第一章 流式细胞仪基本结构与工作原理 1
第一节 流式细胞术发展简史 1
第二节 流式细胞仪的基本结构 2
一、流式细胞仪分类 3
二、流式细胞仪的基本结构 4
第三节 流式细胞仪的工作原理 12
一、流式细胞仪的分析原理 12
二、流式细胞仪的分选原理 14
第四节 流式细胞仪的光信号检测 17
一、散射光信号检测 17
二、荧光信号检测 18
第五节FCM常用荧光染料 22
一、单克隆抗体标记的荧光染料 22
二、核酸荧光染料 23
第六节FCM的主要技术指标 26
一、荧光分辨率 26
二、荧光测量灵敏度 27
三、前向散射光检测灵敏度 27
四、FCM分析速度 27
五、FCM分选指标 27
六、其他软指标 28
第七节FCM仪器校正和维护与保养方法 28
一、FCM仪器校准 28
二、FCM仪器维护与保养方法 29
第二章 流式细胞术的数据采集与分析 31
第一节 流式细胞术的数据显示方法 31
一、单参数直方图 31
二、散点图 32
三、等高图 32
四、密度图 33
五、假三维图 33
六、三维图 34
七、多参数组合分析 34
第二节 流式细胞术数据采集与分析方法 35
一、CellQuest软件主界面 35
二、流式细胞术的数据采集方法 37
三、流式细胞术的数据分析方法 38
第三章 流式细胞术的样品制备方法 39
第一节 单细胞悬液的制备 39
一、新鲜实体组织单细胞悬液制备 39
二、石蜡包埋组织单细胞悬液制备 41
三、培养细胞的单细胞悬液制备 42
四、外周血单细胞悬液制备 42
五、骨髓有核细胞悬液的制备 43
六、活检、内镜取材标本单细胞悬液制备 43
七、脱落细胞的单细胞悬液制备 44
第二节 荧光抗体的选择与使用原则 44
一、根据信噪比选择抗体滴度，低表达抗原标记高信噪比荧光素 44
二、多色分析时组合抗体的使用原则 45
三、根据仪器型号和抗原表达强弱合理选择荧光抗体 45
第三节 样品的荧光素标记与影响因素 45
一、荧光抗体直接标记法 46
二、荧光抗体间接标记法 46
三、样品荧光素标记影响因素 46
第四节FCM检测样品对照的设置 47
一、阳性对照 47
二、阴性对照 47
三、补偿对照 48
第五节 样品的固定与保存 48
一、固定剂的作用 48
二、固定方法 48
第四章 流式细胞术的应用 50
第一节FCM在临床医学中应用 50
一、淋巴细胞亚群分析 50
二、血小板分析 50
三、网织红细胞分析 52
四、白血病和淋巴瘤免疫分型 53
五、HLA-B27表型分析 53
六、PNH诊断 54
七、人类同种异体器官移植中的应用 55
八、艾滋病的诊断与治疗 56
九、临床肿瘤学中的应用 56
十、临床微生物学中的应用 57
第二节FCM在基础研究中的应用 57
一、DNA分析 57
二、细胞凋亡分析 62
三、树突状细胞（DC）研究 66
四、造血干／祖细胞研究 67
五、细胞膜电位测定 69
六、胞内钙离子测定 70
七、细胞内pH测定 71
八、细胞内活性氧检测 71
九、蛋白质磷酸化检测 72
十、染色体分析 74
十一、精液质量检测 76
十二、flow-FISH法测定端粒长度 78
十三、肿瘤多药耐药性检测 78
十四、人类调节性T细胞检测 80
十五、细胞因子检测 81
第三节 流式细胞术在海洋生物中应用 83
一、FCM在海洋浮游植物研究中的应用 84
二、FCM在海洋细菌研究中的应用 85
三、FCM在海洋经济动物细胞核研究中的应用 85
第四节FCM分选技术应用与注意事项 86
一、分选应用 86
二、分选注意事项 86
第五节 定量流式细胞术与应用 87
一、校准微球 88
二、定量流式细胞分析方法 88
三、定量流式细胞术的应用 91
第六节 流式微球捕获芯片技术（CBA方法） 92
一、CBA工作原理 92
二、CBA特点 93
三、所需试剂与仪器 94
四、主要实验步骤 94
五、CBA Flex Set试剂组合 94
第五章 流式细胞术的优越性、发展趋势与展望 96
一、流式细胞术的优越性 96
二、流式细胞术的发展趋势 96
三、展望 97
第六章 流式细胞术常用实验方法和注意事项 98
第一节 流式细胞术常用试剂 98
一、4％多聚甲醛的配制 98
二、PBS配制 98
三、溶血剂的使用 98
四、破膜剂的使用 99
第二节 流式细胞术常用实验 99
实验一 外周血淋巴细胞亚群测定（CD系列） 99
一、原理 99
二、样本采集与处理 100
三、样本制备 100
四、结果分析 100
实验二 激活的淋巴细胞内细胞因子的检测 100
一、简介 100
二、检测方法 101
实验三 细胞凋亡检测 107
一、碘化丙啶单染法 108
二、Annexin V /PI双染色法 109
三、Caspase-3活性检测法 110
四、DNA断裂点标记 110
五、凋亡相关蛋白检测 113
实验四 细胞周期与DNA倍体分析 114
一、原理 114
二、试剂配制和实验步骤 114
三、结果判定 114
四、注意事项 114
实验五 液相中细胞因子的CBA方法检测 114
一、流式微球捕获芯片技术（Cytometric Beads Array， CBA） 114
二、CBA Flex set检测方法 116
实验六 细胞RNA含量测定 122
一、原理 122
二、试剂 122
三、染色步骤 122
四、检测分析 122
实验七 细胞总蛋白质含量测定 123
一、原理 123
二、样品制备 123
三、检测分析 123
实验八 网织红细胞分析 123
一、原理 123
二、样品制备 124
三、检测分析 124
实验九 外周血白细胞HLA-B27抗原分析 124
一、原理 124
二、样品制备 124
三、检测分析 125
实验十 血小板膜糖蛋白分析 125
一、原理 125
二、样品制备 125
三、检测分析 126
参考文献 127
附录1商品化流式细胞仪概述 131
一、美国BD公司生产流式细胞仪 131
二、美国Coulter公司生产流式细胞仪 134
附录2流式细胞术应用实例彩色图谱 137