第一章 生物化学与分子生物学中的定量分析 1
第一节 滴定分析法 1
一、 基本原理 1
二、 标准溶液 3
三、 滴定分析的计算 5
四、 减少滴定误差的方法 6
第二节 紫外可见分光光度法 7
一、 基本原理 7
二、 分光光度计的主要部件 9
三、 分光光度法的定性和定量 10
四、 减少测量误差的方法 11
第三节 荧光分析法 12
一、 基本原理 12
二、 荧光仪的主要部件 13
三、 荧光分析法的定性和定量 13
四、 减少测量误差的方法 14
第四节 酶活力及动力学数据的测定 15
一、 酶活力的测定 15
二、 KM和VMAX的测定 18
三、 基本动力学数据的测定 19
实验1-1 粗脂肪的提取和定量测定 20
实验1-2 碘价的测定(Hanus法) 21
实验1-3 皂化价的测定 22
实验1-4 酸价的测定 23
实验1-5 脂肪乙酰价的测定 24
实验1-6 蛋白质的测定(凯氏定氮法) 25
实验1-7 2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的含量 26
实验1-8 碘量法测定维生素C的含量 28
实验1-9 血糖定量测定(GOD-PAP法) 29
实验1-10 蒽酮比色定糖法 30
实验1-11 肝素钠的容量测定 30
实验1-12 血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法) 32
实验1-13 血清总胆固醇的测定(邻苯二甲醛法) 33
实验1-14 双缩脲法测定蛋白质含量 33
实验1-15 Folin试剂法(Lowry法)测定蛋白质含量 34
实验1-16 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 35
实验1-17 紫外吸收法测定蛋白质含量 36
实验1-18 紫外吸收法测定核酸含量 37
实验1-19 二苯胺显色法测定DNA含量 38
实验1-20 地衣酚显色法测定RNA含量 39
实验1-21 定磷法测定核酸含量 40
实验1-22 荧光法测定维生素B2含量 42
实验1-23 枯草芽孢杆菌蛋白酶活力测定 43
实验1-24 血清丙氨酸氨基移换酶(ALT)的测定 44
实验1-25 酸性磷酸酯酶的测定 46
实验1-26 碱性磷酸酶的反应动力学性质 46
第二章 生物大分子的提取、沉淀和离心分离 49
第一节 生物大分子的提取 49
一、 材料的选择与处理 49
二、 确定测定方法 50
三、 细胞的破碎 50
四、 抽提 52
第二节 沉淀分离技术 54
一、 蛋白质的沉淀分离 54
二、 核酸的提取与沉淀分离 57
第三节 离心分离技术 59
一、 离心机的种类与用途 59
二、 离心分离方法的选择 60
三、 离心条件的确定 61
实验2-1 醇脱氢酶的提纯 63
实验2-2 大蒜细胞SOD的提取与分离 65
实验2-3 大鼠肝rRNA的提取与分离 66
实验2-4 枯草芽杆孢菌碱性磷酸酶的提取与盐析 67
实验2-5 枯草芽孢杆菌DNA的提取与分离 69
实验2-6 酵母RNA的提取与分离 70
实验2-7 从肝脏中提取DNA 71
实验2-8 大肠杆菌细胞膜的分离 72
实验2-9 RNA的蔗糖密度梯度离心分离 73
实验2-10 大鼠肝细胞核的分离 74
第三章 层析技术 75
第一节 吸附层析 75
一、 吸附柱层析 76
二、 聚酰胺薄膜层析 80
第二节 分配层析 80
一、 概述 80
二、 纸层析 81
第三节 凝胶层析 85
一、 基本原理 85
二、 凝胶的选择 86
三、 操作 87
第四节 离子交换层析 88
一、 基本原理 88
二、 离子交换剂 89
三、 操作 92
第五节 亲和层析 94
一、 配基与偶联凝胶的选择与处理 95
二、 亲和层析的操作条件 96
第六节 薄层层析 96
一、 支持剂的选择与处理 96
二、 薄层板的制作 97
三、 层析方法 98
第七节 气相色谱 99
一、 基本原理 99
二、 气相色谱的气路系统 100
三、 色谱柱 101
四、 检测器 102
五、 定性和定量方法 103
第八节 高效液相色谱 104
一、 概述 104
二、 HPLC的特点 104
三、 HPLC的分类 105
四、 HPLC的仪器构成 107
五、 定性定量方法 107
实验3-1 氨基酸的纸层析 108
实验3-2 微晶纤维素薄板层析法分离氨基酸 109
实验3-3 核苷酸的离子交换层析 110
实验3-4 DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析 112
实验3-5 凝胶层析测定蛋白质的Mr 113
实验3-6 鸡卵类黏蛋白的制备 115
实验3-7 胰蛋白酶的亲和层析 118
实验3-8 醇酯成分的气相层析 120
实验3-9 HRLC法测定生物类黄酮含量 121
实验3-1O HPLC法测定维生素A含量 122
实验3-11 HPLC法测定维生素D含量 124
第四章 电泳技术 126
第一节 基本原理 126
一、 泳动度 126
二、 影响泳动度的因素 127
第二节 醋酸纤维素薄膜电泳 128
第三节 琼脂糖凝胶电泳 129
一、 琼脂糖凝胶的特点 129
二、 DNA的琼脂糖凝胶电泳 129
三、 印迹转移电泳 131
四、 交变脉冲电场凝胶电泳 132
第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 133
一、 聚丙烯酰胺凝胶的特点 133
二、 凝胶聚合的原理及有关特性 133
三、 PAGE原理 135
四、 SDS-PAGE原理 137
五、 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理 138
六、 聚丙烯酰胺凝胶双向电泳原理 142
七、 染色方法 142
第五节 高效毛细管电泳 146
一、 基本原理 146
二、 实验方法 147
三、 分离类型及应用 148
实验4-1 血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳 149
实验4-2 垂直板PAGE分离血清蛋白 151
实验4-3 SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量 153
实验4-4 SDS-PAGE的银染色法 155
实验4-5 水平超薄型IEF-PAGE 156
实验4-6 蛋白质的双向凝胶电泳 159
实验4-7 DNA的琼脂糖凝胶电泳 160
实验4-8 PAGE分离RNA 161
实验4-9 对流免疫电泳法测定胎儿甲种球蛋白 162
实验4-10 火箭免疫电泳法测定抗原含量 164
第五章 分子生物学基本技术 165
第一节 DNA的体外合成 165
一、 DNA的化学合成 165
二、 聚合酶链反应技术 166
第二节 核酸的分子杂交 170
一、 探针的种类与选择 171
二、 标记物的选择 171
三、 探针的放射性同位素标记 175
四、 探针的非放射性标记 176
五、 膜上印迹杂交的条件选择 176
六、 杂交信号的检测 179
第三节 基因克隆 181
一、 目的基因的来源 181
二、 常用的克隆载体 182
三、 DNA分子的体外连接 184
四、 重组子导入受体细胞 186
五、 重组子的筛选 186
六、 基因组文库的构建 188
七、 CDNA文库的构建 190
第四节 基因表达 191
一、 原核生物的表达载体 191
二、 用于原核细胞表达的外源基因 193
三、 提高表达水平的措施 193
四、 外源基因的哺乳动物细胞中的表达 197
五、 转基因植物 200
第五节 转录调控研究技术 201
一、 基因功能状态的研究方法 201
二、 顺式作用元件与反式作用因子的分析方法 203
实验5-1 血液标本中DNA的提取 205
实验5-2哺乳动物基因组DNA的提取 206
实验5-3mRNA提取与纯化 207
实验5-4脉冲电场电泳分离DNA 209
实验5-5大肠杆菌的转化 210
实验5-6质粒DNA的提取 210
实验5-7质粒DNA的酶切及电泳鉴定 212
实验5-8质粒DNA的分子杂交 213
实验5-9使用光敏生物素探针的Southern杂交 215
实验5-1ODNA重组 217
实验5-11PCR扩增DNA 218
实验5-12反转录聚合酶链反应(RT-RCR) 219
实验5-13外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 220
附录常用缓冲液的配制 221