第1章 蛋白质定量技术 1
1.1 生物样品的前处理 1
1.2 总蛋白含量的分析 3
1.3 特定蛋白组分含量的分析 12
1.4 蛋白质含量测定方法的发展 26
第2章 蛋白质分离纯化技术 29
2.1 蛋白质纯化方法和技巧 29
2.2 原材料的选择和预处理 32
2.3 组织细胞的破碎和碎片去除 32
2.4 粗分离 37
2.5 精细纯化 45
2.6 成品化 60
第3章 蛋白质的大肠杆菌表达 62
3.1 表达载体的选择 62
3.2 重组表达载体的构建 64
3.3 表达宿主菌的选择及转化 66
3.4 工程菌的诱导表达 67
3.5 目的蛋白的分析 73
3.6 目的蛋白的鉴定和定量 77
3.7 目的蛋白的纯化 78
第4章 蛋白质的定性方法 82
4.1 蛋白质分子量的测定 82
4.2 蛋白质等电点的测定 91
4.3 蛋白质纯度检测 92
4.4 蛋白质氨基酸组成分析 95
4.5 蛋白质的鉴定 99
第5章 蛋白质序列分析 114
5.1 蛋白质的N-末端序列分析法 114
5.2 蛋白质的末端序列分析法 128
5.3 蛋白质序列测定中新技术的应用 131
第6章 蛋白质化学修饰与突变的检测 135
6.1 蛋白质化学修饰的意义 135
6.2 影响蛋白质化学修饰的因素 137
6.3 典型功能基团的化学修饰及其进程的监测 139
6.4 蛋白质的定点突变及检测 150
6.5 蛋白质翻译后修饰分析 154
第7章 蛋白质构象分析方法 162
7.1 X-射线晶体衍射技术 163
7.2 二维和多维核磁共振技术 167
7.3 低温电子显微镜技术 169
7.4 光谱技术 170
7.5 其他方法 183
第8章 蛋白质生物活性检测和基因功能验证 188
8.1 蛋白质的定位 189
8.2 基因功能验证 193
8.3 生物性状或功能检测 198
第9章 蛋白质相互作用研究技术 205
9.1 酵母双杂交系统 206
9.2 噬菌体展示技术筛选相互作用的蛋白质 209
9.3 表面等离子共振技术 212
9.4 荧光能量转移技术 214
9.5 串联亲和纯化技术 215
9.6 蛋白质芯片技术 219
9.7 免疫共沉淀技术 220
9.8 融合蛋白沉降技术(pull-down)分析 224
第10章 蛋白质与核酸之间相互作用研究技术 229
10.1 凝胶阻滞试验 229
10.2 酵母单杂交技术 234
10.3 染色质免疫沉淀技术 238
10.4 足迹实验 242
第11章 蛋白质组学技术 253
11.1 蛋白质组样品制备及预分级技术 253
11.2 蛋白质组分离技术 263
11.3 蛋白质组研究中的蛋白质鉴定技术 274
11.4 定量蛋白质组学 283
11.5 定向蛋白质组学简介 288
第12章 蛋白质生物信息学分析 291
12.1 UniProtKB蛋白知识库 291
12.2 PROSITE数据库 297
12.3 酶数据库 299
12.4 SWISS-2DPAGE数据库 301
12.5 蛋白质数据库(PDB) 306
12.6 蛋白质分析工具 308