第一章 电子显微镜技术发展简史 1
第一节 电子显微镜发展简史 2
一、国外电子显微镜生产简况 2
二、国内电子显微镜生产简况 2
三、电子显微镜的发展 3
第二节 电子显微镜技术的发展与应用 3
一、电子显微镜技术的发展 3
二、电子显微镜技术的应用 5
第三节 其他显微技术的发展 6
第四节 电子显微学主要学术组织和刊物 7
一、国内电子显微学学术组织及刊物 7
二、国际电子显微学的主要期刊杂志及主要参考书 7
提要 8
思考题 9
第二章 样品包埋块制作 10
第一节 概述 10
一、光镜和电镜样品差异 10
二、包埋块制作程序与质量标准 11
第二节 取材与固定 12
一、取材 12
二、固定 12
第三节 漂洗与脱水 22
一、漂洗 22
二、脱水 23
第四节 浸透与包埋 25
一、包埋剂 25
二、包埋剂配制注意事项 29
三、包埋模具 29
第五节 制作包埋块常规实验方法 30
一、取材与固定 30
二、脱水与浸透 31
三、包埋与聚合 31
四、制样常规操作程序 32
第六节 制作包埋块特殊实验方法 33
一、组织的快速包埋 33
二、重新包埋 35
三、可逆包埋技术 37
提要 38
思考题 38
第三章 超薄切片 40
第一节 切片刀具与修整包埋块 40
一、玻璃刀 40
二、钻石刀 41
三、制作水槽 42
四、修整包埋块 42
第二节 载网 43
一、载网种类及特性 43
二、载网的处理 44
第三节 支持膜 45
一、方华膜 45
二、碳膜 47
三、火棉胶基底碳膜 48
四、硝化纤维素基底碳膜 48
五、微筛膜 49
六、单孔及大孔铜网制膜技巧 51
第四节 切片 51
一、组织面粗切 52
二、切片前的调整 52
三、切片 53
四、切片问题分析与解决 54
第五节 半薄切片 57
一、切片装置及切片方法 57
二、捞片、染色及保存 58
提要 59
思考题 59
第四章 正染色 61
第一节 概述 61
一、电子显微镜图像反差形成原理 61
二、染色的必要性 62
第二节 染液 62
一、醋酸双氧铀 62
二、柠檬酸铅 63
第三节 染色方法 65
一、包埋前铀染色 65
二、包埋后铀染色 65
三、操作方法 65
四、防污染措施 66
第四节 染液特性及染色时间 68
一、染液的渗透 68
二、染液的特效染色 68
三、染色时间 69
提要 69
思考题 70
第五章 免疫电子显微镜术 71
第一节 概述 71
一、胶体金标记技术的发展 71
二、胶体金标记优越性 72
第二节 抗体 73
一、抗原与抗体 73
二、抗体的应用 74
第三节 样品制备 74
一、低温样品制备技术 75
二、常规样品制备技术 78
第四节 载网处理与超薄切片 80
一、载网处理 80
二、超薄切片 81
第五节 胶体金结合物制备 81
一、蛋白质A-金颗粒复合物的制备 81
二、免疫球蛋白-金颗粒复合物的制备 84
第六节 免疫细胞化学标记 84
一、免疫球蛋白-金颗粒复合物标记 84
二、蛋白质A-金复合物标记 87
三、免疫酶细胞化学标记方法 89
四、影响特异性标记因素 90
第七节 扫描电镜免疫标记技术 90
一、样品处理方法 91
二、免疫标记 92
三、被标记样品的处理 93
第八节 冷冻断裂细胞化学 93
一、标记特点 94
二、标记方法 94
提要 95
思考题 96
第六章 冷冻复型 98
第一节 概述 98
一、技术特点与应用 98
二、实验原理与实验过程 100
第二节 冷冻复型装置 101
一、装置类型 101
二、仪器装置介绍 102
第三节 操作方法 104
一、样品取材 104
二、样品放置 105
三、样品冷冻与断裂 106
四、冷冻蚀刻 107
五、真空喷涂 108
六、复型膜剥离 110
第四节 样品的冰晶损伤 112
一、冰晶的形成与危害 112
二、防冰晶措施 112
第五节 冷冻复型细胞断裂面命名 113
一、ABCD命名法 114
二、通用命名法 114
第六节 快速冷冻深度蚀刻旋转投影技术 115
提要 115
思考题 116
第七章 冷冻固定和冷冻置换 118
第一节 冷冻固定 118
一、特点 118
二、机制 119
三、冷冻剂 119
四、防冻剂 120
五、冷冻固定方法 120
第二节 冷冻置换 123
一、冷冻置换介质 124
二、冷冻置换方法 125
三、影响冷冻置换因素 127
提要 128
思考题 129
第八章 负染色技术 130
第一节 概述 130
第二节 染液种类及其特性 131
一、磷钨酸 131
二、醋酸双氧铀 132
三、甲酸铀 132
四、钼酸铵 132
第三节 样品的制备 132
一、取样方式 132
二、支持膜 133
第四节 负染色操作方法 134
一、操作方法 134
二、戊二醛固定病毒样品染色 136
三、对照样品染色 137
第五节 负染色技术技巧 137
一、影响负染色因素 137
二、电镜观察 138
提要 139
思考题 140
第九章 核酸大分子电镜样品制备技术 141
第一节 概述 141
第二节 实验方法 142
一、展开法 142
二、扩散法 143
三、一步释放法 144
四、展膜技术的改进 144
五、金属投影与电镜观察 145
提要 148
思考题 149
第十章 透射电子显微镜 150
第一节 概述 150
一、电子显微镜特征 150
二、产品类型 151
三、电子显微镜发展简史 151
第二节 电子光学基本知识 152
一、光学显微镜局限性 152
二、电子束特性 153
第三节 透射电子显微镜结构与功能 154
一、电镜镜筒 154
二、真空系统 160
三、电源系统 161
第四节 电子显微镜调整与维护 162
一、对中调整 162
二、日常维护 163
第五节 电子显微镜的使用 164
一、工作条件选择 164
二、电镜使用要点 165
三、电镜观察技巧 167
提要 168
思考题 169
第十一章 扫描电子显微镜及样品制备 171
第一节 扫描电镜结构及原理 172
一、扫描电镜与透射电镜区别 172
二、扫描电镜结构功能 172
三、扫描电镜工作原理 175
四、图像分辨率及放大率 175
第二节 扫描电镜常规样品制备 176
一、样品要求 176
二、样品固定及脱水 177
三、样品干燥 178
四、金属喷涂 182
第三节 扫描电镜冷冻断裂技术 184
一、概述 184
二、冷冻断裂实验步骤 185
提要 186
思考题 187
第十二章 电子显微镜的实验室安全 188
第一节 人身与设备安全 188
一、人身安全 188
二、仪器安全 190
第二节 化学药品安全 191
一、化学药品的安全使用 191
二、化学药品的毒性防护 193
第三节 实验室安全 194
一、安全防火 195
二、安全用电 196
提要 196
思考题 196
参考文献 198
中英文名词索引 201