第一编 概述 3
第一章 生命大分子物质的制备 3
第一节 材料的选择与处理 3
一、材料选择 3
二、材料处理 4
第二节 测定方法的确立 5
一、目的与要求 5
二、常用的测定方法 5
第三节 细胞破碎 8
一、机械破碎 8
二、溶胀和自溶 9
三、化学处理 9
四、生物酶降解 9
第四节 抽提 10
一、抽提的含义 10
二、抽提有效成分的影响因子 10
第五节 浓缩 13
一、沉淀法 13
二、吸附法 13
三、超过滤法 13
四、透析法 14
五、减压蒸馏法 14
六、冰冻干燥法 14
第六节 纯化方案的设计与评价 14
一、纯化方案的设计 15
二、纯化方案的评价 16
第七节 有效成分纯度和性质的分析 17
第八节 应用实例 17
一、高纯度人转铁蛋白的制备 17
二、叶绿体的提取与4.5S RNA的制备 17
三、细菌质粒DNA的提取 17
思考题 18
参考文献 18
第二编 纯化方法 21
第二章 沉淀法 21
第一节 基本原理与沉淀类型 21
一、基本原理 21
二、制备蛋白质 21
三、制备核酸 30
第二节 应用实例 33
一、脾磷酸二酯酶的纯化 33
二、细菌染色体DNA的制备 33
三、蔗糖酶的初步纯化 34
思考题 34
参考文献 35
第三章 吸附层析 36
第一节 吸附柱层析 37
一、常用术语 37
二、基本原理 38
三、吸附剂 39
四、洗脱液 42
五、层析柱的制备与层析操作 42
六、应用与实例 44
第二节 薄层层析 46
一、操作及注意事项 47
二、应用实例 52
第三节 聚酰胺薄膜层析 53
一、基本原理 53
二、应用实例 54
思考题 57
参考文献 58
第四章 疏水层析 59
第一节 基本原理 59
一、疏水作用 59
二、吸附剂 60
第二节 操作与应用 60
一、层析柱的制备 60
二、加样与洗脱 61
三、应用实例 61
思考题 63
参考文献 63
第五章 离子交换层析 64
第一节 基本原理 64
第二节 离子交换剂的分类及性质 66
一、分类 66
二、性质 72
第三节 离子交换剂与缓冲液的选择 79
一、离子交换剂的选择 79
二、缓冲液的选择 80
三、加样量的确定 83
第四节 操作 83
一、离子交换剂的处理、再生和转型 83
二、分离物质的交换 84
三、物质的洗脱与收集 85
第五节 应用 87
一、制备、纯化生命物质 87
二、测定蛋白质的等电点 90
思考题 90
参考文献 91
第六章 凝胶过滤 92
第一节 凝胶的分类及性质 92
一、葡聚糖凝胶 93
二、琼脂糖凝胶 95
三、聚丙烯酰胺凝胶 96
四、Sephacryl 97
五、Superdex 98
第二节 基本原理 98
第三节 操作 101
一、凝胶的选择和处理 101
二、凝胶柱的制备 102
三、加样与洗脱 103
四、凝胶柱的再生及保存 107
第四节 应用 107
一、脱盐和浓缩 107
二、分离生命物质 108
三、去除热源物质 109
四、测定分子质量 109
五、其他 112
思考题 112
参考文献 112
第七章 亲和层析 113
第一节 基本原理 113
第二节 操作 115
一、载体的选择 115
二、配体的选择 116
三、亲和吸附剂的制备 117
四、特异性吸附 119
五、分离大分子物质 121
六、亲和层析柱的再生 122
第三节 提高吸附剂的操作容量 122
一、在配体和载体间引入“手臂” 122
二、增加配体取代的程度 124
三、配体与载体衍生物以最少的键连接 124
四、载体多孔性的影响 124
五、其他 125
第四节 应用实例 125
一、纯化大分子物质 125
二、研究酶的结构与功能 128
三、实例 129
思考题 132
参考文献 132
第八章 聚焦层析 133
第一节 基本原理 133
一、多缓冲剂和多缓冲交换剂 133
二、聚焦层析特性 134
第二节 操作 137
一、多缓冲剂的选择 137
二、多缓冲交换剂用量的确定 138
三、多缓冲交换剂的处理 138
四、样品的准备 138
五、加样和洗脱 138
六、样品中多缓冲剂的去除 139
第三节 应用 139
一、分离模型蛋白质 139
二、分离复杂物质 140
三、鉴定某些酶的性质 141
思考题 142
参考文献 142
第九章 高效液相色谱 143
第一节 基本原理 144
一、高效液相色谱仪 144
二、固定相 146
第二节 反相高效液相色谱 149
一、固定相、流动相和色谱柱 150
二、纯化糖基化白蛋白肽片段 152
第三节 应用 154
一、定性和定量分析 154
二、测定酶活性 155
三、测定蛋白质分子质量 155
四、分离核酸和蛋白质 156
思考题 161
参考文献 161
第十章 固定化的酶与微生物 162
第一节 制备方法 162
一、固定化酶 162
二、固定化微生物 166
第二节 制品的性质 166
一、酶的相对活性 166
二、活性曲线与最适pH 167
三、稳定性 168
四、米氏常数 169
五、其他 169
第三节 应用实例 170
一、工业方面 170
二、医学方面 171
三、生化分析方面 171
四、实例 173
思考题 175
参考文献 175
第三编 鉴定方法 179
第十一章 标记 179
第一节 核酸标记 179
一、标记物的制备及类型 179
二、非核素标记 180
三、核素标记 189
四、标记物纯化 190
五、探针的鉴定 191
第二节 蛋白质标记 193
一、非核素标记 194
二、核素标记 198
三、样品分析的注意要点 199
第三节 应用 200
一、cDNA组学和蛋白质组学 201
二、激酶的磷酸化和脱磷酸化 204
三、蛋白质半衰期的测定 206
思考题 207
参考文献 207
第十二章 重组DNA 208
第一节 重组DNA的部件 208
一、工具酶 208
二、载体 211
三、目的基因 213
第二节 重组 218
一、黏性末端连接法 218
二、平端连接法 220
三、平黏连接法 220
四、T-A连接法 221
五、同聚物加尾连接法 221
六、人工接头连接法 221
第三节 DNA扩增 223
一、重组DNA导入宿主细胞 223
二、重组子的筛选与鉴定 225
三、表达产物的纯化 228
第四节 应用实例 228
一、分离总RNA和mRNA 228
二、反转录合成第一链cDNA 228
三、PCR扩增及其产物纯化 229
四、PCR产物的克隆 229
五、重组质粒的提取及分析 229
思考题 230
参考文献 230
第十三章 DNA序列测定 231
第一节 双脱氧链终止法 231
一、基本原理 231
二、载体系统 232
三、测序试剂 236
四、测序操作 238
五、变性电泳 241
六、序列读取 242
第二节 PCR法 243
一、直接测序 243
二、循环测序 244
第三节 化学降解法 245
一、测序原理 245
二、具体操作 246
第四节 应用与进展 249
一、应用实例 249
二、测序进展 250
思考题 251
参考文献 251
第十四章 生物芯片 252
第一节 基因芯片 252
一、基本原理和工作流程 252
二、制备及操作 255
三、应用实例 260
第二节 蛋白质芯片 265
一、原理及特点 265
二、制备与操作 266
三、应用实例 268
第三节 芯片实验室 271
一、结构与制作 271
二、应用实例 274
思考题 280
参考文献 280
第十五章 聚合酶链反应 281
第一节 基本原理 281
一、反应系统 281
二、反应过程及条件 285
第二节 PCR的类型 288
一、普通PCR 288
二、原位PCR 288
三、反转录PCR 289
四、反向PCR 290
五、不对称PCR 290
六、巢式PCR 290
七、彩色PCR 291
第三节 应用 291
一、筛选目的基因 291
二、直接测序 292
三、标记DNA探针 292
四、寻找新基因 292
五、检测环境中的致病菌与指示菌 292
思考题 293
参考文献 293
第十六章 细胞凋亡的检测 294
第一节 基本原理与主要特性 294
一、基本原理 295
二、主要特性 304
第二节 检测凋亡的方法 306
一、形态学 306
二、DNA片段 308
三、酶活性与组蛋白 310
四、流式细胞仪 312
第三节 应用 314
一、抗肿瘤药物的研究和开发 314
二、疾病的诊断和治疗 314
思考题 316
参考文献 316
第十七章 生物传感器 317
第一节 基本原理 317
一、离子选择电极 318
二、生物活性材料 319
第二节 类型与制备 319
一、类型 319
二、制备 320
第三节 应用 321
一、工业方面 321
二、医学方面 321
三、环境监测方面 322
思考题 323
参考文献 323
第十八章 电泳 324
第一节 泳动度概论 325
第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 327
一、基本原理 327
二、不连续垂直柱状凝胶电泳 333
三、不连续垂直板凝胶电泳 343
四、连续的盘状凝胶和垂直板凝胶的电泳 344
五、线性和阶梯式梯度的柱状及板状凝胶电泳 346
六、双向电泳 347
第三节 琼脂糖凝胶和半干式聚丙烯酰胺凝胶的电泳 349
一、琼脂糖凝胶电泳 350
二、质粒DNA分子质量的测定 352
三、半干式聚丙烯酰胺凝胶电泳 353
第四节 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 354
一、SDs-聚丙烯酰胺凝胶电泳 354
二、尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳 356
三、SDS-尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳 357
第五节 聚丙烯酰胺凝胶电聚焦 358
一、基本原理 358
二、载体两性电解质的理化性质 359
三、载体两性电解质的pH范围与用量选择 360
四、测定蛋白质的等电点 360
第六节 毛细管电泳 364
一、基本原理与类型 364
二、电泳装置 367
三、应用实例 369
第七节 印迹法（转移电泳） 373
一、基本原理 373
二、操作及注意事项（以蛋白质为例） 374
三、应用 376
思考题 377
参考文献 377
第十九章 免疫分析 378
第一节 抗体的性质、制备及纯化 378
一、抗体的性质 378
二、多克隆抗体的制备 379
三、单克隆抗体的制备 384
四、抗体的检测 388
五、抗体的纯化 391
第二节 抗原抗体反应 393
一、凝集反应 393
二、免疫扩散 396
三、免疫电泳 398
四、固相免疫吸附（含ELISA） 402
五、免疫微球测定 409
思考题 414
参考文献 414
第二十章 气相色谱 415
第一节 基本原理 415
一、常用术语 415
二、塔板与速率理论 417
第二节 气相色谱仪的构造 420
一、载气流速的控制和测量 420
二、进样系统 421
三、恒温室 421
四、色谱柱 421
五、检定器 425
第三节 操作 426
一、操作要点 426
二、条件的选择 427
第四节 定性和定量检测 427
一、定性检测 427
二、定量检测 428
第五节 应用 431
一、分析蛋白质和氨基酸 431
二、分析核酸 432
三、分析糖类物质 432
四、分析脂肪酸 433
五、分析农药 433
思考题 433
参考文献 433
参考文献 434
附录 443
中英文缩写词 456