绪论 1
上篇 热带植物基因工程原理第1章 基因工程载体和工具酶 15
1.1 基因工程载体 15
1.2 植物基因工程载体 32
1.3 人工染色体载体 42
1.4 工具酶 45
第2章 目的基因的分离与克隆 57
2.1 目的基因 57
2.2 目的基因的分离与克隆 57
第3章 基因重组和基因工程 101
3.1 自然界的基因转移和重组 101
3.2 基因概念的认知 107
3.3 基因组学 108
3.4 基因重组 111
第4章 目的基因的转化 128
4.1 重组DNA分子转入原核生物细胞 128
4.2 重组DNA分子转入植物细胞 131
第5章 重组体的筛选与鉴定 153
5.1 遗传标记表型特征筛选法 153
5.2 重组子结构特征筛选法 156
5.3 核酸分子杂交检测法 167
5.4 目的基因定位检测法 176
5.5 转基因植物的检测与鉴定 179
第6章 外源基因的表达与调控 192
6.1 基因的表达与调控概述 192
6.2 外源基因的瞬时表达和稳定表达 200
6.3 原核生物的基因表达与调控 201
6.4 真核生物的基因表达与调控 206
第7章 植物基因工程研究进展 218
7.1 转基因植物发展现状 218
7.2 转基因植物的应用 225
7.3 转基因植物的安全性评价 230
下篇 热带植物基因工程操作技术第8章 目的基因克隆与功能分析 239
8.1 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术 239
8.2 RT-PCR技术 240
8.3 mRNA差别显示法 242
8.4 抑制消减杂交法 248
8.5 cDNA微列阵分析技术 255
8.6 RACE技术 259
8.7 T-DNA插入突变技术 263
8.8 酵母双杂交技术 268
8.9 宏基因组文库构建 270
8.10 cDNA代表性差异分析 274
8.11 基因组文库的构建 278
8.12 cDNA文库构建 290
8.13 扣除杂交法 294
8.14 限制酶介导整合技术 296
8.15 实时荧光PCR 298
8.16 图位克隆分离目的基因 300
8.17 转座子标签技术 304
8.18 热不对称性交互PCR（Tail-PCR） 307
8.19 反向PCR（Inverse PCR,iPCR） 311
8.20 染色体步移法 314
8.21 电子克隆（in silico cloning） 318
8.22 基因互补技术 320
8.23 基因敲除技术 321
8.24 RNA干扰技术 325
第9章 热带植物基因组核酸制备 334
9.1 细菌基因组DNA提取 334
9.2 细菌基因组RNA提取 334
9.3 真菌基因组DNA提取 334
9.4 真菌基因组RNA提取 334
9.5 热带植物土壤基因组DNA制备 335
9.6 质粒DNA提取 335
9.7 橡胶树叶片基因组总DNA提取 337
9.8 橡胶树叶片和茎基因组总RNA提取 338
9.9 橡胶树胶乳基因组总RNA提取 339
9.10 橡胶树树皮基因组总RNA提取 339
9.11 香蕉基因组总DNA提取 339
9.12 香蕉基因组总RNA提取 339
9.13 杧果基因组总DNA提取 340
9.14 杧果基因组总RNA提取 341
9.15 荔枝基因组总DNA提取 342
9.16 无核荔枝胚胎总RNA提取 342
9.17 龙眼基因组总DNA提取 344
9.18 龙眼基因组总RNA提取 344
9.19 番木瓜基因组总DNA提取 345
9.20 番木瓜基因组总RNA提取 346
9.21 马槟榔叶片基因组总DNA提取 346
9.22 马槟榔种仁基因组总RNA提取 347
9.23 木薯基因组总DNA提取 348
9.24 木薯基因组总RNA提取 349
9.25 甘蔗基因组总DNA提取 349
9.26 甘蔗基因组总RNA提取 350
9.27 油棕叶片基因组总DNA提取 350
9.28 水稻基因组总DNA提取 351
9.29 水稻基因组总RNA提取 352
第10章 热带植物基因工程受体系统建立 353
10.1 橡胶（Hevea basiliensis Muell.Arg.）组织培养 353
10.2 蓝桉（Eucalyptus globulus Labill.）组织培养 354
10.3 胡椒（Piper nigrum L.）组织培养 355
10.4 咖啡（Coffea spp.）组织培养 356
10.5 香蕉（Musa nana Lour.）组织培养 356
10.6 杧果（Mangifera indica L.）组织培养 357
10.7 荔枝（Litchi chinensis Sonn.）组织培养 358
10.8 龙眼（Dimocarpus longan Lour.）组织培养 359
10.9 椰子（Cocos nucifera L.）组织培养 360
10.10 木薯（Manihot esculenta Crantz）组织培养 361
10.11 甘蔗（Saccharum sirense Roxb.）组织培养 362
10.12 牧草（Grazing breeding）组织培养 363
10.13 笔花豆（Stylosanthes spp.）组织培养 364
10.14 益智（Alpinia oxyphylla Miq.）组织培养 365
10.15 砂仁（Amomum villosum Lour.）组织培养 365
10.16 白豆蔻Amomum kravanh Pierre ex Cagnep.）组织培养 366
10.17 长春花［Catharanhus roseus(L.)G.Don］组织培养 367
10.18 海南粗榧（Cephalotaxus hainanensis Li）组织培养 368
10.19 海南猫须草［Clerodendranthus spicatus(Thunb.)C.Y.Wu］组织培养 369
10.20 海南龙血树（Dracaena cambodiana Pierre ex Cagnep.）组织培养 370
10.21 蝴蝶兰（Phalaenopsis hybrid.）组织培养 371
10.22 水稻（Oryza sativa L.）组织培养 372
第11章 热带植物基因工程转化技术 373
11.1 Cohen转化法 373
11.2 电转化法 374
11.3 原生质体转化法（CryK13V基因对绿色木霉原生质体的转化） 375
11.4 转染 377
11.5 转导 378
11.6 根癌农杆菌Ti质粒转化系统 379
11.7 发根农杆菌Ri质粒载体基因转化（发根农杆菌介导的茶树遗传转化） 383
11.8 植物病毒载体介导基因转化（植物病毒载体介导的蚕豆遗传转化） 383
11.9 DNA直接导入基因转化 384
11.10 种质系统介导基因转化 389
第12章 重组体的筛选和鉴定 392
12.1 抗药性筛选法 392
12.2 显色模型筛选法 392
12.3 噬菌斑PCR筛选法 395
12.4 DNA限制性酶切图谱法 395
12.5 菌落PCR 396
12.6 菌落（或噬菌斑）原位杂交法 396
12.7 原位PCR 397
12.8 Southern杂交 399
12.9 Northern杂交 401
12.10 Western杂交技术 402
12.11 酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay） 405
12.12 基因组DNA序列测定技术 406
12.13 RAPD技术 419
12.14 RFLP技术 421
12.15 AFLP技术 424
附录 428
附录1 常用的测量单位及换算 428
1．常用的测量单位 428
2．DNA片段的分子质量 428
3．DNA物质的量与质量间的换算 429
4．核酸摩尔浓度溶液的配制 429
附录2 常用的分子质量标准物 429
1．DNA分子质量标准（bp） 429
2．RNA分子质量标准物 430
3．蛋白质分子质量标准 430
附录3 凝胶电泳中凝胶浓度的分离范围 431
1．琼脂糖凝胶浓度有效分离的线状DNA的大小范围 431
2．PAGE凝胶浓度有效分离的蛋白质分子质量范围 431
附录4 常用限制酶的主要性质及缓冲液 431
1．常用限制酶的主要性质 431
2．限制性内切核酸酶作用的3种缓冲液 432
附录5 常用抗生素配制及使用浓度 432
附录6 主要溶液（母液）及缓冲液配制 433
附录7 常用的农杆菌培养基成分（g/L） 435
附录8 植物细胞工程常用的培养基配方（mg/L） 436
附录9 分子生物学常用缩语 442
附录10 热带植物细胞工程常用缩语 444
附录11 百年诺贝尔奖（生理学医学） 447
附录12 部分重要的生物信息学网络资源 452
附录13 热带植物基因工程相关术语解释 453