第一篇 生物化学与分子生物学实验基本知识与理论 1
第一章 生物化学与分子生物学实验基本知识 1
一、实验室基本规则 1
二、实验室基本操作 2
三、实验样品的制备 6
四、实验误差与数据处理 8
五、实验记录与实验报告 13
第二章 生物化学实验基本技术理论 15
一、分光光度技术 15
二、层析技术 21
三、电泳技术 37
四、离心技术 44
第三章 分子生物学实验基本技术理论 49
一、重组DNA技术 49
二、核酸分子杂交技术 53
三、聚合酶链反应技术 59
四、蛋白质印迹技术 65
第四章 生物化学与分子生物学专业常用数据库及其应用 68
一、常用数据库 68
二、常用分析工具 76
三、真核基因启动子区生物信息学分析 87
四、microRNA靶标的预测 92
第二篇 生物化学与分子生物学实验操作 97
第五章 生物化学实验操作 97
实验1 蛋白质的两性反应与等电点测定 97
实验2 蛋白质的沉淀反应 99
实验3 蛋白质的热变性 101
实验4 双缩脲法测定蛋白质含量 103
实验5 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量 105
实验6 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 107
实验7 紫外吸收法测定蛋白质含量 109
实验8 BCA法测定蛋白质含量 111
实验9 凯氏定氮法测定蛋白质含量 112
实验10 乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 115
实验11 SDS-PAGE蛋白电泳 117
实验12 蛋白质双向电泳 121
实验13 单向上行纸层析分离氨基酸 123
实验14 转氨基作用与氨基酸的纸层析 125
实验15 凝胶柱层析分离蛋白质 127
实验16 动物肝脏DNA的分离提取、鉴定及含量测定 131
实验17 动物组织RNA的分离提取、鉴定及含量测定 133
实验18 温度对酶活性的影响 134
实验19 酸碱度对酶活性的影响 136
实验20 抑制剂和激活剂对酶活性的影响 137
实验21 尿淀粉酶活性的测定 139
实验22 酶反应速度与米氏常数测定 141
实验23 血糖（葡萄糖）的测定 145
实验24 血清甘油三酯的测定 147
实验25 血清胆固醇的测定 148
实验26 血清高密度脂蛋白胆固醇及其亚组分测定 153
实验27 血清尿素氮含量测定（改良二乙酰一肟法） 155
实验28 血液和尿中肌酐含量测定 156
第六章 分子生物学实验操作 159
实验29 质粒DNA的提取 159
实验30 质粒DNA的酶切及电泳 160
实验31 DNA片段的回收 162
实验32 DNA片段的连接 164
实验33 感受态细菌的制备 166
实验34 重组DNA的转化与筛选 167
实验35 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 170
实验36 常规PCR 171
实验37 逆转录-聚合酶链反应 173
实验38 实时定量PCR 176
实验39 DNA的分子杂交——Southern印迹 178
实验40 RNA的分子杂交——Northern印迹 182
实验41 蛋白质的免疫印迹——Western印迹 185
实验42 cDNA文库的构建 187
实验43 荧光素酶报告基因检测启动子活性 192
实验44 电泳迁移阻滞实验 195
实验45 染色质免疫沉淀实验 201
实验46 酵母双杂交实验 205
实验47 RNA干扰实验 210
实验48 蛋白质免疫共沉淀实验 216
实验49 RNA免疫共沉淀实验 218
实验50 GSTpull-down实验 220
附录 222
附录1化学试剂分级与注意事项 222
附录2常用缓冲液的配制 223
附录3硫酸铵饱和度计算表 229
附录4常用培养基及抗生素的配制 231
附录5离心机转速（rmin）与相对离心力（RCF）的换算 234