第1章 总论 1
第一节 概述 1
第二节 常用染色技术 1
一、细胞免疫荧光染色技术 2
二、核酸荧光染色技术 4
三、荧光微球捕获染色技术 4
第三节 基本检验流程 6
一、标本的采集、运送与储存 6
二、标本处理 6
三、开机 6
四、仪器光路与流路的检查与校准 7
五、上机测定 7
六、结果分析 9
七、检验报告 10
八、仪器清洗 11
九、关机 11
第四节 方法学特点 11
一、单细胞分析 11
二、定量分析 11
三、快速性 11
四、准确性 11
五、特异性 11
六、重复性 12
七、多参数分析 12
第2章 临床型流式细胞仪 13
第一节 结构特点与工作原理 13
一、结构特点 13
二、工作原理 14
第二节 技术指标 15
一、荧光测量灵敏度 15
二、分辨率 15
三、前向散射光检测灵敏度 15
四、分析速度 15
第三节 技术特色 16
一、门与设门 16
二、图像数据资料显示 17
三、FS阈值设定 18
四、补偿设置 19
第四节 使用方法与技巧 20
一、开机程序 20
二、光路和流路的检测程序 20
三、清洗程序 20
四、关机程序 21
五、检验方案的编辑 21
六、新编辑检验方案参数的调试 25
第五节 常见故障排除与维护 29
一、常见故障排除 29
二、仪器的维护常识 31
第六节 流式细胞仪工作术语 32
第3章 常见影响因素 35
一、温度 35
二、pH 35
三、荧光染料浓度 36
四、杂质 36
五、细胞固定剂 36
六、溶液黏度 37
七、其他因素 37
第4章 标本的采集、运送与保存 38
第一节 标本采集 38
一、免疫功能分析类标本 38
二、血小板分析类标本 39
三、白血病细胞免疫分型类标本 40
四、DNA分析类标本 40
五、其他流式检验项目标本 41
第二节 标本运送 43
一、运送方法 43
二、注意事项 44
第三节 标本保存 44
一、短期保存 44
二、长期保存 46
第5章 单细胞悬液的制备 49
第一节 概述 49
一、物理法 49
二、酶学法 49
三、化学法 50
第二节 各种悬液的制备 50
一、血液单细胞悬液 50
二、骨髓单细胞悬液 52
三、脱落细胞单细胞悬液 53
四、实体瘤组织单细胞悬液 54
五、石蜡包埋组织单细胞核悬液 57
六、培养细胞单细胞悬液 58
第6章 机体造血功能监测 60
第一节 CD34+干细胞的测定 60
一、造血干细胞移植 60
二、CD34+干细胞检测的基本原理 63
三、国外常用CD34+干细胞流式细胞检验方法 63
四、造血干细胞和造血祖细胞的分类检测 66
第二节 网织红细胞测定 71
第三节 网织血小板测定 73
第7章 机体免疫功能监测 78
第一节 T淋巴细胞及其亚群的检测 78
一、总T淋巴细胞、T4淋巴细胞和T8淋巴细胞 79
二、Th细胞和Ti细胞 95
三、Tc细胞和Ts细胞 97
四、Th1和Th2细胞 100
五、Tc1和Tc2细胞 107
六、αβT淋巴细胞和γδT淋巴细胞 111
七、初始T细胞和记忆T细胞 113
八、活化T细胞 116
第二节 B淋巴细胞及其亚群的检测 119
一、B淋巴细胞 119
二、B1和B2淋巴细胞 122
第三节 NK细胞的检测 124
第四节 单核细胞的检测 127
第五节 机体免疫功能监测的质量控制 130
第8章 机体凝血功能监测 132
第一节 血小板的形态、结构与功能 132
一、形态 132
二、结构 133
三、功能 135
第二节 血小板流式检验现状 136
梅三节 血小板精确计数 137
一、单平台法 137
二、双平台法 140
第四节 活化血小板测定 143
一、循环活化血小板测定 143
二、体外刺激活化血小板测定 146
三、血小板-白细胞聚集体检测 149
四、血小板-单核细胞聚集体测定 151
第五节 血小板膜糖蛋白检测 154
第六节 血小板微粒测定 157
第9章 自身免疫性疾病的鉴别诊断 162
第一节 红细胞表面相关免疫球蛋白的测定 162
第二节 粒细胞表面相关免疫球蛋白的测定 165
第三节 血小板表面相关免疫球蛋白的测定 167
第10章 肿瘤临床中的应用 172
第一节 细胞周期与DNA倍体检测 172
第二节 细胞凋亡检测 179
一、PI染色法 179
二、Annexin V-PI染色法 182
三、APO 2.7测定法 185
四、末端转移酶标记（TUNEL）法 187
第三节 肿瘤化疗多药耐药性监测 191
第11章 白血病免疫诊断与分型 196
第一节 正常骨髓造血细胞分化成熟的抗原表达规律 196
一、粒系和单核系细胞抗原 196
二、淋巴细胞分化发育的抗原 198
三、T系、B系和髓系的特异性标志抗原 199
第二节 白血病免疫诊断与分型的基本原理与意义 199
一、白血病免疫分型的发展 199
二、流式细胞免疫分型的基本原理 200
三、流式细胞免疫分型的优点 205
第三节 流式细胞免疫分型的检验方法 206
一、主要仪器 206
二、主要试剂 206
三、标本采集 206
四、样本制备 207
五、细胞染色 207
六、流式细胞仪测定 208
七、数据分析与解释 209
第四节 临床常见白血病类型的免疫诊断与分型要点 210
一、前驱B和T急性淋巴细胞白血病／淋巴母细胞淋巴瘤 210
二、慢性淋巴细胞白血病／小淋巴细胞淋巴瘤 211
三、急性髓系白血病 212
四、急性未定系列白血病 220
第五节 临床少见白血病类型的免疫诊断与分型要点 221
一、毛细胞白血病 221
二、浆细胞骨髓瘤／浆细胞瘤 221
三、幼稚淋巴细胞白血病 221
四、T细胞大颗粒淋巴细胞白血病 222
五、侵袭性NK细胞白血病 222
六、成人T细胞白血病 223
第六节 新进展 223
一、不设门流式方法的应用 223
二、介绍几个较有用的组合 224
第七节 质量控制 225
一、有效的样本制备技术 225
二、流式细胞仪的校准和优化设置 225
三、细胞系别与类型判定 226
第12章 强直性脊柱炎的鉴别诊断 228
第一节 Beckman-Coulter HLA-B27/HLA-B7表达的测定 228
第二节 BD HLA-B27/CD3表达的测定 232
第13章 阵发性睡眠性血红蛋白尿的鉴别诊断 237
第一节 红细胞表面CD55和CD59表达的测定 237
第二节 白细胞表面CD55和CD59表达的测定 240
第三节 白细胞的FLAER法测定 245
第14章 细胞因子测定 249
第一节 流式微球分析技术与流式液相芯片技术 249
第二节 人类Th1/Th2细胞因子的检测 250
第15章 质量控制 257
第一节 室内质量控制 257
一、分析前对样本和试剂的质量控制 257
二、分析中仪器及检测过程的质量控制 259
三、分析后数据传输的质量控制 262
第二节 室间质量评价 262
一、国家卫生部流式检验室间质评 262
二、国际流式检验室间质评 263
附录A Multicycle DNA含量与细胞周期分析软件 264
附录B 临床常见流式检验指标的正常参考范围 299
附录C 临床流式细胞学检验技术相关名词 305
附录D 常用流式检验试剂的配制 308