第一章 概述 1
第一节 液相色谱及其联用技术 1
一、液相色谱技术 1
二、联用技术 4
第二节 气相色谱及其联用技术 5
一、色谱柱 6
二、检测器 6
三、选择气相色谱分离条件的一般原则 6
四、气相色谱联用技术 7
参考文献 8
第二章 脱氧核糖核酸(DNA)的电泳与色谱分析 10
第一节 DNA的提取和PCR扩增 10
一、概述 10
二、DNA提取 11
三、基因突变的检测 12
第二节 DNA的液相色谱分析 17
一、DNA的变性高效液相色谱分析 17
二、应用实例 23
第三节 DNA的电泳分析 28
一、DNA的电泳分析 28
二、应用实例 33
参考文献 39
第三章 生物技术药物的纯化及鉴定 46
第一节 生物技术药物的分离纯化 46
一、蛋白质药物的纯化 46
二、核酸及寡核苷酸药物的纯化 54
第二节 蛋白质性质的鉴定 58
一、纯度鉴定 58
二、含量测定 65
三、氨基酸组成分析 65
四、N-末端序列分析 71
五、C-末端序列分析 78
六、等电点测定 80
七、肽指纹图谱 81
第三节 核酸的性质鉴定 83
一、核酸中碱基的分析 84
二、LC-MS分析寡核苷酸的纯度 86
三、离子对反相色谱分析寡核苷酸阶梯序列 87
第四节 糖类生物药物分析 88
一、糖类药物的分析 89
二、多糖中单糖组成分析 91
三、糖类分析中的气相色谱及其衍生化技术 96
四、糖蛋白中糖的组成分析 99
参考文献 103
第四章 生物标志物的色谱分析 108
第一节 样品的采集和预处理 108
一、样品的采集和保存 108
二、生物样品的一般预处理方法 111
三、待测组分的提取 113
四、几种常用的样品处理技术 116
第二节 体内氨基酸的测定 118
一、体液氨基酸谱的HPLC分析 118
二、LC-MS/MS用于新生儿氨基酸代谢紊乱的筛查 119
三、同型半胱氨酸的HPLC测定 121
四、3-甲基组氨酸的测定 123
第三节 体液中儿茶酚胺的测定 124
一、体液中儿茶酚胺的分析及样品处理 124
二、应用实例 125
第四节 体内天然甾体化合物的测定 130
一、天然甾体化合物及其测定方法 130
二、应用实例 132
参考文献 137
第五章 色谱在蛋白质组学研究中的应用 140
第一节 前沿 140
第二节 生物样品的处理方法 142
一、匀浆破碎 142
二、固体研磨破碎法 143
三、超声破碎法 144
四、蛋白质清洗和提取 144
第三节 色谱方法在蛋白质预分离和鉴定中的应用 145
一、色谱方法的预分离 145
二、液-质联用方法对整体蛋白质直接分析 148
三、液-质联用技术在整体蛋白质直接分析中的应用 150
四、色谱预分离与液-质联用技术在复杂蛋白质混合物分析中的应用 154
第四节 色谱方法在多肽分离和鉴定中的应用 160
一、一维液-质联用对简单肽混合物的分离鉴定 160
二、二维液-质联用对复杂多肽混合物的分离鉴定 162
三、液-质联用方法用于严重急性呼吸系统综合征冠状病毒结构蛋白质的分析鉴定 163
第五节 色谱方法在翻译后修饰蛋白质组研究中的应用 169
一、色谱在磷酸化修饰蛋白质组研究中的应用 169
二、IMAC亲和提取结合生物质谱用于磷酸化修饰蛋白质的分析鉴定 171
三、色谱方法在糖基化修饰蛋白质和多肽研究中的应用 182
四、凝集素亲和色谱-毛细管液相色谱-质谱联用用于N-糖基化修饰蛋白质及修饰位点分析 186
第六节 色谱方法在定量蛋白质组研究中的应用简介 190
参考文献 193
符号表 198