第一章 绪论 1
第一节 分子生物学检验技术的理论基础 1
一、病原生物基因与人类感染性疾病 2
二、基因变异与单基因病 2
三、基因变异与多基因病 2
四、线粒体基因变异与线粒体遗传病 2
五、肿瘤相关基因与恶性肿瘤 3
第二节 分子生物学检验技术的分析对象 3
一、病原生物基因 3
二、基因变异 4
三、基因多态性 4
第三节 分子生物学检验技术的应用前景 5
第二章 基因组与基因组学 6
第一节 原核生物基因组 7
一、原核生物基因组特征 7
二、质粒 9
三、转座因子 12
第二节 病毒基因组 13
一、病毒基因组特征 13
二、DNA病毒 15
三、RNA病毒 20
第三节 真核生物基因组 23
一、细胞核基因组特征 23
二、细胞质基因组特征 30
三、基因组结构与疾病 30
第四节 人类基因组与人类基因组计划 34
一、人类基因组 34
二、人类基因组计划 35
三、功能基因组计划 37
第三章 蛋白质组与蛋白质组学 41
第一节 蛋白质组及其质点的分离与分析 42
一、分离纯化 42
二、分析鉴定 48
第二节 蛋白质相互作用研究 52
一、蛋白质-蛋白质 53
二、蛋白质-核酸 55
第三节 蛋白质数据库及其应用 57
一、蛋白质数据库 57
二、蛋白质数据库应用 58
第四章 肿瘤相关基因 61
第一节 癌基因 61
一、病毒癌基因 62
二、细胞癌基因 63
三、原癌基因激活机制 66
第二节 抑癌基因 68
一、抑癌基因与肿瘤 69
二、抑癌基因失活机制 69
第三节 肿瘤转移相关基因 71
一、肿瘤转移基因 71
二、肿瘤转移抑制基因 72
第四节 肿瘤发生 73
第五节 肿瘤相关基因的检测和评价 74
一、检测策略与主要检测技术 74
二、原癌基因与抑癌基因的检测 74
第五章 核酸的分离与纯化 77
第一节 核酸分离与纯化的设计原则 77
一、材料与方法的选择 78
二、技术路线设计 78
三、鉴定与保存 79
第二节 基因组DNA的分离与纯化 81
一、分离与纯化方法 82
二、DNA片段回收 84
三、方法学评价与质量保证 86
第三节 质粒DNA的提取与纯化 87
一、质粒的结构与理化性质 87
二、提取与纯化方法 88
三、质粒DNA的回收 90
四、方法学评价与质量保证 90
第四节 RNA的分离与纯化 91
一、RNA的制备条件与环境 91
二、总RNA的分离与纯化 91
三、mRNA的分离与纯化 93
第六章 DNA重组技术 96
第一节 常用工具酶 97
一、限制性内切酶 97
二、DNA连接酶 98
三、分子克隆中常用的其他酶 99
第二节 常用载体 99
一、质粒载体 100
二、噬菌体载体 102
三、穿梭载体 104
四、人工染色体 106
第三节 DNA重组与鉴定 106
一、DNA重组 107
二、重组子筛选与鉴定 111
三、DNA序列测定 114
第七章 克隆基因表达及基因干扰 118
第一节 外源基因表达 118
一、原核生物表达体系 119
二、真核生物表达体系 122
第二节 表达产物分离、纯化与鉴定 126
一、大肠杆菌重组表达蛋白的分离与纯化 126
二、酵母重组表达蛋白的分离与纯化 127
三、CHO细胞重组表达蛋白的分离与纯化 127
四、表达产物的鉴定 128
第三节 基因表达干扰技术 129
一、反义核酸技术 129
二、核酶与脱氧核酶 131
三、小干扰RNA 137
四、微RNA 142
第八章 核酸分子杂交技术 146
第一节 基本原理与分类 147
一、基本原理 147
二、分类 147
第二节 探针设计与标记 151
一、探针种类选择 151
二、探针长度 153
三、探针标记 153
第三节 分子杂交 157
一、核酸分子与固相介质的结合 157
二、杂交 160
三、信号检测 161
第四节 核酸分子杂交技术应用 164
一、Southern印迹杂交 164
二、Northern印迹杂交 165
三、原位杂交 165
四、液相杂交 167
第九章 聚合酶链反应及相关技术 169
第一节 聚合酶链反应 169
一、PCR原理和反应过程 169
二、PCR反应体系和反应条件 170
三、PCR技术质量控制 173
第二节 以PCR为基础的相关技术 174
一、反转录PCR 174
二、巢式PCR 175
三、定量PCR 175
四、多重PCR 179
五、PCR诱导定点突变 180
六、原位PCR 181
七、差异显示PCR 182
八、其他扩增技术 183
第三节 PCR产物检测 185
一、PCR-RFLP 185
二、等位基因特异性寡核苷酸 185
三、单链构象多态性 186
四、变性梯度凝胶电泳 186
五、融点曲线分析 187
六、PCR产物序列分析 187
第十章 生物芯片技术 189
第一节 DNA芯片 190
一、芯片制备 191
二、样品制备 193
三、杂交与结果分析 194
四、基因芯片技术在医学中的应用 194
第二节 蛋白质芯片 196
一、芯片制备 197
二、样品制备 197
三、杂交与结果分析 197
四、蛋白质芯片技术在医学中的应用 198
五、存在的问题 198
第十一章 分子生物学检验技术的临床应用 200
第一节 样本来源 201
一、病原生物基因组样本 201
二、人类基因组样本 201
第二节 在病原生物基因组相关疾病研究和诊断中的应用 202
一、感染性疾病诊断和治疗监测 202
二、耐药监测与分子流行病学调查 211
三、医院获得性感染监测与控制 211
第三节 在人类基因组相关疾病研究和诊断中的应用 212
一、在单基因病中的应用 212
二、在多基因病中的应用 219
三、在线粒体遗传病中的应用 222
四、在白血病中的应用 224
第四节 在移植配型和个体识别中的应用 225
一、在移植配型中的应用 225
二、在个体识别中的应用 226
参考文献 229
中英文索引 231