第一章 生物化学常用分析技术 1
第一节 生物大分子的基本制备技术 1
第二节 分光光度法 6
第三节 层析技术 15
第四节 电泳技术 24
第二章 蛋白质分子组成与理化性质分析 37
第一节 蛋白质的分子组成与结构 37
第二节 蛋白质的分离和纯化 38
第三节 蛋白质的定量 38
第四节 蛋白质相对分子量测定 41
第五节 实验项目 42
实验一 蛋白质的定量测定 42
实验二 血清蛋白质的层析分离 45
实验三 血清蛋白质的电泳分离 48
实验四 蛋白质理化性质分析 52
实验五 固定化蛋白质的免疫生化鉴定(Western Blot) 56
第三章 核酸的分子组成及理化性质分析 58
第一节 核酸的分子组成与结构 58
第二节 核酸的理化性质 59
第三节 核酸的制备和含量测定 60
第四节 实验项目 61
实验六 真核生物基因组DNA的制备(苯酚法) 61
实验七 人外周血白细胞DNA的制备 62
实验八 DNA与RNA含量测定 63
实验九 琼脂糖凝胶电泳分离DNA 63
第四章 酶作用及酶促反应动力学 65
第一节 酶的分子结构和功能 65
第二节 酶促反应动力学 65
第三节 酶活性测定 69
第四节 实验项目 70
实验十 淀粉酶的特异性及温度、pH对淀粉酶活性的影响 70
实验十一 碱性磷酸酶的提纯及比活性的测定 73
实验十二 碱性磷酸酶的Km测定 77
实验十三 磷酸盐对碱性磷酸酶的抑制作用 78
实验十四 温度和pH对碱性磷酸酶活性的影响 79
实验十五 乳酸脱氢酶同工酶分析 81
第五章 物质代谢及其激素调节 83
第一节 物质代谢定义 83
第二节 物质代谢的研究方法 83
第三节 实验项目 85
实验十六 血清葡萄糖的测定 85
实验十七 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响 87
实验十八 肝糖原的提取和鉴定 89
实验十九 生物氧化中酶的催化作用 90
实验二十 血浆高密度脂蛋白-胆固醇含量的测定 92
实验二十一 磷脂的提取及其薄板层析 94
实验二十二 酮体的生成与作用 95
实验二十三 血清丙氨酸转氨酶活性的测定(改良赖氏法) 97
实验二十四 纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用 99
第六章 分子生物学基本实验技术 102
第一节 基因工程基本技术 102
第二节 聚合酶链反应 108
第三节 核酸分子杂交 111
第四节 DNA测序技术 113
第五节 实验项目 115
实验二十五 动物组织总RNA的提取 115
实验二十六 聚合酶链反应(PCR)技术体外扩增DNA 116
实验二十七 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 117
实验二十八 质粒DNA的制备 118
实验二十九 限制性内切酶酶切 122
实验三十 目的DNA片段的分离和纯化 123
实验三十一 DNA片段与载体的连接 124
实验三十二 感受态细菌的制备(化学法) 126
实验三十三 质粒DNA的转化 127
实验三十四 重组质粒的筛选 128
实验三十五 Southern blot(印迹) 129
实验三十六 外源基因的原核表达 131
实验三十七 外源基因在真核生物中的表达 132
附录 134
附录一 常用缓冲溶液的配制 134
附录二 常用蛋白质相对分子质量及等电点 137
附录三 色谱法常用数据 139
附录四 离心转数和离心力的换算 141
附录五 实验数据和数据处理 142