目录 1
第一篇 植物基因工程——分子水平的植物生物技术 1
1 植物基因工程的策略 5
1.1 植物基因克隆策略 5
1.2 植物基因表达策略 13
2 植物基因克隆技术要素 13
2.1 植物基因克隆载体 20
2.2 植物基因克隆的工具酶 34
2.3 凝胶电泳技术 43
2.4 杂交探针制备与放射自显影术 50
2.5 工程细菌的培养、纯化与保藏技术 55
3 植物基因文库的构建与cDNA克隆 60
3.1 基因文库的构建 60
3.2 cDNA克隆的制备 66
3.3 重组DNA分子导入宿主细胞 77
3.4 重组体的鉴定与克隆基因检测 83
4 植物来源的基因和各种有用的异源基因 95
4.1 植物基因组概况 95
4.2 植物来源的克隆基因 116
4.3 各种来源的有用基因 136
5 植物基因工程载体 142
5.1 根癌农杆菌与植物的相互关系 142
5.2 Ti质粒的改造与载体构建 156
5.3 常用的植物基因工程载体简介 168
5.4 潜在植物基因工程载体 177
6 植物受体细胞系统与基因转化 185
6.1 植物受体细胞系统概述 185
6.2 根癌农杆菌介导的基因转化 190
6.3 DNA直接导入和媒体介导的基因转化 201
6.4 病毒介导的基因转化 218
7 外源基因在植物转化细胞中的表达与转基因植物的鉴定 229
7.1 外源基因在植物细胞中的表达 229
7.2 启动子与外源基因表达 231
7.3 转化细胞和转基因植物的鉴定 245
第二篇 植物细胞工程——细胞及亚细胞水平的植物生物技术 245
8 植物的突变细胞系及其利用 245
8.1 植物突变细胞系的概念及类型 256
8.2 突变细胞系的实验和选择步骤 267
8.3 农业上有应用潜力的突变系的选择和利用 276
9 植物细胞大量培养及次生代谢物的生产 276
9.1 利用植物大量培养细胞生产次生代谢物的意义 285
9.2 产生次生代谢物的植物细胞的特征 288
9.3 应用植物培养细胞生产次生代谢物的要素 291
10.1 原生质体融合与体细胞杂种的意义及原理 302
10 原生质体融合与体细胞杂种 302
10.2 杂种细胞的确定和选择 305
10.3 杂种细胞的发展动态 308
10.4 体细胞杂种植株形成的原理 309
10.5 原生质体融合实验的方法和步骤 311
10.6 体细胞杂交及杂种植物的遗传和利用 313
10.7 体细胞杂种植株事例 316
10.8 亚细胞水平的遗传操作 320
第三篇 其他的植物生物技术 320
11 植物细胞组织培养技术与植物生物技术 320
11.1 花药培养 326
11.2 子房培养和孤雌生殖 333
11.3 离体胚培养、胚珠培养和胚乳培养 334
11.4 试管授粉和受精技术 339
12 快速无性繁殖、人工种子的研制及种质保藏 339
12.1 植物的快速繁殖技术 345
12.2 人工种子的研制 356
12.3 应用生物技术储藏种质的方法 362
第四篇 技术与方法 368
实验一 Ti质粒的制备与鉴定 368
附Ⅰ Ti质粒DNA的微量制备 371
附Ⅱ Eckhardt凝胶分析 372
实验二 中介载体的构建 373
附Ⅰ 琼脂糖凝胶中DNA的洗脱 378
附Ⅱ Ecoli（K514r-m+）的转化 379
附Ⅲ 重组DNA克隆的快速检测 380
实验三 突变型Ti质粒结构的鉴定 381
附Ⅰ 用缺口转译法制备探针 384
附Ⅱ 从根癌农杆菌单菌落制备Southern印迹杂交用DNA 385
实验四 广谱中介载体导入根癌农杆菌 386
实验五 在Ti质粒中引入抗生素抗性标记基因 389
实验六 通过pBR322衍生载体的直接动员将非选择性DNA导入T区段 390
实验七 共整合载体与双元载体的比较 392
附Ⅰ 用质粒DNA直接转化根癌农杆菌 398
实验八 含Tn5衍生质粒的工程菌的构建 398
实验九 冠瘿瘤与发状根的诱发 402
实验十 冠瘘瘤与发状根的离体培养及植株再生 405
实验十一 共培养法 407
实验十二 叶盘法 409
实验十三 活体接种与共感染法 411
实验十四 直接基因转移法——PEG诱导法 413
实验十五 电激法 415
附Ⅰ 电场强度和脉冲频度对DNA吸收的影响 417
实验十六 圆球体法 420
实验十七 脂质体法 422
实验十八 显微注射法 424
实验十九 植物转化组织中冠瘿碱的检测 426
附Ⅰ 用坂口试剂检测胭脂碱和章鱼碱 431
实验二十 NPTII、CAT与DHFR的检测 432
实验廿一 T-DNA在植物细胞中的转录及其与cDNA探针的杂交 437
附Ⅰ 植物总RNA的制备 441
附Ⅱ 植物poly(A)+RNA的制备 442
实验廿二 植物培养细胞中核的分离与分离核的转录 443
实验廿三 转基因植物中外源基因转录的“开关”鉴定及杂交验证 446
实验廿四 病毒RNA转染原生质体的免疫学检测法 452
附Ⅰ 简易抗体染色法 454
实验廿五 用Southern印迹杂交检测病毒DNA复制 455
附Ⅰ Sonthern印迹杂交用植物DNA的微量制备 457
附Ⅱ 植物大片段DNA的分离 458
实验廿六 在叶绿体中导入核编码蛋白质 460
附Ⅰ 植物叶绿体和线粒体DNA的分离 464
实验廿七 原生质体融合与核质杂种及胞质杂种的选择 466
实验廿八 融合产物的鉴定与体细胞杂种 469
实验廿九 体细胞杂种与胞质杂种的鉴定 470
实验三十 植物原生质体的电融合 473
实验卅一 植物突变体的分离与鉴定 474
实验卅二 植物组织细胞的冷冻保藏 476
实验卅三 植物组织的去病毒培养 478
实验卅四 高产次生代谢物细胞系的选择 480
实验卅五 悬浮细胞的同步化培养 480
附录 （APPENDEX） 484
1．植物基本培养基 484
2．遗传密码和氨基酸代号 485
3．典型基因的结构和有关术语 486
4．大肠杆菌遗传学命名规则 487
缩略词（ABBREVIATION） 489