第一章 绪论 1
一、分子生物学技术在中医药研究中的实例 1
二、分子生物学技术在中医药研究中的现状 6
三、中医药研究经常使用的分子生物学技术及本书的安排 11
四、加强分子生物学技术在中医药研发中的应用,是新时期中医药继承与发展的迫切需要 17
第二章 分子生物学常用基本技术 21
第一节 重组质粒 21
第二节 质粒转化大肠杆菌 23
第三节 阳性单菌落扩增与小量DNA制备 27
第四节 酶切重组质粒,电泳分离所插入的DNA 30
第五节 从凝胶中回收DNA 32
附:琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒及其方法 34
第六节 大量质粒DNA制备 35
第七节 哺乳类动物细胞的培养 37
附:细胞库简介 43
第八节 植物细胞悬浮培养 43
第九节 气相色谱-质谱联用 47
第十节 流式细胞仪分析 49
第三章 DNA的研究方法 58
第一节 哺乳类动物基因组DNA的提取 58
第二节 植物基因组DNA的提取 62
第三节 基因组文库的建立与筛选 65
第四节 DNA印迹杂交 76
第五节 聚合酶链式反应 80
附:多重PCR 84
第六节 DNA双脱氧链终止法测序 86
第七节 动、植物药材的ISSR指纹图谱 95
第八节 中药RAPD指纹图谱 100
第四章 RNA的研究方法 104
第一节 总RNA提取 105
第二节 mRNA的分离 107
第三节 RNA印迹杂交 110
第四节 反转录聚合酶链式反应 115
第五节 荧光实时定量PCR 118
第六节 原位杂交 123
第七节 基因芯片 127
第八节 cDNA矩阵 137
第九节 差异展示PCR 141
第十节 cDNA库建立 145
第十一节 基因全序列cDNA库筛选 154
第十二节 迅速扩增cDNA末端的PCR技术 159
第五章 蛋白质的研究方法 164
第一节 哺乳类动物组织蛋白质的提取 164
第二节 植物组织蛋白质的提取 167
第三节 蛋白质印迹杂交 169
第四节 酶联免疫吸附试验 181
第五节 免疫组织化学 185
第六节 单克隆抗体制备技术 191
第七节 蛋白质双向电泳 199
第六章 基因功能与表达调控的研究方法 215
第一节 RNA干扰 216
第二节 smallRNA的提取与分析 226
第三节 报道基因与基因调控元件的检测 231
第四节 点突变PCR 236
第五节 基因敲除 241
第六节 DNA酶I足迹法 246
第七节 凝胶阻滞分析 252
第八节 植物细胞的基因转化 259
第七章 分子生物学常用网络资源及利用 268
第一节 美国国家生物技术信息中心(NCBI) 268
第二节 GenBank数据库查询与搜索 274
第三节 基础局部比对搜索工具(BLAST) 280
第四节 EST的电子延伸 289
第五节 cDNA序列的蛋白阅读框架分析(ORF)、染色体定位,及其在机体各组织中的表达预测 294
第六节 PCR引物或序列寡核苷酸探针的在线设计 300
第七节 蛋白质分析 302
附录 306
一、分子生物学实验常用仪器设备 306
二、常用生物学数据 307
三、常用载体 310
四、分子克隆常用酶 311
五、常用储存液的配制 315
六、常用液体培养基 316
七、常用缓冲液 317
八、常用酸碱溶液的浓度与分子量 317
九、不同浓度酸碱液的pH值 317
十、核酸的纯化(用酚/氯仿抽提) 318
十一、核酸浓缩 318
十二、分光光度法测定DNA及RNA含量 319
十三、Sephadex的水化 319
十四、放射性度量单位和数据 319
十五、科学单位 319
十六、离心速度和离心力换算 320
十七、分子生物学名词术语英汉对照 320