第1章 杆状病毒诱导的细胞凋亡及RNAi技术 1
1.1 核多角体病毒 1
1.2 杆状病毒感染与宿主的关系 2
1.3 杆状病毒宿主专一性 3
1.4 细胞凋亡概念及其形态学特征 6
1.5 细胞凋亡与细胞坏死的区别 6
1.6 细胞凋亡的分子机制 7
1.7 杆状病毒感染引起的细胞凋亡研究 10
1.8 抗凋亡基因 11
1.8.1 p35基因 11
1.8.2 p49基因 13
1.8.3 iap基因 14
1.9 RNAi技术 20
1.9.1 RNAi的发现与发展 20
1.9.2 RNAi作用机制 20
1.9.3 RNAi机制中的主要成员 21
1.9.4 用RNAi方法研究特定基因功能的技术路线 22
第2章 Splt-iap4、Splt-p49的基因转录和翻译研究 25
2.1 材料与方法 25
2.1.1 材料 25
2.1.2 方法 29
2.2 结果与分析 32
2.2.1 Splt-iap4转录时相 32
2.2.2 Splt-p49转录时相 32
2.2.3 Splt-iap4表达时相 34
2.2.4 Splt-p49表达时相 34
2.3 讨论 35
2.4 小结 36
第3章 应用RNAi技术研究Splt-iap4和Splt-p49基因功能 37
3.1 材料与方法 37
3.1.1 材料 37
3.1.2 方法 40
3.2 结果 43
3.2.1 Splt-iap4和Splt-p49基因的PCR扩增结果 43
3.2.2 对照cat基因的PCR扩增结果 43
3.2.3 重组质粒p28i-p49和p28i-iap4的酶切鉴定 44
3.2.4 重组质粒p28i-cat的酶切鉴定 45
3.2.5 Splt-P49和Splt-IAP4凋亡功能检测 46
3.2.6 Splt-IAP4蛋白没有协同抗凋亡作用 47
3.2.7 Splt-IAP4对细胞有聚集作用 48
3.2.8 Splt-iap4 dsRNA处理对产生感染性病毒粒子的影响 50
3.2.9 RNAi对SpltNPV感染SpLi-221细胞的影响 51
3.3 讨论 53
3.4 小结 55
第4章 Splt-iap4和Splt-p49瞬时表达及抗细胞凋亡活性研究 56
4.1 材料与方法 56
4.1.1 材料 56
4.1.2 方法 57
4.2 结果与分析 58
4.2.1 瞬时表达载体的构建 58
4.2.2 瞬时表达蛋白检测 60
4.2.3 Splt-IAP4和Splt-P49抗凋亡活性检测 61
4.3 讨论 63
4.4 小结 63
第5章 杆状病毒与抗凋亡基因的进化关系研究 65
5.1 材料与方法 65
5.1.1 材料 65
5.1.2 方法 65
5.2 结果与分析 66
5.2.1 43株杆状病毒全基因组特征 66
5.2.2 43株杆状病毒全基因组中的抗凋亡基因 69
5.2.3 iap的序列比对和进化分析 73
5.3 讨论 78
5.4 小结 79
第6章 SpltNPV感染诱导Se301细胞凋亡的检测与分析 80
6.1 材料与方法 80
6.1.1 材料 80
6.1.2 方法 82
6.2 结果与分析 85
6.2.1 光学显微镜观察SpltNPV感染Se301细胞的形态学变化 85
6.2.2 电子显微镜观察SpltNPV感染Se301细胞的形态学变化 85
6.2.3 DAPI染色 87
6.2.4 台盼蓝（trypan blue）染色 88
6.2.5 DNA ladder 88
6.2.6 滴度测定 88
6.2.7 dot b10tting 90
6.2.8 RT-PCR 91
6.2.9 SDS-PAGE和western b10tting分析 93
6.3 讨论 94
6.4 小结 96
总结 97
参考文献 98
缩略词 114