第一部分 动物细胞培养 2
动物细胞培养概述 2
一、动物细胞培养的基本概念及优缺点 2
二、动物细胞培养发展史 4
三、动物细胞培养的应用 6
四、动物细胞培养工作的基本要求和工作方法 8
【难点自测】 9
项目一 VERO细胞的传代培养 10
【项目介绍】 10
一、项目背景 10
二、学习目标 10
三、项目任务 10
【项目实施】 10
任务一 VERO细胞培养前的准备 10
必备知识 11
一、培养细胞的生长条件 11
二、动物细胞培养设备 14
三、动物细胞培养用品 18
四、动物细胞培养用液 25
五、动物细胞培养常用的消毒和无菌处理方法 31
操作规程 34
一、动物细胞培养常用设备的使用 34
二、动物细胞培养用品的清洗、包装和灭菌 36
三、动物细胞培养用液的配制和无菌处理 39
四、动物细胞培养的无菌操作 41
任务二 VERO细胞的传代和观察 43
必备知识 43
一、动物细胞传代培养技术 43
二、培养细胞的细胞生物学 45
三、培养细胞的观察和检测技术 52
操作规程 58
一、VERO细胞的传代培养 58
二、VERO细胞的常规观察 59
任务三 VERO细胞的冻存和复苏 60
必备知识 60
一、细胞的冻存 60
二、细胞的复苏 61
三、细胞活性检查 61
四、细胞计数 62
操作规程 63
一、VERO细胞的冻存 63
二、VERO细胞的复苏 64
三、VERO细胞的活性检查 65
【项目拓展知识】 66
一、动物细胞培养实验室的设计与布局 66
二、动物细胞培养的其他常用液 67
三、培养细胞的运输和短期保存 68
【项目难点自测】 69
项目二 鸡胚成纤维细胞的原代培养 71
【项目介绍】 71
一、项目背景 71
二、学习目标 71
三、项目任务 71
【项目实施】 71
任务一 组织块法培养鸡胚成纤维细胞 71
必备知识 71
一、培养细胞的取材 72
二、组织块培养法 73
操作规程 74
一、操作用品 74
二、操作步骤 75
任务二 消化法培养鸡胚成纤维细胞 76
必备知识 76
一、组织材料的分离 76
二、消化培养法 77
操作规程 78
一、操作用品 78
二、操作步骤 78
【项目拓展知识】 79
一、正常组织细胞的培养 79
二、肿瘤细胞培养 82
【项目难点自测】 85
项目三 CHO细胞的大规模培养 87
【项目介绍】 87
一、项目背景 87
二、学习目标 87
三、项目任务 87
【项目实施】 88
必备知识 88
一、动物细胞大规模培养技术概述 88
二、动物细胞大规模培养的方法 89
三、动物细胞培养反应器 96
四、动物细胞大规模培养技术的操作方式 100
操作规程 101
【项目拓展知识】 105
一、植物细胞大规模培养技术的概念 105
二、植物细胞大规模培养的应用和工业前景 105
三、植物细胞大规模培养流程 107
四、植物细胞的规模化培养体系的建立 107
五、植物细胞的大规模培养方法 109
六、植物细胞生物反应器 111
【项目难点自测】 113
项目四 抗人血白蛋白杂交瘤细胞系的制备 115
【项目介绍】 115
一、项目背景 115
二、学习目标 115
三、项目任务 115
【项目实施】 115
任务一 人血白蛋白免疫小鼠的准备 115
必备知识 115
一、单克隆抗体的概念 115
二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理 116
三、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要过程 116
四、动物免疫 116
操作规程 117
一、操作用品 117
二、操作步骤 117
任务二 骨髓瘤细胞和脾细胞的融合 118
必备知识 118
一、脾细胞、骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备 118
二、细胞融合和杂交瘤细胞的筛选 119
操作规程 121
一、操作用品 121
二、操作步骤 121
任务三 抗人血白蛋白杂交瘤细胞的筛选 124
必备知识 124
一、酶联免疫吸附法 124
二、双向扩散法 124
操作规程 125
任务四 抗人血白蛋白杂交瘤细胞的克隆培养 126
必备知识 126
一、有限稀释法 127
二、软琼脂平板法 127
三、显微镜操作法 127
四、荧光激活分离法 127
操作规程 128
【项目拓展知识】 128
一、杂交瘤技术的诞生 128
二、杂交瘤细胞株的冻存和复苏 129
三、单克隆抗体的大量制备与纯化 129
四、细胞的基因转染技术 130
【项目难点自测】 132
第二部分 植物细胞培养 136
植物细胞培养概述 136
一、植物组织培养 136
二、植物细胞培养 137
三、植物组织细胞培养的发展史 138
四、植物组织细胞培养的应用 140
【难点自测】 142
项目五 胡萝卜细胞的悬浮培养 144
【项目介绍】 144
一、项目背景 144
二、学习目标 144
三、项目任务 144
【项目实施】 145
任务一 MS培养基的制备 145
必备知识 145
一、植物细胞培养的实验室条件 145
二、植物细胞培养的培养基 150
操作规程 156
任务二 胡萝卜愈伤组织的诱导 159
必备知识 159
一、外植体的选择和预处理 159
二、植物愈伤组织培养的形成过程 161
三、植物愈伤组织培养的一般程序 162
四、植物组织细胞培养的无菌操作 163
操作规程 163
任务三 胡萝卜细胞的悬浮培养 164
必备知识 164
一、单细胞的分离 164
二、悬浮培养细胞的生长和测定 166
三、悬浮培养细胞的同步化 167
四、植物细胞培养的环境条件 167
操作规程 169
【项目拓展知识】 170
一、植物细胞的固定化培养 170
二、植物单细胞培养 172
【项目难点自测】 174
附录 细胞培养技术常用术语中英文对照 177
参考文献 182