本原理 183
（二）使用HRP抗体的非标记免疫酶电镜技术的 184
程序 184
（三）使用HRP抗体的非标记免疫酶电镜技术对 186
RMV在植物组织细胞内定位的实例 186
（四）使用PAP复合物的非标记免疫酶电镜技术 189
十一、免疫酶技术的进展 190
Ⅰ．酶免疫电泳技术 190
（一）酶免疫电泳技术的原理 190
（二）酶（HRP）免疫电泳技术的程序 190
（二）酶联免疫电扩散测定技术的程序 192
Ⅱ．酶联免疫电扩散测定技术 192
（一）酶联免疫电扩散测定技术的原理 192
Ⅲ．酶标记抗原对流免疫电泳 194
（一）酶标记抗原对流免疫电泳的原理 194
（二）酶标记抗原对流免疫电泳程序（检测血吸虫 194
病） 194
Ⅳ．酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术 196
（一）酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术的原理 196
（二）酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术的程序（检测 196
RMV） 196
病毒的程序 199
（二）用酶标试纸检测青菜叶片内长叶车前花叶 199
（一）用酶标试纸检测组织或器官内有关抗原的原 199
Ⅴ．用酶标试纸检测组织或器官内有关抗原 199
理 199
Ⅵ．免疫酶技术的发展趋势 202
十二、免疫酶技术的应用 207
Ⅰ．免疫酶技术的应用简况 207
（一）内分泌学 207
（二）免疫病理学 207
（三）血液学 208
（四）寄生虫学 208
（五）微生物学 209
（六）人体及动物病毒学（包括立克次氏体） 209
（七）植物病毒学 210
（十）细胞生物学 211
（八）兽医学 211
（九）肿瘤学 211
（十一）遗传学 212
（十二）生物化学 212
（十三）医学及药物学 212
（十四）食品卫生学 213
（十五）其它 213
Ⅱ．免疫酶技术应用实例的介绍 213
（一）免疫酶标固相载体方法的应用实例 213
（二）免疫酶标组织化学方法和免疫酶标电镜技术的 218
应用实例 218
镜技术的应用实例 220
（三）非标记免疫酶组织化学方法和非标记免疫酶电 220
Ⅲ．关于免疫酶技术应用的说明 224
十三、相关的实验技术 225
（一）盐（硫酸铵）的饱和度与盐析技术 225
（二）密度梯度离心技术 226
（三）聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 227
（四）凝胶过滤技术 230
（五）离子交换葡聚糖凝胶层析技术 232
（六）离子交换纤维素层析技术 234
（七）琼脂糖珠免疫吸附剂亲和层析技术 238
（八）葡聚糖凝胶（Sephadex）免疫吸附剂亲和层 241
析技术 241
（九）微量克氏定氮法与双缩脲法 242
（十）酶与蛋白抗原的交联技术 243
（十一）酶联金葡萄球菌A蛋白（简称PPA）技术 244
（十二）样品去盐技术 247
（十三）样品浓缩技术 248
（十四）冰冻干燥技术 251
（十五）样品贮藏方法 253
（十六）玻璃器皿（包括盖玻片、载玻片）清洗技术 253
（十七）醋酸纤维膜的制备法 255
附录 256
Ⅰ．试剂（包括缓冲液）配方 256
Ⅱ．缩写检索 264
参考文献 269