第一章 绪论——免疫学技术应用策略 1
一、抗体的应用 1
二、抗原-抗体反应技术的应用 2
三、免疫细胞分离及功能测定技术的应用 3
四、分子免疫学技术 5
第二章 抗体的制备及鉴定 6
第一节 单克隆抗体的制备及鉴定 6
一、杂交瘤技术和单克隆抗体的基本概念 6
二、制备单克隆抗体前的准备工作 7
三、细胞融合 13
四、细胞融合后的选择性培养 15
五、单克隆抗体的筛选与检测 16
六、杂交瘤细胞克隆化 17
七、杂交瘤细胞及单克隆抗体鉴定的几种方法 18
八、杂交瘤细胞的冻存与复苏 24
九、单克隆抗体的大量制备 26
十、单克隆抗体的纯化 27
第二节 多克隆抗体的制备及鉴定 30
一、抗原 30
二、动物 30
三、佐剂 30
四、免疫方案 30
五、抗体的鉴定 31
六、抗体纯化 31
七、血清的冻存 32
八、多克隆抗体制备方法举例 32
第三章 非放射性免疫标记技术 34
第一节 酶免疫测定 34
一、实验原理 34
二、试剂与材料 35
三、实验流程 36
四、问题及其解决策略 37
第二节 免疫荧光 38
一、实验原理 38
二、主要技术条件 38
三、实验流程 39
四、应用举例——间接法检测抗核抗体 40
第三节 免疫胶体金 41
一、实验原理 41
二、胶体金标记技术在免疫学中的应用 42
三、应用举例——胶体金技术用于妊娠检测 43
第四章 放射免疫标记技术 45
第一节 放射性同位素标记抗原 45
一、常用标记方法 45
二、放射性标记物的分离纯化 48
第二节 放射免疫分析技术 48
一、实验原理 48
二、主要技术条件 49
第三节 免疫放射分析 50
第四节 免疫细胞受体放射分析 51
第五节 应用举例 53
一、人卵泡休止素放射免疫分析 53
二、人卵泡休止素免疫放射分析 54
三、问题及其解决策略 55
第五章 免疫细胞化学技术 56
第一节 免疫细胞化学技术 56
一、免疫细胞化学技术的基本环节 56
二、抗体的选择 59
三、免疫细胞化学技术的主要影响因素 62
四、操作步骤和常见问题 62
第二节 免疫细胞化学的衍生技术 69
一、双标记染色法 69
二、免疫细胞化学技术与放射自显影技术的联合使用 70
三、细胞表面蛋白的染色 70
四、应用免疫细胞化学技术进行细胞分选 70
五、应用免疫细胞化学技术进行定量检测 71
六、生物素-链霉亲和素在免疫细胞化学技术的应用 71
第三节 应用举例 72
一、巨噬细胞抗卵泡抑素抗体染色——ABC法 72
二、免疫酶染色技术-APAAP法 72
第六章 蛋白质抗原T细胞表位的鉴定 75
第一节 CTL表位的鉴定 75
一、抗原特异性CTL细胞克隆的建立 75
二、抗原多肽片段的获得 76
三、多肽亲和力测定 77
四、CTLs的体外诱导 78
五、CTL活性检测 79
第二节 Th细胞表位的鉴定 81
一、抗原特异性CD4+T细胞克隆的建立 81
二、抗原多肽片段的获得 81
三、肽结合试验 82
四、肽特异性CD4+T细胞的诱导 83
五、细胞增殖试验 83
六、MHC限制性确定 83
七、细胞因子分析 83
第三节 MHC分型 84
一、血清学方法 84
二、PCR-SSP 85
第四节 应用举例 85
第七章 免疫印迹 90
第一节 蛋白质抗原电泳分离 90
一、样本处理 90
二、凝胶选择 91
三、蛋白标准品选择 92
四、SDS-PAGE基本流程 93
第二节 蛋白质的转膜 93
一、半干式电转印 94
二、湿式电转印 95
三、点印迹 97
第三节 免疫检测 97
一、抗体的选择 97
二、封闭 97
三、抗体杂交 98
四、检测 98
第四节 蛋白印迹在免疫学中的应用 100
第五节 应用举例 100
Follistatin表达的Western blot鉴定 100
第六节 DNA/RNA印迹的免疫学检测技术 101
一、DNA印迹 101
二、RNA印迹 103
三、Southern和Northern Blot在免疫学中的应用 104
第八章 免疫沉淀及沉降技术 106
第一节 免疫沉淀 106
一、细胞裂解 107
二、沉淀抗原抗体复合物 108
三、实验方法 108
四、免疫沉淀的应用举例 110
第二节 免疫共沉淀 111
第三节 沉降技术（pull-down） 113
第九章 免疫细胞分离 115
第一节 单个核细胞的分离 115
一、材料和仪器 116
二、实验流程 116
三、问题与解决策略 116
第二节 单核-巨噬细胞的分离 117
一、材料和仪器 118
二、实验流程 118
第三节 T、B淋巴细胞选择性分离和纯化 118
一、尼龙棉柱法富集T淋巴细胞 119
二、补体介导细胞毒剔除B细胞及辅佐细胞富集T细胞 120
三、通过补体细胞毒作用剔除小鼠T淋巴细胞或其亚群 121
第四节 NK细胞的分离纯化 121
一、材料和仪器 121
二、实验流程 121
三、问题及解决策略 122
第五节 中性粒细胞分离 122
一、材料和仪器 122
二、实验流程 122
第六节 树突状细胞的诱导培养和分离 123
一、小鼠骨髓来源的DC 123
二、人外周血单核细胞来源的DC 125
三、人CD34+干细胞来源的DC 125
第七节 免疫磁珠分选免疫细胞及其亚群 126
一、材料和仪器 126
二、实验流程 126
三、问题及解决策略 127
第十章 流式细胞术 128
第一节 流式细胞术的原理 128
第二节 细胞表面分子分析 131
第三节 可溶性分子的检测 133
第四节 T淋巴细胞行为和功能分析 134
第五节 细胞分选原理及其应用 137
一、小鼠T淋巴细胞活化实验 138
二、CFDA-SE标记检测小鼠淋巴细胞增殖实验 139
三、小鼠胸腺细胞凋亡的检测 141
四、细胞内细胞因子染色技术分析人外周血淋巴细胞分化水平 142
第十一章 免疫细胞增殖试验 144
第一节 细胞培养与冻存 144
一、细胞传代培养 144
二、冻存与复苏 145
第二节 细胞增殖检测方法 146
一、台盼蓝拒染法 146
二、BrdU检测法 147
三、3H-TdR掺入法 148
四、MTT比色法 149
第三节 T、B淋巴细胞增殖试验 149
一、T淋巴细胞增殖试验 150
二、B淋巴细胞增殖试验 150
第四节 免疫相关细胞的增殖试验 150
一、细胞因子依赖的细胞株增殖 150
二、混合淋巴细胞培养 151
三、细胞因子依赖的其他免疫细胞增殖 151
第五节 应用举例 153
一、植物血凝素诱导T淋巴细胞增殖 153
二、混合淋巴细胞培养 154
第十二章 细胞毒实验技术 156
第一节 NK细胞活性测定 156
一、效应细胞的制备 156
二、靶细胞的制备 156
三、效-靶细胞作用及检测方法 157
第二节 细胞毒性T细胞功能测定 160
一、效应细胞-特异性CTL的诱导和制备 160
二、靶细胞的制备 162
三、特异性抗原诱导的细胞毒性T细胞功能测定 162
第三节 应用举例 166
一、LDH法检测人外周血NK细胞杀伤活性 166
二、51Cr释放法检测人抗原特异性细胞毒性T细胞功能 166
第十三章 免疫细胞吞噬功能测定 168
第一节 单核／巨噬细胞系吞噬功能测定 168
一、体内法与体外法 168
二、巨噬细胞的制备 169
三、吞噬微粒的选择 170
四、吞噬效率的测定 170
第二节 中性粒细胞吞噬功能测定 172
第三节 应用举例 173
一、巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验 173
二、中性粒细胞吞噬功能的检测 174
第十四章 免疫细胞凋亡 176
第一节 细胞凋亡的形态学研究方法 177
一、光学显微镜观察 177
二、荧光显微镜观察 179
三、电子显微镜观察 181
第二节 细胞凋亡的生物化学研究方法 183
一、凋亡细胞的DNA Ladder 183
二、末端标记法 185
三、免疫印迹检测凋亡细胞的caspase活化 187
四、免疫印迹检测凋亡细胞线粒体细胞色素C的释放 189
第三节 流式细胞术检测细胞凋亡的常用方法 191
一、亚二倍体分析法 192
二、Annexin V/PI双染法 193
三、线粒体膜电位检测 195
四、TUNEL法 197
第十五章 细胞因子检测 201
第一节 细胞因子及其受体检测方法概述 201
一、生物学活性检测法 201
二、免疫学检测法 202
三、分子生物学检测法 202
第二节 常见的细胞因子生物学活性检测 204
一、IL-1生物学活性检测 204
二、IL-2生物学活性检测 205
三、IL-10生物学活性检测 206
四、干扰素的生物学活性检测 207
五、肿瘤坏死因子的生物学活性检测 208
第三节 细胞内细胞因子检测法 209
第四节 ELISPOT技术 212
第十六章 经典免疫学实验 216
第一节 凝集反应 216
一、直接凝集反应 216
二、间接凝集试验 217
三、应用举例 221
第二节 沉淀反应 221
一、液体内沉淀反应 222
二、凝胶内沉淀试验 224
三、应用举例 226
第三节 补体的测定 226
一、补体总活性测定（CH50） 227
二、脂质体均相免疫溶破试验 229
三、补体旁路途径溶血活性的测定（ACH50） 230
四、单个补体成分的测定 230
五、应用举例 231
第四节 循环免疫复合物的测定 232
一、抗原特异性检测方法 232
二、抗原非特异性检测方法 232
三、应用举例 235
第五节 B细胞溶血空斑试验 236
一、琼脂溶血空斑法 236
二、液相单层溶血空斑法 237
三、应用举例 237
附录 239
一、常用缓冲液、试剂的配制 239
二、酶免疫检测常用试剂配制 244
三、细胞相关试剂配制 245
四、染色液配制 249
五、固定剂 250
六、蛋白电泳相关试剂和缓冲液的配制 251
七、淋巴细胞分离液 253
八、常见有丝分裂原的配制 254
九、其他试剂 254