第一篇 概论 1
第一章 实验室基本要求 1
第二章 生物化学实验基本常识 4
第一节 实验基本操作 4
第二节 实验误差与数据处理 11
第三节 实验样品的制备 15
第二篇 常用生物化学与分子生物学实验技术第一章 光度法的原理与分光光度计的使用 18
第二章 层析技术 25
第三章 电泳技术 34
第四章 离心技术 42
第五章 分子杂交和印迹技术 45
第六章 PCR技术的原理与应用 47
第三篇 基础生物化学实验 50
第一章 蛋白质 50
实验一 蛋白质定量分析(一):紫外线(UV)吸收法 50
实验二 蛋白质定量分析(二):BCA法 52
实验三 蛋白质定量分析(三):Folin-酚试剂法 53
实验四 蛋白质定量分析(四):考马斯亮蓝结合法 55
实验五 蛋白质定量分析(五):改良微量凯氏定氮法 57
实验六 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 59
实验七 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离血清蛋白质 61
实验八 血清γ-球蛋白的提纯 64
第二章 酶和维生素 67
实验一 碱性磷酸酶的提取及比活性测定 67
实验二 酶促反应动力学实验 69
实验三 金氏法测定血清谷丙转氨酶活性 75
实验四 维生素C的提取与定量(2,4-二硝基苯肼法) 77
第三章 糖 79
实验一 血糖测定(葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法)及肾上腺素对血糖浓度的影响 79
实验二 高糖膳食、饥饿和激素对肝糖原含量的影响 81
第四章 脂类 83
实验一 血清总胆固醇测定(硫磷铁法) 83
实验二 血清甘油三酯测定 84
第五章 核酸 86
实验一 核酸浓度测定(一):紫外线(UV)吸收法 86
实验二 核酸浓度测定(二):二苯胺法 87
实验三 鼠肝DNA的制备 89
实验四 细胞核的分离与核酸的鉴定 92
第四篇 基础分子生物学实验 96
实验一 感受态细胞的制备 96
实验二 质粒DNA的快速提取制备及酶切鉴定 97
实验三 聚合酶链式反应(PCR)及产物鉴定 101
实验四 蛋白质印迹免疫分析 104
第五篇 附录 106
附录一 常用洗涤液的种类和用途 106
附录二 常用蛋白质分子量标准参照物 106
附录三 常用试剂等级表示法和用途 107
附录四 常用缓冲溶液浓度及pH范围 107
附录五 常用三种凝胶的种类型号及性能 108
附录六 硫酸铵饱和度的常用表 109
附录七 常用酸碱的比重与浓度的关系 111
附录八 常用缓冲液的配制方法 111
1.广范围的缓冲液pH 2.6~12.0 111
2.柠檬酸-Na2HPO4缓冲液,pH 2.6~7.6 112
3.柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液,pH 3.0~6.2 113
4.醋酸-醋酸钠缓冲液,pH 3.7~5.6 113
5.琥珀酸-NaOH缓冲液,pH 3.8~6.0 114
6.Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液,pH 5.8~8.0 114
7.Clark-Lubs缓冲液(KH2PO4-NaOH),pH 5.8~8.0 115
8.三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲液,pH 7.1~8.9(25℃) 115
9.Clark-Lubs缓冲液(硼酸-NaOH),pH 8.0~10.2 116
10.硼酸缓冲液,pH 8.1~9.0(25℃) 117
11.甘氨酸-NaOH缓冲液,pH 8.6~10.6(25℃) 117
12.Na2CO3-NaHCO3缓冲液 118
13.硼酸缓冲液,pH 9.3~10.7(25℃) 118
14.碳酸缓冲液,pH 9.7~10.9(25℃) 119
15.磷酸缓冲液,pH 11.0~11.9(25℃) 119
16.纸上蛋白质电泳常用的几种缓冲液 120
参考文献 120