第一篇 医学寄生虫病诊断技术 3
第一章 病原学诊断技术 3
第一节 粪便检查技术 3
一、直接涂片法 3
二、改良加藤法 4
三、浓集法 4
四、钩蚴培养法 8
五、毛蚴孵化法 9
六、成虫检查法 9
七、染色检查法 10
第二节 肛周虫卵检查技术 12
一、透明胶纸法 12
二、棉签拭子法 12
三、胶膜粘贴法 13
第三节 血液检查技术 13
一、血涂片制作技术 13
二、血涂片染色技术 14
三、其他血液检查方法 16
第四节 活组织检查技术 17
一、淋巴结活组织检查技术 17
二、皮肤活组织检查技术 17
三、肌肉活组织检查技术 18
四、肠黏膜活组织检查技术 18
五、肺活组织检查技术 19
六、肝脾活组织检查技术 20
第五节 其他标本的检查技术 20
一、尿液检查技术 20
二、痰液检查技术 20
三、十二指肠抽取物检查技术 21
四、阴道分泌物检查技术 21
五、脑脊液检查技术 22
六、骨髓检查技术 22
七、其他检查技术 23
第二章 免疫学诊断技术 24
第一节 抗原制备技术 25
一、寄生虫抗原种类 25
二、抗原制备技术 26
三、寄生虫抗原的制备 31
第二节 抗体制备技术 33
一、多克隆抗体 34
二、单克隆抗体 35
三、基因工程抗体 36
第三节 皮肤试验技术 37
一、皮内试验 37
二、挑刺试验 38
第四节 凝集反应技术 39
一、间接血凝试验 39
二、间接血凝抑制试验 42
三、胶乳凝集试验 42
第五节 沉淀反应技术 43
第六节 免疫电泳技术 44
第七节 免疫标记技术 45
一、免疫荧光标记技术 46
二、放射免疫标记技术 49
三、酶免疫标记技术 49
四、胶体金标记技术 58
五、生物素—亲和素标记技术 60
六、免疫电镜技术 61
第八节 免疫组织化学技术 62
一、免疫组织化学的金过程 62
二、免疫组织化学技术 64
第九节 寄生虫学特有的免疫诊断技术 66
一、环蚴沉淀试验 66
二、尾蚴膜试验 66
三、弓形虫染色试验 67
第三章 寄生虫感染的影像诊断 68
第一节 脑部影像学诊断技术 68
一、脑囊虫病 68
二、脑包虫病 71
三、脑血吸虫病 72
四、脑型肺吸虫病 74
五、脑弓形虫病 75
第二节 肺部影像学诊断 76
一、肺型并殖吸虫病 76
二、肺包虫病 79
三、肺型血吸虫病 82
第三节 肝部影像学诊断技术 83
一、肝包虫病 83
二、肝血吸虫病 86
三、肝华支睾吸虫病 87
四、阿米巴肝脓肿 90
第四章 分子生物学诊断技术 92
第一节 PCR技术 92
一、原理 92
二、反应成分 92
三、反应条件 93
四、PCR技术在寄生虫学中的应用 94
第二节 核酸分子探针技术 97
一、弓形虫病 98
二、丝虫病 99
三、疟疾 100
四、囊尾蚴病 101
第三节 DNA芯片技术的应用 105
一、血吸虫病 105
二、弓形虫病 105
三、疟疾 106
四、肠道原虫病 106
第四节 核糖体展示技术 107
一、核糖体展示技术的基本原理 107
二、mRNA展示技术的基本原理 107
三、核糖体展示技术基本操作过程 108
第二篇 分子生物学研究技术 119
第五章 蛋白质的分离、纯化与鉴定技术 119
第一节 蛋白质的分离与纯化技术 119
一、凝胶层析 119
二、沉淀技术 122
三、离子交换层析法 123
四、吸附层析 127
五、亲和层析 128
第二节 蛋白质的理化鉴定 130
一、含量测定 130
二、凝胶电泳 133
三、染色鉴定 135
四、一维和二维肽图谱 136
五、肽的反相高效液相色谱 137
六、序列分析 137
第六章 核酸的分离、纯化技术 139
第一节 提取DNA 139
一、提取原则 139
二、质粒DNA的提取与纯化 141
三、噬菌体DNA的提取与纯化 145
四、真核细胞DNA的提取和纯化 148
第二节 DNA凝胶电泳 152
一、琼脂糖凝胶电泳 152
二、聚丙烯酰胺凝胶电泳 154
第三节 真核细胞RNA的制备 157
一、异硫氢酸胍法 157
二、TRIzol RNA提取试剂盒 157
三、细胞质RNA的制备 158
第四节 RNA凝胶电泳 159
一、在含有氢氧化甲基汞的琼脂糖凝胶电泳 159
二、乙二醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳 160
三、甲醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳 161
第七章 分子杂交技术 163
第一节 DNA探针 164
一、标记物分类 164
二、标记方法分类 165
第二节 寡核苷酸探针的合成 165
一、用T4噬菌体多核苷酸激酶标记寡核苷酸探针 166
二、用大肠杆菌DNA聚合酶I Klenow片段标记合成的寡核苷酸 168
第三节 核酸分子杂交方法 170
一、固相杂交 171
二、液相杂交 176
三、原位杂交 178
四、荧光原位杂交 178
第八章 基因研究技术 180
第一节 克隆技术 180
一、基本原理和步骤 180
二、工具酶 181
三、载体 182
四、PCR技术 184
五、目的基因的获得 191
第二节 基因文库构建技术 192
一、基因组DNA文库构建 193
二、cDNA文库构建 197
第三节 RNA干扰技术 205
一、RNA干扰技术的原理及特点 205
二、RNA干扰分子靶位的选择 206
三、siRNA制备方法 206
四、RNA干扰技术在寄生虫学研究中的应用 208
第四节 DNA芯片技术 211
一、芯片制备 211
二、探针的准备 213
三、杂交 213
四、信号检测 213
五、结果分析 213
六、生物信息学分析 214
第九章 蛋白质组学技术 215
第一节 双向电泳技术 215
一、双向电泳原理 215
二、操作步骤 216
第二节 质谱技术 219
一、原理 219
二、操作步骤 220
第三节 蛋白质芯片技术 223
一、芯片的制作与质量控制 224
二、芯片的分类 224
第十章 抗体技术 226
第一节 单克隆抗体 226
一、单克隆抗体产生的原理 226
二、杂交瘤细胞系的建立 226
三、单克隆抗体的制备 228
四、在寄生虫中的应用 229
第二节 基因工程抗体 230
一、人源化的鼠单克隆抗体 230
二、小分子抗体 232
三、双特异性抗体 233
第三节 噬菌体抗体库技术 234
一、噬菌体抗体库技术 234
二、在寄生虫学中的应用 236
第四节 转人Ig基因小鼠的构建 237
一、人Ig-YACs的构建和筛选 237
二、小鼠胚胎干细胞的分离、培养 237
三、含人Ig-YACs酵母与鼠ESC的融合及克隆 238
四、人Ig-YACs-ESC导入鼠卵母细胞 238
五、含人Ig-YACs-ESC胚胎向小鼠体内送还和子代鼠的生成 240
第五节 抗体的表达 242
一、原核表达 242
二、真核表达 244
第六节 抗体的分离、纯化、保存 245
一、抗体的分离与纯化 245
二、抗体的保存 246
第七节 抗体的鉴定与分析 246
一、抗体效价的鉴定 246
二、抗体特异性鉴定 247
三、抗体纯度鉴定 248
四、抗体亲和力鉴定 248
第八节 抗体技术在寄生虫中的应用 249
一、消化道寄生虫 249
二、脉管系统寄生虫 250
三、肝与胆管寄生虫 251
四、呼吸系统寄生虫 251
五、皮肤与组织寄生虫 251