第一章 概述 1
第一节 医学分子生物学的发展简介 1
第二节 基因诊断技术的发展简介 2
第三节 感染性疾病相关基因研究进展 5
一、病原微生物的致病基因 5
二、细菌性病原微生物的耐药基因 6
三、机体易感基因 7
四、利用抗原基因制备重组蛋白疫苗和合成基因疫苗 8
第四节 遗传性疾病的基因诊断进展 8
第五节 基因诊断所面临的问题及其发展前景 10
一、基因诊断受到医学整体理论水平发展的限制 10
二、基因诊断技术的应用存在条件限制 10
三、基因诊断技术的应用存在社会限制 11
四、基因诊断技术的应用前景广阔 11
第二章 核酸分子杂交技术 12
第一节 核酸分子杂交的基本原理 12
一、DNA变性与复性 13
二、杂交体系的建立 16
三、影响杂交的因素 17
第二节 核酸探针 19
一、核酸探针的种类 19
二、核酸探针的标记物分类 20
三、核酸探针的标记方法 21
四、核酸探针的纯化 24
第三节 核酸分子杂交的基本方法 25
一、Southern印迹杂交 25
二、Northern印迹杂交 31
三、Western印迹杂交 32
四、斑点及狭缝印迹杂交 32
五、原位杂交 33
六、液相杂交 35
第三章 聚合酶链反应 37
第一节 PCR的原理 37
一、PCR原理简介 37
二、PCR的七种基本成分 39
三、PCR引物设计 42
四、模板的制备 43
第二节 PCR的基本反应过程 44
一、以DNA为模板的反应 44
二、以mRNA为模板的反应 44
三、PCR产物的积累规律 44
四、PCR反应的自动化 45
五、PCR反应条件的控制 46
第三节 防止PCR污染的措施 50
一、实验室的空间设置 50
二、操作和进行PCR的规则 51
三、溶液和设备的去污染 51
四、PCR实验中应注意的事项 52
第四节 PCR技术的主要类型 53
一、反转录PCR 53
二、巢式PCR 53
三、共享引物PCR 54
四、多重PCR 54
五、不对称PCR 55
六、锚定PCR 55
七、反向PCR 56
八、彩色PCR 56
九、原位PCR 56
十、差异显示PCR 57
十一、重组PCR 58
第五节 定量PCR 58
一、内参照定量PCR 60
二、竞争PCR作mRNA定量 60
三、酶标记定量PCR 62
四、荧光素标记的定量检测 63
五、定量PCR技术的应用 69
第六节 PCR技术的主要用途 71
一、目的基因的克隆 71
二、基因的体外突变 71
三、DNA和RNA的微量分析 71
四、DNA序列测定 71
五、基因突变分析 71
第七节 连接酶链反应 72
一、LCR的基本原理 72
二、LCR产物的检测 73
三、影响LCR的重要因素 74
四、LCR技术的扩展 74
第八节 RNA的体外扩增 75
一、基本原理 75
二、产物的检测 76
三、RNA-PCR技术的特点和应用 76
第九节 基因扫描技术 77
一、基因扫描技术的基本原理 77
二、基因扫描技术的应用 78
第十节 滚环放大技术 80
一、RCA技术的基本原理 81
二、RCA在基因检测及核酸研究方面的应用 82
三、免疫RCA技术的发展和实验室应用 84
四、RCA技术的应用前景和可能遇到的技术难题 85
第四章 基因芯片技术 87
第一节 基因芯片技术的基本原理 87
第二节 基因芯片的种类 88
一、根据支持介质划分 88
二、根据制备方法划分 88
三、按载体上所点探针的长度划分 89
第三节 样品的准备及杂交检测 89
一、基因芯片的制备 89
二、样品的获得与标记 90
三、杂交反应 90
四、信号检测 91
第四节 基因芯片的应用 91
一、DNA测序 91
二、基因差异表达的研究 91
三、寻找新基因 92
四、基因组文库作图 92
五、突变体和多态性的检测 92
六、用于疾病机制的研究、疾病的分类和诊断、疾病的预测和治疗 92
第五节 基因芯片技术的研究方向及当前面临的困难 95
第六节 基因芯片的产业化现状及我国的研究现状 96
第七节 基因芯片的应用前景 97
第五章 目的基因的获得 99
第一节 从原核生物获取目的基因 99
一、大肠杆菌的基因图 100
二、用转导噬菌体分离宿主菌的基因 100
第二节 从真核生物获取目的基因的常用方法 101
一、化学合成法 102
二、聚合酶链反应（PCR） 102
三、基因组DNA文库 103
四、cDNA文库 105
第三节 目的基因序列测定 110
一、目的基因序列测定的意义 110
二、目的基因测序方法 110
三、长链DNA测序的策略 113
第六章 病毒性感染性疾病的基因诊断第一节 人乳头瘤病毒 117
一、人乳头瘤病毒基因组结构 118
二、人乳头瘤病毒的基因诊断 118
第二节 单纯疱疹病毒 119
一、单纯疱疹病毒基因组结构 119
二、单纯疱疹病毒的基因诊断 120
第三节 巨细胞病毒 121
一、巨细胞病毒基因组结构 121
二、巨细胞病毒基因诊断 122
第四节 轮状病毒 123
一、轮状病毒基因组 123
二、轮状病毒基因诊断 123
第七章 细菌及其他病原微生物的基因诊断第一节 细菌毒力基因体内表达检测技术 125
一、体内表达技术（IVET） 125
二、信号标签突变技术（STM） 125
三、差异荧光诱导（DFI） 126
四、体外转座进行基因组分析和作图（GAMBIT） 126
五、体内诱导抗原技术（IVIAT） 127
第二节 支原体感染的基因诊断 127
一、普通PCR技术 128
二、PCR-ELISA 129
三、多重PCR 129
第三节 衣原体感染的基因诊断 130
一、核酸扩增检测 130
二、连接酶链反应（Ligase chain reaction,LCR） 131
三、链置换扩增（Strand displacement amplification,SDA） 131
四、转录介导的扩增（Transcription mediated amplification,TMA） 132
第八章 肿瘤疾病的基因诊断第一节 肿瘤的发生与基因 133
一、癌基因 134
二、抑癌基因 137
三、微卫星DNA不稳定性 141
四、肿瘤的发生与多重基因变化 141
第二节 基因诊断在肿瘤研究中的意义和应用 142
一、肿瘤易感基因的检测 143
二、肿瘤的早期诊断和筛检 143
三、肿瘤的分类 144
四、肿瘤的治疗 144
五、肿瘤的预后判断 144
六、肿瘤的预后监测 145
第三节 肿瘤的基因诊断方法 145
一、肿瘤基因诊断的策略 145
二、基因诊断的原理和方法 146
三、肿瘤基因诊断的具体方法 148
第四节 临床常见肿瘤疾病相关基因的检测 156
一、ras癌基因的检测 156
二、抑癌基因p53的检测 158
三、微卫星DNA不稳定性的检测 159
四、其他肿瘤相关基因的检测 159
第九章 消化系统疾病与基因诊断第一节 消化系统肿瘤性疾病与基因异常 162
一、概述 162
二、肿瘤性疾病的基因诊断与基因治疗 165
第二节 消化系统感染性疾病与基因异常 169
一、病毒性肝炎 169
二、幽门螺旋杆菌感染 174
第三节 消化系统遗传性疾病与基因异常 182
一、消化系统遗传性疾病的基因诊断 182
二、消化系统遗传性疾病的基因治疗 182
第十章 心血管疾病的基因诊断第一节 心血管分子生物学的新技术 183
一、DNA微阵列 183
二、基因表达序列分析 185
三、代表性差异分析 186
四、基因转移技术 186
五、基因打靶技术 188
六、反义核酸技术 189
七、候选基因关联研究 190
八、定位候选克隆 191
九、单倍型 193
十、蛋白质组学研究 193
第二节 心血管疾病的基因表达谱 195
一、心血管病基因表达谱的研究方法 195
二、人类心血管病的基因表达谱 196
三、心血管基因组的生物信息学资源 201
第三节 心血管疾病基因单核苷酸多态性的诊断 202
一、β2-肾上腺素能受体基因的SNPs 204
二、甾醇调节元件结合蛋白基因的SNPs 205
三、心血管疾病中SNPs的应用 205
第四节 基因芯片技术对心血管疾病的诊断 207
一、cDNA芯片的应用 207
二、寡核苷酸芯片的应用 209
第五节 载脂蛋白基因异常表达与心血管疾病 210
一、脂蛋白脂肪酶的基因变异与Ⅲ型高脂蛋白血症 210
二、载脂蛋白基因的异常表达与动脉粥样硬化 212
第六节 载脂蛋白表型及基因型的检测 218
一、载脂蛋白（a）表型 219
二、载脂蛋白E表型 221
三、载脂蛋白B基因多态性的检测 222
四、载脂蛋白CⅢ基因型检测 225
第十一章 呼吸系统疾病与基因第一节 肺癌与基因异常 226
一、概述 226
二、肺癌的基因异常 228
第二节 慢性阻塞性肺疾病与基因异常 231
一、概述 231
二、慢性阻塞性肺疾病与基因异常 234
第三节 支气管哮喘与基因异常 235
一、概述 235
二、支气管哮喘与基因异常 237
第四节 特发性肺纤维化与基因异常 238
一、概述 238
二、肺纤维化症与基因异常 240
第五节 囊性纤维化与基因异常 243
一、概述 243
二、囊性纤维化与基因异常 243
第六节 肺部感染性疾病的基因诊断 244
一、肺结核病 244
二、支原体肺炎 246
三、人巨细胞病毒肺炎 247
第七节 呼吸系统疾病与基因治疗 249
一、囊性纤维化和A1AT缺乏症 249
二、恶性肿瘤 249
三、其他呼吸系统疾病 251
四、基因治疗载体的开发状况 251
第八节 呼吸系统疾病与基因芯片 253
第十二章 产前诊断及遗传病检测第一节 含有胎儿遗传信息的细胞（成分）及其种类 258
一、羊水脱落细胞 259
二、滋养细胞 259
三、淋巴细胞 259
四、有核红细胞 259
五、母体血浆中游离DNA 260
第二节 产前诊断的技术 260
一、羊膜腔穿刺 260
二、绒毛活检 261
三、胎儿脐带血穿刺 262
四、母血胎儿细胞诊断 262
第三节 基因诊断技术 263
一、荧光原位杂交技术 263
二、聚合酶链反应技术 264
三、引物原位标记技术 266
四、光谱核型分析技术 267
第四节 产前诊断的内容 268
一、染色体病 268
二、单基因遗传病 276
三、宫内感染疾病 279
四、多基因遗传病及线粒体遗传病 287
主要参考文献 288