1 序：固定化酶——历史、现状和展望 1
1.1 序 1
1.2 过去 3
1.2.1 发展早期（1916年～20世纪40年代） 4
1.2.2 发展早期（20世纪50年代） 4
1.2.3 发展期（20世纪60年代） 5
1.2.4 发展中期（20世纪70年代） 7
1.2.5 发展后期（20世纪80年代） 10
1.2.6 合理设计期（20世纪90年代至今） 12
1.3 固定化酶：过去的启示 14
1.3.1 固定化方法 14
1.3.2 多样性对多用性 15
1.3.3 互补对取舍 17
1.3.4 修饰对固定化 18
1.4 发展预见 24
1.4.1 进一步发展的空间 24
1.4.2 方法的整合 25
1.5 参考文献 26
2 基于吸附的固定化方法 42
2.1 引言 42
2.2 吸附的种类 42
2.3 吸附式酶固定化方法的原理 44
2.3.1 单层原理 44
2.3.2 稳定化原理 45
2.3.3 酶分子的分布 47
2.4 载体的理化性质要求 48
2.4.1 物理性质要求 48
2.4.2 载体的化学性质 51
2.5 决定酶催化特性的因素 53
2.5.1 活力含义 53
2.5.2 酶的稳定性 65
2.5.3 选择性 72
2.6 利用吸附制备固定化酶 77
2.6.1 传统的吸附法 77
2.6.2 非传统的吸附 96
2.6.3 以吸附为基础的双重固定化 101
2.7 参考文献 114
3 共价结合酶固定化 137
3.1 导言 137
3.2 载体的物理性质 138
3.2.1 载体的表面 140
3.2.2 结合位点的密度 142
3.2.3 孔的相关性质 143
3.2.4 颗粒大小 145
3.2.5 载体的形状 146
3.3 载体的化学性质 147
3.3.1 载体结合活性基团（CAG） 149
3.3.2 载体结合惰性基团 151
3.3.3 间隔臂 152
3.4 酶：用于共价结合的氨基酸残基 153
3.4.1 氨基酸残基的反应性 155
3.4.2 活力氨基酸的位置 155
3.5 酶性能的影响因素 156
3.5.1 活力保留 157
3.5.2 固定化酶的稳定性 171
3.5.3 固定化酶的选择性 182
3.6 活性载体的制备 187
3.6.1 合成活性载体 188
3.6.2 惰性载体前体 201
3.6.3 惰性载体的相互转换 207
3.6.4 活性官能团的相互转化 229
3.7 参考文献 233
4 酶的包埋 256
4.1 前言 256
4.2 包埋的定义 257
4.3 载体的要求 259
4.3.1 物理条件 259
4.3.2 化学条件 260
4.4 包埋的影响 261
4.4.1 包埋酶的活性 262
4.4.2 稳定性 265
4.4.3 选择性 267
4.5 各种包埋酶的制备 268
4.5.1 传统的包埋过程 269
4.5.2 非常规包埋技术 289
4.6 参考文献 301
5 酶的微囊化 316
5.1 介绍 316
5.1.1 概述 316
5.1.2 回顾 316
5.1.3 微囊化酶的优势和劣势 317
5.2 微囊化方法的分类 317
5.2.1 传统的微囊化方法 317
5.2.2 非常规微囊化方法 319
5.2.3 基于微囊化的双重固定方法 319
5.2.4 微囊化后载酶方法 321
5.3 微囊化的影响 322
5.3.1 微囊化酶的活力 322
5.3.2 微囊化酶的稳定性 323
5.3.3 异构选择性 323
5.4 微囊化酶的制备方法 323
5.4.1 界面法 323
5.4.2 表面活性剂相关的中空微球 327
5.4.3 相反转 334
5.4.4 预设计后填装包封胶囊 336
5.4.5 非传统的胶囊化方法 338
5.5 参考文献 345
6 非传统的酶固定化 355
6.1 引言 355
6.2 包被为基础的酶固定化 356
6.2.1 单层包被 356
6.2.2 相转换法包被 357
6.2.3 物理吸附多重酶包被 357
6.2.4 通过中介形成的多重酶分子层 357
6.2.5 亲和配体介导的酶包被 359
6.2.6 可溶性酶-聚合体的包被 360
6.2.7 酶催化胶体化的多酶分子层 360
6.2.8 溶胶-凝胶包被和共价吸附 361
6.2.9 电化学沉积 361
6.2.10 应用小孔载体进行酶包被 361
6.3 位点特异的固定化 362
6.3.1 通过生物特异性配体-酶相互作用的位点特异的固定化 365
6.3.2 引入化学标签 365
6.3.3 固定化配体（底物类似物）与酶结合 370
6.3.4 遗传工程标签 373
6.4 有机溶剂中的酶固定化 375
6.4.1 有机溶剂中的共价结合 375
6.4.2 有机溶剂中酶的包埋 377
6.4.3 有机可溶性酶衍生物的固定 377
6.4.4 有机溶剂中酶在支持物上的吸附 377
6.5 印迹酶固定法 378
6.5.1 分子印刷（迹）-多点连接 378
6.5.2 印迹-交联 379
6.5.3 包埋-印迹 380
6.5.4 结晶和交联 380
6.5.5 聚合和交联 381
6.5.6 分子内交联-印迹 381
6.5.7 固定后印迹 382
6.5.8 冻干印迹 382
6.6 稳定化-固定化 383
6.6.1 通过结合配体稳定 384
6.6.2 通过添加稳定剂作为构象赋形剂来稳定 385
6.6.3 通过固定前修饰来稳定 385
6.7 基于修饰的酶固定化 388
6.7.1 先固定后修饰 388
6.7.2 修饰后聚合 389
6.7.3 固定化前的改良技术 390
6.8 后固定化技术 397
6.8.1 引言 397
6.8.2 后处理的分类 398
6.8.3 物理方法 399
6.8.4 化学方法 404
6.8.5 前景 409
6.9 可逆可溶固定化酶 409
6.9.1 pH易起反应的活泼聚合物 410
6.9.2 温敏活泼聚合物 412
6.9.3 溶剂敏感酶——聚合物结合物 412
6.9.4 基于离子强度敏感型聚合物的可逆可溶性固定化酶 414
6.9.5 光敏聚合物的可逆可溶固定化酶 414
6.10 参考文献 415
索引 434