第一章 概述 1
第一节 什么是流式细胞术？ 1
第二节 流式细胞术能做什么？ 1
第三节 背景与回顾 2
第四节 仪器简介 4
一、BD公司 4
二、Beckman Coulter公司 8
三、Cytomation公司 12
第二章 流式细胞术原理 15
第一节 工作原理 15
第二节 液流系统 16
一、鞘液 16
二、喷嘴 17
三、流式照射室 18
第三节 光学检测系统 18
一、激光和荧光 18
二、激光照射液流 22
三、光学信号的检测 23
四、参与信号处理的光学元件 26
五、光学信号检测系统 27
第四节 电子控制系统 30
一、光电检测器 30
二、通道 32
三、阈值 32
小结 32
参考文献 33
第三章 数据储存与分析系统 34
第一节 数据储存 34
第二节 数据分析 34
一、常用术语 35
二、流式图谱的表现形式 38
三、荧光补偿 46
第三节 数据分析实例 54
实例一：双参数FSC／SSC分析 54
实例二：三参数FSC／SSC／FL1分析 54
实例三：四参数FSC／SSC／FL1／FL2简单样本分析 55
实例四：四参数FSC／SSC／FL1／FL2复杂样本分析 56
小结 58
参考文献 58
第四章 细胞分选 59
第一节 细胞分选的原理 59
一、液滴形成 59
二、延迟时间 60
三、液滴充电与偏转 62
四、液滴的收集 62
第二节 影响分选的因素 62
一、分选速度 62
二、分选门的设定 65
三、分选模式 67
第三节 分选的质量控制与评价 68
一、分选的准确性 68
二、分选的效率 69
三、无菌分选 70
四、分选对细胞活性的影响 70
第四节 分选前的准备 71
一、分选用细胞的制备要求 71
二、准备的材料 72
三、分选时需考虑的几个问题 72
第五节 细胞分选的应用实例 73
实例一：淋巴细胞分选 73
实例二：组织特异性干细胞分选 73
实例三：染料排异性干细胞分选 76
实例四：精子分选 79
小结 80
参考文献 81
第五章 细胞表面标志的检测 83
第一节 血液细胞的流式检测 83
第二节 细胞表面标志的染色技术 85
一、细胞的表面分化抗原 85
二、直接染色法和间接染色法 86
第三节 对照的设置 87
一、阴性对照 87
二、同型对照 89
三、阳性对照 90
四、荧光补偿 91
第四节 定量测定 92
一、外标法 92
二、内标法 93
三、标准曲线法 93
四、分辨率 94
第五节 设门的策略 95
一、设门 96
二、检验门 97
三、荧光设门 100
四、多色流式分析实例 101
小结 103
参考文献 103
第六章 细胞内蛋白的检测 104
第一节 流式细胞术检测细胞内蛋白的特点 104
第二节 细胞内蛋白染色通则 106
一、细胞内蛋白染色的步骤 106
二、细胞内蛋白染色应遵循的原则 107
第三节 磷酸化蛋白的流式检测 107
一、固定和通透细胞 108
二、荧光抗体染色 109
三、优化染色方法 111
四、多种磷酸化蛋白同时检测 111
第四节 细胞因子的流式检测 113
一、T淋巴细胞的细胞因子检测 113
二、单核细胞的细胞因子检测 114
三、细胞内蛋白流式检测的优缺点 115
第五节 微球免疫测定法 115
一、CBA方法的原理 116
二、CBA方法的流程 116
三、CBA方法的检测范围 119
四、CBA方法的优缺点 120
第六节 磷酸化蛋白与DNA同时检测 120
小结 121
参考文献 121
第七章 细胞核成分的检测 123
第一节 常用的DNA染料 123
第二节 细胞周期与DNA的动态分析 125
一、细胞周期的定量分析方法 126
二、粘连细胞的分析 128
三、BrdU／PI双参数分析细胞周期 129
四、BrdU／PI双参数分析细胞周期的动态变化 130
五、Hoechst／PI双参数分析细胞周期的动态变化 131
第三节DNA总量分析和倍体分析 131
一、DNA总量分析 131
二、正常生物体的倍体分析 132
三、肿瘤细胞的非整倍体分析 133
四、植物倍体的分析 134
第四节 细胞同步化 135
一、自然同步化 135
二、人工同步化 135
第五节DNA与RNA同时检测 137
一、吖啶橙（AO）同时检测DNA与RNA 137
二、Hoechst 33342／PY同时检测DNA和RNA 137
第六节DNA与蛋白质同时检测 138
一、DNA和总蛋白同时检测 138
二、DNA和细胞周期蛋白同时检测 139
第七节 染色体分析 140
第八节 流式细胞术在死亡生物学中的应用 142
一、散射光的检测 143
二、caspases检测 143
三、线粒体膜电位的检测 144
四、质膜的检测 147
五、DNA测定法 148
六、流式微球免疫测定法 150
七、细胞衰老与端粒测定 150
八、坏死细胞检测 152
小结 153
参考文献 153
第八章 流式细胞术的应用概述 156
第一节 流式细胞术在生物学研究中的应用 156
一、在细胞生物学中的应用 156
二、在细胞周期研究和DNA倍体分析中的应用 157
三、在细胞凋亡分析中的应用 157
四、在染色体核型分析中的应用 157
五、在分子遗传学中的应用 157
六、在免疫学中的应用 157
七、在植物学中的应用 158
第二节 流式细胞术在医学研究及临床中的应用 158
一、在肿瘤学中的应用 158
二、在临床细胞免疫学中的应用 159
三、在血液病治疗中的应用 162
四、在血栓与出血性疾病治疗中的应用 163
五、生物学领域的其他应用 164
第三节 流式细胞术在农林畜牧养殖业中的应用 164
一、在植物学中的应用 164
二、在家畜性别控制中的应用 165
三、在家畜疾病监控与预防中的应用 165
第四节 流式细胞术在微生物学中的应用 165
一、在病原微生物研究中的应用 166
二、在环境微生物研究中的应用 167
第五节 流式细胞术在食品、药品检测方面的应用 168
一、在食品检测中的应用 168
二、在药品检测中的应用 169
第六节 流式细胞术新技术的应用 171
一、CBA方法 171
二、定量流式细胞术 172
小结 172
参考文献 173
第九章 流式细胞术的样本制备和染色方法 175
第一节 单细胞悬液的制备 175
一、小鼠末梢血的采集和单细胞悬液的制备 175
二、小鼠胸腺的分离和单细胞悬液的制备 176
三、小鼠骨髓的采集和单细胞悬液的制备 176
四、密度梯度离心法制备外周血单个核细胞悬液 177
五、小鼠脾脏的分离和单细胞悬液的制备 178
六、小鼠成体乳腺单细胞悬液的制备 179
七、小鼠胰腺单细胞悬液的制备 179
第二节 荧光素标记抗体的制备 180
一、FITC／ Texas Red标记 180
二、生物素标记 181
三、Allophycocyanin（APC）或者Phycoerythrin（PE）标记 182
第三节 流式分析和分选用的细胞染色方法 183
一、流式分析用的细胞染色方法 183
二、流式分选用的细胞染色方法 184
三、SP细胞的染色方法 185
四、流式分选用的精子染色方法 186
第四节 流式细胞术检测细胞内分子 186
一、常用的细胞固定方法 187
二、细胞内分子的染色方法 187
三、细胞内和细胞外分子同时染色的方法 188
第五节 流式细胞术检测细胞周期 188
一、固定全细胞的PI染色方法 189
二、非固定细胞的无洗染色方法 190
三、BrdU染色方法 191
四、植物细胞的DNA染色方法 191
第六节 细胞同步化实验方法 192
一、过剩胸腺嘧啶脱氧核苷法——S期细胞同步化 192
二、羟基脲法——S期细胞同步化 193
三、秋水仙胺法——M期细胞同步化 193
四、血清饥饿法——G0期细胞同步化 194
五、G1期和G2期细胞同步化实验方法 194
第七节 流式细胞术同时检测DNA和RNA 194
一、Hoechst 33342／PY同时检测DNA和RNA 194
二、吖啶橙（AO）同时检测DNA和RNA 195
第八节 细胞凋亡的检测 196
一、PI染色法——DNA凋亡峰的检测 196
二、Annexin V／PI双标记法 197
三、Hoechst 33342／PI双染色法 198
四、TUNEL测定法 198
小结 199
参考文献 200
附录 201
一、流式细胞术相关网址 201
二、流式细胞术相关实验方法网址 202
三、荧光素试剂公司 202
四、荧光素光谱网址 203
五、荧光素激发和发射光谱一览表 204