第一篇 微生物学实验基本技术 3
第一章 常用仪器及无菌室简介 3
实验1 常用仪器及无菌室简介 3
一、灭菌器 3
二、滤菌器 5
三、恒温箱（温箱） 6
四、冰箱 6
五、液氮罐 6
六、恒温水浴箱（水浴箱） 6
七、厌氧培养箱 7
八、二氧化碳培养箱 8
九、离心机 8
十、普通光学显微镜（显微镜） 9
十一、暗视野显微镜 10
十二、荧光显微镜 10
十三、医用净化工作台（超净工作台） 11
十四、无菌室 11
十五、微量可调移液器 11
十七、电泳仪和电泳槽 12
十六、PCR仪 12
十八、紫外透射反射仪 13
第二章 实验室常用器材的处理与消毒灭菌 14
实验2 常用器材的处理与消毒灭菌 14
一、常用玻璃器材的处理方法 14
二、橡胶类制品的处理方法 14
三、金属器械的处理法 15
四、塑料及有机玻璃器械的处理法 15
五、无菌室及其他污染物品的处理法 15
六、常用器材的包装及灭菌 16
第三章 常用细菌的染色技术 17
实验3 细菌涂片的制作 17
实验4 细菌染色的基本步骤 17
实验5 美蓝染色法 18
实验6 革兰染色法 18
实验7 抗酸染色法 19
实验8 金胺染色法 20
实验9 奈瑟染色法 20
实验12 芽胞染色法 21
实验11 荚膜染色法 21
实验10 细菌鞭毛染色 法 21
实验13 细菌核质染色法 22
实验14 细菌细胞壁染色法 22
实验15 螺旋体改良镀银染色法 22
第四章 细菌形态与结构的观察 24
实验16 细菌基本形态的观察 24
实验17 细菌基本结构的观察 24
实验18 细菌特殊结构的观察 24
实验20 细菌接种技术 25
一、 接种器具 25
第五章 细菌的人工培养法 25
实验19 培养基的制备 25
二、平板划线接种法 26
三、 斜面培养基接种法 26
四、液体培养基接种法 26
五、半固体培养基接种法 27
三、厌氧培养法 28
二、二氧化碳培养法 28
实验21 细菌的培养技术 28
一、一般培养法 28
实验22 细菌的生长情况观察 29
一、液体培养基中生长情况观察 29
二、半固体培养基中生长情况观察 29
三、琼脂平板中生长情况观察 29
实验24 IMViC实验 30
一、靛基质试验（I） 30
实验23 单糖发酵试验 30
第六章 细菌生化鉴定法 30
二、甲基红试验（M） 31
三、VP（Voges-Proskauer）试验（Vi） 31
四、枸橼酸盐（Citrate）利用试验（C） 32
实验25 硫化氢试验 32
实验26 脲酶试验 32
实验27 数字编码鉴定法 33
第七章 细菌血清学试验 34
实验28 凝集试验 34
一、玻片法凝集试验 34
二、试管法凝集试验 35
四、SPA协同凝集试验 36
三、塑料板法肥达试验 36
实验29 沉淀试验（毛细管法） 37
实验30 荚膜肿胀试验 38
第八章 理化及生物因素对细菌的影响 39
实验31 紫外线对空气中微生物的杀灭作用 39
实验32 煮沸对微生物的影响 39
实验33 络合碘对皮肤的消毒作用 39
一、痢疾杆菌噬菌体特异性试验 40
实验36 噬菌体的特异性试验 40
实验35 常用消毒剂的种类、用法和用途 40
实验34 高压蒸气灭菌法的灭菌效果 40
二、金黄色葡萄球菌噬菌体特异性试验 41
实验37 细菌对抗菌药物的敏感性试验 42
一、纸片扩散法 42
二、稀释法 44
三、E-test法药敏试验 45
四、细菌L型变异 46
三、鞭毛变异 46
二、毒力变异 46
一、光滑型与粗糙型菌落变异 46
第九章 细菌的遗传与变异 46
实验38 细菌变异现象的观察 46
实验39 R质粒传递试验 47
实验40 质粒DNA转化试验 48
实验41 常见球菌的形态及染色性观察 53
实验42 常见球菌的培养特性观察 53
实验43 血标本的细菌学检查 53
第十章 球菌 53
第二篇 临床常见病原菌的培养与鉴定 53
实验44 β-内酰胺酶的检测 55
一、酸度法 55
二、碘量法 56
实验45 抗链球菌溶素“O”的检测 56
一、ASO的溶血法检测 56
二、抗链球菌溶素“O”胶乳法测定 57
实验46 荧光抗体染色检测淋球菌 57
实验48 肠杆菌科细菌的培养特性 59
实验49 粪便标本的细菌学检查 59
第十一章 肠杆菌科细菌 59
实验47 肠杆菌科细菌的形态及染色性观察 59
实验50 尿标本的定量培养法 61
实验51 细菌内毒素的检测（鲎试验） 62
第十二章 厌氧性细菌 63
实验52 厌氧性细菌的形态及染色性观察 63
实验53 厌氧性细菌的培养特性观察 63
实验54 产气荚膜梭菌接种牛乳培养 基、葡萄糖高层琼脂方法 64
实验55 产气荚膜梭菌的动物试验 64
实验57 疑似白喉患者咽拭子的细菌学检查 65
第十三章 棒状杆菌属 65
实验56 棒状杆菌属的形态及染色性观察 65
实验58 白喉杆菌毒力试验 66
一、琼脂平板毒力试验（Elek平板毒力试验） 66
二、动物试验 66
第十四章 分枝杆菌属及需氧性放线索菌 67
实验59 分枝杆菌属的形态及染色性观察 67
实验60 结核杆菌的培养特性观察及与非结核分枝杆菌的区别 68
实验61 结核病人痰标本抗酸染色 68
实验62 ELISA 技术检测结核抗体——IgM 69
实验63 ELISA技术检测结核抗体——IgG 70
实验64 诺卡菌属 71
第十五章 需氧芽胞杆菌 72
实验65 炭疽杆菌与枯草杆菌的形态及染色性观察 72
实验66 炭疽杆菌与枯草杆菌的培养特性观察 72
实验67 炭疽杆菌串珠试验 72
实验68 蜡样芽胞杆菌食物中毒的细菌学检查 73
第十六章 霍乱弧菌、副溶血弧菌 75
实验69 霍乱弧菌的鉴定 75
实验70 副溶血性弧菌的鉴定 76
实验71 空肠弯曲菌的鉴定 79
第十七章 弯曲菌属、幽门螺杆菌、军团菌属 79
实验72 幽门螺杆菌的鉴定 80
实验73 军团菌的鉴定 81
实验74 ELISA技术检测幽门螺杆菌IgM 83
第十八章 微生物自动分析 84
实验75 微生物自动分析的原理 84
一、自动血培养检测及分析 系统的工作原理 84
二、细菌自动鉴定及药敏系统 84
实验76 大肠杆菌的自动分析仪分析 85
实验79 钩体的显微镜凝集（显凝）试验 88
实验78 钩体的动力检查——压滴法 88
实验77 病原性螺旋体的形态及染争性观察 88
第十九章 螺旋体 88
实验80 梅毒螺旋 体血清学试验 89
实验81 伯氏螺旋体的血清学试验 91
第二十章 支原体 92
实验82 肺炎支原体形态及菌落观察 92
实验83 肺炎支原体冷凝集试验 92
实验84 肺炎支原体IgM检测 93
实验85 解脲脲原体脲酶试验 94
实验87 荧光抗体法检测沙眼衣原体 95
实验86 姬姆萨染色检查沙眼衣原体包涵体 95
第二十一章 衣原体 95
实验88 金标免疫斑点法检测沙眼衣原体抗体 96
实验89 细胞培养分离衣原体 96
第二十二章 立克次体 98
实验90 恙虫病立克次体的形态观察 98
实验91 外斐反应 98
第二十三章 真菌 100
实验92 真菌的基本形态及结构观察 100
二、真菌小培养 101
实验93 真菌的培养特性观察 101
一、真菌大培养 101
实验94 真菌的药敏试验 102
实验95 常见浅部真菌的鉴定 103
一、真菌皮屑的镜检 103
二、毛发穿孔试验 103
实验96 常见深部真菌的鉴定 104
一、新生隐球菌的检验 104
二、念珠菌的检验 106
实验97 病毒包涵体观察 111
实验98 病毒学实验中电子显微镜技术 111
第三篇 病毒学实验 111
第二十四章 病毒形态结构观察 111
第二十五章 病毒的分离培养技术 114
实验99 病毒的动物接种法 114
实验100 病毒的鸡胚接种法 114
一、鸡胚的孵育及检查 114
二、病毒的接种途径 115
四、病毒的收获 116
三、培养及观察 116
实验101 病毒的组织培养法 117
一、细胞培养法 117
二、病毒接种法及细胞病变观察 118
第二十六章 病毒数量与感染性的测定 119
实验102 蚀斑试验 119
实验103 TCID50测定 119
第二十七章 呼吸道病毒 121
实验104 流感病毒的分离与鉴定 121
实验105 ELISA技术检测流感 病毒IgM 123
实验106 ELISA技术检测腮腺炎病毒IgM 124
实验107 ELISA技术检测麻疹病毒IgM 125
实验108 ELISA技术检测呼吸道合胞病毒IgM 126
实验109 ELISA技术测定风疹病毒IgM 127
第二十八章 肠道病毒 129
实验100 肠道病毒的分离鉴定 129
实验111 轮状病毒的检测 130
一、免疫电镀技术 130
二、ELISA间接双抗 体夹心法 130
实验112 ILISA检测CSV3IgM抗体 131
三、轮状病毒 抗原的快速一步法检测 131
第二十九章 肝炎病毒 133
实验113 ELISA技术检测甲型肝炎病毒IgM 133
实验114 反向间接血凝法（RPHA）检测HbsAg 134
实验115 ELISA技术检测HbsAg 134
实验116 ELISA检测乙型肝炎病毒核心抗体IgM 135
实验117 ELISA技术检测HBeAb 136
实验118 ELISA技术检测HCV-IgM 137
实验119 ELISA技术测检HEV- IgG 138
实验120 ELISA技术快速检测HV-IgM 139
实验121 ELISA技术检测HGV- IgG 140
第三十章 人类免疫缺陷病毒 141
实验122 ELISA技术检测HIV抗体 141
实验123 斑点免疫法检测HIV（1/2型） 142
实验124 HIV抗体确证试验——WB法 143
第三十一章 出血热病毒 145
实验125 免疫荧光法检测汉坦病毒IgM 145
实验126 ELISA技术检测汉坦病毒特异性IgM 146
实验128 ELISA检测抗HSV-1 IgM 147
实验127 免疫荧光技术检测HCMV 147
第三十二章 疱疹病毒 147
实验129 ELISA技术检测HCMV IgM 148
实验130 ELISA技术检测EB病毒核抗原（EB—NA）IgM 149
第四篇 微生物学动物实验 153
第三十三章 动物实验的基本知识和技术 153
实验131 实验动物的管理、选择及其抓取固定方法 153
一、实验动物的管理 153
二、实验动物的选择 153
三、实验动物的抓取固定方法 153
一、动物接种技术 155
实验132 动物接种与采血技术 155
二、动物采血技术 156
第三十四章 微生物学动物实验 157
实验133 免疫血清的制备 157
一、动物的选择与准备 157
二、抗原的制备 157
三、注射方法及免疫血清的采取 157
一、 破伤风痉挛毒素的检测 158
实验135 体内法细菌外毒素的检测 158
实验134 感染动物尸体解剖观察及细菌学检查法 158
四、血清的处理与保存 158
二、大肠杆菌耐热肠毒素（ST）的检测 159
三、白喉杆菌毒力试验 159
实验136 检测细菌致病性的动物实验 160
一、 产气英膜梭菌的动物实验 160
二、副溶血性弧菌的毒力试验 160
三、蜡样芽胞杆菌毒力试验 161
实验137 细菌的毒力变异 161
实验138 DNA的提取 165
一、酚—氯仿—异戊醇法 165
第五篇 分子微生物学试验 165
第三十五章 分子微生物学实验基本技术 165
二、快速法 166
实验139 RNA的提取 166
实验140 DNA凝胶电泳 167
第三十六章 部分病原微生物的分子生物学检测 169
实验141 PCR技术检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）mes A基因 169
实验143 PCR法检测HBV 170
实验142 PCR技术检测淋球菌 170
实验144 斑点杂交法检测HBV—DNA 171
实验145 RT—PCR技术检测HCV RNA 173
实验146 PCR法检测HCMV 174
实验147 PCR微板核酸杂 交ELISA检测沙眼衣原体DNA 175
实验148 PCR微板核酸杂交EISA检测TB 176
实验149 物体表面的检测 181
一、经典方法 181
实验150 医护人员手检测 181
第三十七章 医院感染的微生物学检测 181
第六篇 医院内感染的微生物学检测 181
二、细菌定量采样皿法 182
实验151 空气监测 182
实验152 血透液的监测 183
实验153 消毒液监测 183
实验154 无菌器材、一次性注射用品监测 184
实验155 输注用液中细菌内毒素的监测 184
一、生活饮用水的检验 187
实验157 细菌总数的测定 187
实验156 水卫生细菌学检测的水样采集 187
第七篇 卫生细菌学检查 187
第三十八章 饮用水的卫生细菌学检测 187
二、 水源水的检验 188
实验158 大肠菌群的测定 189
一、发酵法 189
二、滤膜法 190
实验159 大肠菌群的一步法测定 192
实验160 细菌总数的测定 193
实验161 大肠菌群的检验 193
第三十九章 食品卫生细菌学检测 193
实验162 粪大肠菌群的检验 195
实验163 奶粉中金黄色葡萄球菌的检验 195
第四十章 空气的卫生细菌学检验 198
实验164 细菌总数的测定 198
一、沉降法 198
二、滤过法 198
实验165 空气中链球菌检查法 199
附录1：常用试剂的配制 201
附录2：常用培养基的配制 205
参考书目 213