引言 1
第1章 材料与方法 3
1.1 免疫组织化学染色 3
1.2 免疫荧光双染 4
1.3 免疫印迹技术 6
1.4 荧光定量PCR技术 8
1.5 生存时间及肿瘤大小 9
1.6 细胞培养 10
1.7 细胞转染 11
1.8 质粒体的扩增与提取 13
1.9 稳定细胞系的建立 14
1.10 BrdU 15
1.11 立体定向种植脑肿瘤 16
1.12 RND3基因敲除小鼠的构建与饲养 17
1.13 基因芯片技术 18
1.14 双荧光素酶报告分析系统 18
1.15 逆转实验 20
1.16 免疫沉淀 23
1.17 定量ChIPs 25
1.18 MG132实验 27
1.19 laz staing 27
1.20 统计学方法 27
第2章 实验结果 29
2.1 RND3在GBM中的表达量及其与患者预后的关系 29
2.2 RND3在GBM细胞增殖中的作用 35
2.3 RND3调节GBM细胞增殖的机制 42
2.4 RND3调节Notch 1信号通路的分子机制 53
第3章 讨论 63
3.1 RND3在GBM组织中异常性低表达并在GBM发生发展中有重要作用 63
3.2 RND3可以抑制GBM细胞的增殖 65
3.3 RND3调控GBM细胞增殖的机制是调控Notch 1信号通路 66
第4章 综述：RND蛋白的作用和调节 70
4.1 结构和表达 71
4.2 RND蛋白在肌动蛋白细胞骨架中的作用 71
4.3 RND蛋白的靶点 72
4.4 RND蛋白靶蛋白的演变 73
4.5 RND蛋白的调控 73
4.6 RND3磷酸化 74
4.7 泛素／蛋白酶体途径降解 76
4.8 RND3蛋白在肿瘤中的表达与作用 76
4.9 结论和展望 77
参考文献 79