第一章 生物化学实验的基本要求 1
第一节 实验的准确性 1
一、系统误差 1
二、偶然误差 2
三、过失错误 2
第二节 实验记录及报告 2
一、实验记录 3
二、实验报告 3
第三节 实验样品的制备 4
一、动物的脏器 4
二、微生物 4
三、细胞 5
第二章 常见的实验方法及基本原理 6
第一节 透析 6
第二节 沉淀 7
一、蛋白质的特性 7
二、常用的蛋白质沉淀方法 8
第三节 层析 11
一、层析原理 11
二、几种常见的层析法 11
第四节 电泳 20
一、电泳法的基本原理 20
二、几种常用电泳法简介 22
第五节 分光光度法 25
一、基本原理 25
二、比色法 26
三、分光光度法 27
四、浊度法 28
第六节 离心 28
第七节 常用的蛋白质现代分析法 30
一、荧光分光光度法 30
二、旋光色散与圆二色性法 36
三、核磁共振波谱法 40
第三章 普通实验 48
实验一 实验的基本操作及要求 48
实验二 糖的颜色反应 52
实验三 3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定还原糖 54
实验四 淀粉酶对壳聚糖降解过程的测定 57
实验五 血清胆固醇测定(磷硫铁法) 59
实验六 植物叶片在衰老过程中过氧化脂质含量的变化 60
实验七 铜离子氧化法测定维生素C含量(紫外法) 62
实验八 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 63
实验九 DNS-Cl法测定蛋白质N-末端的氨基酸 65
实验十 离子交换柱层析法分离氨基酸 67
实验十一 蛋白质性质(一)——蛋白质及氨基酸的呈色反应 69
实验十二 蛋白质性质(二)——蛋白质的等电点测定和沉淀反应 75
实验十三 蛋白质的制备——牛奶中提取酪蛋白 80
实验十四 Folin-酚法测定血清白蛋白含量 81
实验十五 Bradford法测定蛋白质含量 83
实验十六 紫外分光光度法测定蛋白质的含量 84
实验十七 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 85
实验十八 猪脾脏DNA提取与二苯胺定量法 88
实验十九 酵母RNA提取与地衣酚显色测定法 91
实验二十 菜花(花椰菜)中核酸的分离与鉴定 93
实验二十一 酶的特性 96
实验二十二 多酚氧化酶的制备和化学性质及影响多酚氧化酶作用的各种因素 100
实验二十三 枯草杆菌蛋白酶的活力测定 104
实验二十四 根据底物浓度和酶反应速率之间的关系求米氏常数Km 107
实验二十五 DNA京脂糖凝胶电泳 110
实验二十六 质粒DNA的小量制备 112
第四章 综合实验 115
实验一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白印迹 115
实验二 PCR扩增目标基因片段 120
实验三 DNA的酶切及连接技术 122
实验四 重组DNA质粒的转化技术 125
实验五 枯草杆菌碱性磷酸酶的制备及酶活力的测定 127
实验六 鸡卵类黏蛋白的制备及活力的测定 130
实验七 同步荧光法测定蛋白质含量 135
附录 138
学生实验室守则 138
一、常用仪器的使用 139
二、缓冲溶液 147
三、常用的硫酸铵饱和度计算表 150
四、层析法常用数据及性质表 152
五、分子生物学及基因工程常用数据 156
六、一些常用单位 164
七、常用洗液的配制方法 165
八、元素的原子量表 166
参考文献 167