第一章 核酸探针与原位杂交技术的基础知识 1
第一节 核酸的分子结构 1
第二节 核酸的变性与复性 6
第三节 工具酶 9
第四节 载体 12
第五节 DNA重组技术 15
第二章 核酸分子杂交技术的建立与进展 26
第一节 核酸分子杂交技术建立与发展 26
第二节 原位杂交技术建立与发展 29
第三节 原位杂交组织化学技术的应用 31
第三章 核酸探针模板的制备 35
第一节 感受态细菌的制备和质粒的转化 35
第二节 重组质粒的大量扩增 37
第三节 重组质粒的小量扩增、抽提和纯化 39
第四节 通过核酸限制性内切酶制备目的cDNA片段 40
第五节 转录cRNA用的线性DNA模板的制备 42
第六节 寡聚核苷酸的制备 44
第七节 用RT-PCR方法制备核酸探针模板 45
第八节 应用PCR方法制备核酸探针模板 46
第四章 核酸探针的放射性标记和纯化方法 49
第一节 放射性物质的一般特性 50
第二节 通过酶学修饰标记DNA 54
第五章 核酸探针的非放射性标记方法 78
第一节 通过缺口平移用修饰的核苷酸标记DNA的方法 82
第二节 通过随机引物法用修饰核苷酸标记DNA 87
第三节 接尾法标记DNA片段 89
第四节 生物素化的RNA探针的制备 92
第五节 地高辛反义cRNA探针的制备 95
第六节 寡核苷酸的标记 96
第七节 核苷酸的原位标记法 98
第一节 探针选择和特异性 102
第六章 原位核酸分子杂交实验条件的选择 102
第二节 核酸分子杂交的速率 104
第三节 核酸探针浓度 106
第四节 杂交及洗涤条件的严格性 106
第五节 杂交反应的促进剂 108
第六节 探针长度 110
第七章 原位杂交组织化学所用组织细胞标本的制备 111
第一节 载玻片的预处理 112
第二节 组织细胞的取材与固定 114
第三节 组织细胞涂片和切片的制作 118
第四节 染色体标本的制作 121
第八章 原位杂交组织化学实验步骤 124
第一节 地高辛标记RNA探针原位杂交组织化学漂染法 127
第二节 核素3H标记的RNA核探针原位杂交片染法 130
第三节 地高辛标记RNA探针ISHH与IHC联合使用 132
第四节 核素3H标记RNA核酸探针原位杂交与免疫组织化学联合法 136
第五节 石蜡包埋组织切片原位杂交技术程序 138
第六节 35S标记RNA探针的原位杂交片染法 139
第七节 生物素标记核酸探针的原位杂交组织化学片染法 142
第八节 用地高辛标记的DNA探针检测培养细胞中的mRNA 145
第九节 地高辛标记寡聚核苷酸探针原位杂交组织化学 147
第十节 全胚原位杂交组织化学染色程序 149
第十一节 染色体原位杂交组织化学程序 151
第十二节 电子显微镜原位杂交组织化学技术 153
第十三节 原位PCR技术 157
第十四节 双重原位杂交组织化学技术 160
第十五节 原位引物延伸标记方法 164
第十六节 原位杂交组织化学技术的对照实验 166
第十七节 原位杂交组织化学实验中的最常遇到的问题 168
第九章 应用计算机图像分析系统对原位杂交信号的定量分析 171
第一节 计算机生物图像分析的基本原理 171
第二节 图像分析在原位杂交结果分析中的应用 175
附录：核酸探针与原位杂交技术所需仪器与试剂 180