目 录中译本序译者的话第三版前言上 册第1章质粒及其在分子克隆中的应用导言 2
SDS碱裂解法制备质粒DNA（方案1～3） 26
方案1 SDS碱裂解法制备质粒DNA：小量制备 27
方案2 SDS碱裂解法制备质粒DNA：中量制备 30
方案3 SDS碱裂解法制备质粒DNA：大量制备 32
煮沸裂解法制备质粒DNA（方案4和5） 36
方案4 煮沸裂解法小量制备质粒DNA 36
方案5煮沸裂解法大量制备质粒DNA 39
方案6牙签法小量制备质粒DNA 42
方案7 SDS裂解法提取质粒DNA 45
方案8聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA 48
方案9层析法纯化质粒DNA 50
方案10氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA：连续梯度法 53
方案11 氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA：不连续梯度法 56
方案12用有机溶剂抽提法从DNA中除去溴化乙锭 59
方案13用离子交换层析法从DNA中去除溴化乙锭 61
方案14 NaCl离心法去除质粒DNA制备物中的小片段核酸 63
方案15 Sephacryl S-1000层析法去除质粒DNA制备物中的小片段核酸 65
方案16 氯化锂沉淀法去除质粒DNA制备物中的小片段核酸 66
方案17在质粒载体中进行定向克隆 68
方案18在凸出末端上连接接头 71
方案19在质粒载体中进行平末端片段的克隆 73
方案20质粒DNA的去磷酸化 76
方案21 向平末端DNA连接合成接头 80
方案22在低熔点琼脂糖中连接质粒和目的DNA 85
方案23 制备和转化感受态大肠杆菌的Hanahan方法：高效的转化策略 87
方案24 制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue方法：制备超级感受态细胞 93
方案25用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌 96
方案26大肠杆菌的电击转化 99
方案27 用X-gal和IPTG筛选细菌菌落：α互补 103
·替代方案：X-gal和IPTG直接用于琼脂板 105
方案28小量细菌克隆的杂交法筛选 105
方案29中等量细胞克隆的杂交法筛选 107
·替代方案：菌落的快速裂解和DNA固定于尼龙膜 109
方案30大量细菌克隆的杂交方法筛选 110
方案31菌落的裂解和DNA与滤膜的结合 112
方案32在滤膜上进行细菌DNA的杂交 114
信息栏 118
氯霉素 118
卡那霉素 120
pBR322 121
四环素 122
氨苄青霉素和羧苄青霉素 123
X-gal 124
α互补 125
溴化乙锭 126
缩合剂与聚合剂 127
聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA 128
溶菌酶 128
聚乙二醇 129
氯化铯和氯化铯平衡密度梯度 130
DNA连接酶 132
接头 136
电击转化 137
第2章λ噬菌体及其载体导言 147
方案1λ噬菌体的铺平板培养 170
·附加方案：表达β－半乳糖苷酶噬菌体的噬菌斑分析 175
方案2λ噬菌体噬菌斑的挑取 176
·附加方案：大噬菌斑 176
方案3通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种 177
·替代方案：通过平板裂解和刮取制备λ噬菌体原种 180
方案4用小量液体培养物制备λ噬菌体原种 181
方案5λ噬菌体的大规模培养：低倍数感染 183
·替代方案：λ噬菌体的大规模培养：高倍数感染 185
方案6从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒 185
方案7通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA的含量 187
方案8通过CsC1等密度梯度离心纯化λ噬菌体颗粒 189
·替代方案：通过CsCl平衡梯度等密度离心纯化λ噬菌体颗粒 192
方案9通过甘油分级梯度离心纯化λ噬菌体颗粒 193
方案10通过沉淀／离心纯化λ噬菌体颗粒 194
方案11 用蛋白酶K和SDS从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA 195
方案12用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA 198
方案13可被单一限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备 200
方案14经双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备 202
方案15λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理 206
方案16λ噬菌体臂的纯化：通过蔗糖密度梯度离心 209
方案17用于基因组文库中的真核DNA的部分酶切：预反应 213
方案18用于基因组文库的真核DNA的部分酶切：制备反应 216
方案19λ噬菌体臂与外源基因组DNA片段的连接 219
方案20基因组文库的扩增 222
方案21噬菌体DNA从噬菌斑到膜的转移 224
·替代方案：从噬菌斑到滤膜的快速转移 229
方案22噬菌体DNA在滤膜上的杂交 229
方案23λ噬菌体分离物的快速分析：从平板裂解物中纯化λDNA 233
·附加方案：通过CTAB沉淀除去多糖 238
方案24λ噬菌体分离物的快速分析：从液体培养物中纯化λDNA 238
噬菌体：历史回顾 241
信息栏 241
将对DNA大分子的损伤减少到最低程度 242
体外包装 243
第3章M13噬菌体载体导言 251
方案1 M13噬菌体铺平板 266
方案2 M13噬菌体液体培养 268
方案3 M13噬菌体双链（复制型）DNA的制备 270
方案4 M13噬菌体单链DNA的制备 273
方案5单链和双链M13噬菌体DNA的大规模制备 276
方案6 M13噬菌体载体的克隆 278
方案7重组M13噬菌体克隆分析 284
·替代方案：杂交法筛选M13噬菌体噬菌斑 286
方案8用噬菌粒载体制备单链DNA 286
信息栏 292
生长时间 292
聚乙二醇 293
第4章高容量载体的应用导言 297
方案1应用黏粒载体构建基因组DNA文库 307
方案2通过杂交筛选未扩增的黏粒文库：滤膜影印 320
·附加方案：减少交叉杂交 322
方案3黏粒文库的扩增和贮存：在液体培养基内扩增 323
方案4黏粒文库的扩增和贮存：在滤膜上扩增 325
·替代方案：在平板上扩增 328
方案5 P1噬菌体及其克隆系统的应用 328
·附加方案：用点滴透析法纯化高分子质量DNA 337
·替代方案：用Qiagen树脂层析纯化高分子质量环状DNA 337
方案6 P1噬菌体克隆在大肠杆菌宿主间的转移 338
方案7细菌人工染色体的应用 340
方案8从小量培养物中分离BAC DNA 345
方案9从大量培养物中分离BAC DNA 347
方案10酵母人工染色体的应用 350
方案11酿酒酵母的生长及其DNA的制备 359
方案12酵母DNA的小量制备 361
方案13利用PCR分析酵母菌落 361
方案14高容量载体中基因组DNA片段末端的分离：小载体PCR 365
信息栏 373
Cre-loxP 373
大片段克隆产品及其服务 377
第5章DNA凝胶电泳和脉冲场琼脂塘凝胶电泳导言 385
方案1琼脂糖凝胶电泳 387
方案2琼脂糖凝胶中DNA的检测 396
方案3琼脂糖凝胶中DNA的回收：DEAE－纤维素膜电泳 400
方案4琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中DNA的回收：电洗脱至透析袋 404
方案5 阴离子交换色谱纯化从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶回收的DNA 406
方案6低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收：有机溶剂抽提 408
·替代方案：用玻璃珠从琼脂糖凝胶中回收DNA 411
方案7低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收：用琼脂糖酶消化 412
方案8碱性琼脂糖凝胶电泳 414
·附加方案：碱性琼脂糖凝胶的放射自显影 417
方案9中性聚丙烯酰胺凝胶电泳 418
方案10聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测 424
方案11聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测 425
方案12聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的回收：压碎与浸泡法 426
脉冲场凝胶电泳（方案13～20） 429
方案13脉冲场凝胶电泳制备DNA：哺乳动物细胞和组织DNA的分离 435
方案14脉冲场凝胶电泳制备DNA：酵母完整DNA的分离 438
方案15琼脂糖凝胶栓中DNA的限制性内切核酸酶消化 441
方案16脉冲场凝胶电泳的分子质量标准 444
方案17横向交变场的脉冲场凝胶电泳 446
·替代方案：PFGE凝胶的银染 449
方案18箝位匀强电场的脉冲场凝胶电泳 450
方案19脉冲场凝胶中DNA片段的直接回收 454
方案20脉冲场凝胶中浓缩DNA片段的回收 455
第6章真核基因组DNA的制备和分析导言 461
方案1用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA 463
·附加方案：用荧光计估计DNA的浓度 470
方案2 用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA 471
方案3用缠绕法从哺乳动物细胞中分离DNA 474
方案4从96孔微培养板生长的哺乳动物细胞中分离DNA 476
·附加方案：适用于PCR的优化基因组DNA分离 478
方案5 从鼠尾或其他小样本中制备基因组DNA 479
·替换方案：不用有机溶剂从鼠尾分离DNA 482
·替换方案：一管法从鼠尾中分离DNA 482
·替换方案：从石蜡块中提取DNA 483
方案6哺乳动物DNA的快速分离 483
方案7酵母DNA的快速分离 485
方案8、9、10的导言 487
方案8 Southern印迹：毛细管法将DNA转移到膜上 492
方案9 Southern印迹：DNA从一块琼脂糖凝胶上同时向两张膜转移 499
方案10放射性标记的探针与固定在膜上的核酸的Southern杂交 502
·附加方案：从膜上洗去探针 508
·附加方案：低严谨性杂交 509
信息栏 509
甲酰胺及其在分子克隆中的应用 509
缠绕DNA（历史注脚） 511
快速杂交缓冲液 512
CTAB 512
第7章真核细胞mRNA的提取、纯化和分析导言 516
方案1 用酸性酚－硫氰酸胍－氯仿提取法纯化组织和细胞中的RNA 518
方案2 用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质 522
方案3 oligo（dT）－纤维素层析法提取poly（A）＋RNA 525
方案4批量层析方法筛选poly（A）＋RNA 529
Northern杂交 532
方案5根据大小分离RNA：乙二醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳 537
方案6 按大小分离RNA：在含有甲醛的琼脂糖凝胶上进行的RNA的电泳 540
方案7变性RNA在膜上的转移和固定 544
·替代方案：下行毛细管转移 548
方案8 Northern杂交 549
方案9纯化的RNA的点杂交和狭线杂交 552
方案10用S1核酸酶对RNA作图 556
方案11 核糖核酸酶保护：用核糖核酸酶和放射性标记的RNA探针对RNA作图 567
方案12 用引物延伸法进行RNA的分析 577
信息栏 582
如何去除RNA酶 582
RNA酶的抑制剂 583
DEPC（焦碳酸二乙酯） 584
胍盐 585
核酸酶S1 586
外切核酸酶Ⅶ 586
绿豆核酸酶 587
识别启动子的噬菌体编码的RNA聚合酶 587
放线菌素D 588
第8章 聚合酶链式反应体外扩增DNA导言 597
方案1聚合酶链式反应 611
方案2制备克隆用PCR产物的纯化 618
方案3通过超滤去除DNA扩增产物中的寡核苷酸及过剩dNTP 620
克隆PCR产物的导言（方案4～7） 622
方案4 PCR产物的平末端克隆 624
方案5克隆化的PCR产物连入T载体 627
方案6通过PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶切位点 628
方案7应用PCR的遗传工程 633
方案8应用mRNA反转录扩增eDNA（RT-PCR） 636
方案9 cDNA 5′末端的快速扩增（5′-RACE） 644
方案10 cDNA 3′末端的快速扩增（3′-RACE） 651
方案11 应用混合寡核苷酸引物引导的cDNA扩增（MOPAC） 657
方案12克隆在原核载体的DNA片段的快速鉴定 663
·附加方案：用PCR方法筛选酵母转化子 666
·附加方案：筛选λ噬菌体文库 666
方案13长距离PCR 667
方案14反向PCR 671
方案15定量PCR 676
方案16差异显示PCR 687
信息栏 698
多重PCR 698
Taq DNA聚合酶 700
热启动PCR 701
第9章放射性标记DNA探针与RNA探针的制备导言 719
方案1 随机引物法：利用寡核苷酸延伸法进行纯化DNA片段的放射性标记 721
方案2随机引物法：在融化琼脂糖存在下利用随机寡核苷酸延伸进行DNA的放射标记 725
方案3利用聚合酶链反应制备放射性标记的DNA探针 730
·附加方案：不对称探针 733
方案4从M13噬菌体模板合成固定长度的单链DNA探针 734
方案5从M13噬菌体模板合成非固定长度的单链DNA探针 739
方案6体外转录合成单链RNA探针 742
·附加方案：用PCR法将噬菌体编码的RNA聚合酶启动子加至DNA片段上 749
方案7用随机寡核苷酸引物从mRNA合成cDNA探针 750
方案8用寡聚（dT）作引物合成放射性标记的扣除cDNA探针 753
方案9用随机寡核苷酸延伸法进行扣除cDNA探针的放射性标记 757
方案10用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段标记双链DNA的3′端 761
方案11用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3′端 767
方案12用［a-32P］3′脱氧腺苷5′－三磷酸或［a-32P］双脱氧ATP末端标记双链DNA的3′突出端 770
方案13用碱性磷酸酶进行DNA片段的去磷酸化 771
方案14含5′突出羟基端的DNA分子磷酸化 774
方案15去磷酸化的平端或5′凹端DNA分子的磷酸化 778
方案16用交换反应进行5′突出端DNA分子的磷酸化 780
信息栏 782
核酸的非放射性标记 782
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ和Klenow片段 788
体外转录系统 794
通过差异筛选和克隆分离差异表达的cDNA 796
碱性磷酸酶 800
第10章合成寡核苷酸探针导言 811
方案1用聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化合成的寡核苷酸 820
方案2寡核苷酸5′末端磷酸化 825
方案3乙醇沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸 827
方案4CPB沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸 828
方案5大小排阻层析法纯化放射性标记的寡核苷酸 830
方案6用Sep-Pak C18柱层析法纯化放射性标记的寡核苷酸 833
方案7用大肠杆菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段标记合成的寡核苷酸 834
方案8寡核苷酸探针在溶液中的杂交：用含季铵盐的缓冲液洗涤 838
方案9解链温度的实验测定 841
信息栏 845
寡核苷酸的合成 845
解链温度 849
纯化合成寡核苷酸的方法 851
第11章cDNA文库制备及基因鉴定导言 857
方案1 cDNA文库的构建 889
阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链 890
阶段2：cDNA第二链的合成 894
阶段3：cDNA的甲基化 898
阶段4：与接头或衔接子相连接 901
阶段5：Sepharose CL-4B凝胶过滤分离cDNA 906
阶段6：cDNA与λ噬菌体臂的连接 909
·替代方案：cDNA与质粒载体的连接 913
·附加方案：cDNA文库的扩增 914
方案2真核表达文库的构建与筛选 917
阶段1：在真核表达载体上构建cDNA文库 917
阶段2：在真核表达载体上构建的cDNA文库的筛选 922
方案3外显子捕获与扩增 927
阶段1：文库的构建 929
阶段2：电穿孔法将文库转染COS-7细胞 932
阶段3：mRNA的提取 934
阶段4：反转录PCR 936
阶段5：克隆分析 942
方案4用大片段基因组DNA克隆直接筛选cDNA 944
商品化的cDNA合成与文库构建试剂盒 953
信息栏 953
Mo-MLV反转录酶 955
同聚物加尾 956
λgt10和λgt11 957
少量细胞制备cDNA文库 958
体外包装 959
COS细胞 960
生物素 961
磁珠 965
不依赖连接的克隆 967
下 册第12章DNA测序导言 981
方案1建立随机重叠DNA插入文库 986
·替代方案：M13噬菌体小量单链DNA模板制备 998
·附加方案：随机克隆用去磷酸化平末端M13噬菌体载体DNA制备 999
方案2双脱氧链终止法测序用变性模板的制备 1000
·附加方案：双链DNA的快速变性 1003
·附加方案：聚乙二醇沉淀法小量纯化质粒DNA 1004
方案3用T7噬菌体DNA聚合酶（测序酶）进行双脱氧测序反应 1005
方案4用大肠杆菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段及单链DNA模板进行双脱氧测序 1011
方案5用Taq DNA聚合酶进行双脱氧测序反应 1015
方案6循环测序：利用PCR和引物末端标记进行双脱氧测序 1020
·附加方案：使用PCR和［a-32p］dNTP内部标记进行的循环测序反应 1027
方案7化学测序法 1028
·替代方案：快速Maxam-Gilbert测序法 1036
·附加方案：制备化学测序中的末端标记DNA 1038
方案8变性聚丙烯酰胺凝胶的制备 1039
方案9含甲酰胺的聚丙烯酰胺凝胶的制备 1044
方案10配制电解质梯度胶 1046
方案11上样并进行DNA测序 1047
方案12放射自显影和从测序凝胶上读取DNA序列 1051
信息栏 1054
自动化DNA测序 1054
微量滴定板 1061
E.coliDNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段 1062
用于测序的寡核苷酸引物的贮存液的制备 1064
测序酶 1065
使用PCR扩增DNA进行传统的链终止测序 1067
用于DNA测序的dNTPs和ddNTPs贮存液的制备 1068
DNA序列测定中的甘油 1069
在DNA测序凝胶中的压缩现象 1069
7－脱氮－dGTP 1071
二氯二甲基硅烷 1072
阅读放射自显影相片 1072
DNA的电泳迁移率 1073
第13章诱变导言 1080
方案1含尿嘧啶的单链噬菌体M13 DNA制备 1088
方案2寡核苷酸指导的单链DNA诱变 1091
方案3以双链DNA为模板的体外诱变：用DpnI选择突变体 1095
方案4通过单一限制位点消除进行寡核苷酸指导的诱变（USE诱变） 1101
方案5利用大引物PCR在同一试管中进行高效快速定点诱变 1105
方案6重叠延伸产生特异位点诱变 1109
方案7 用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆 1113
·替代方案：放射性标记的寡核苷酸杂交筛选含噬菌粒的细菌克隆 1118
·替代方案：PCR方法检测确定的突变体 1119
方案8单链构象多态性和异源双链分析方法检测突变 1119
方案9外切核酸酶Ⅲ消化产生多组嵌套缺失突变体 1127
方案10 BAL 31核酸酶消化法产生双向缺失突变体 1131
BAL31 1135
信息栏 1135
外切核酸酶Ⅲ 1140
接头分区诱变 1143
随机诱变 1144
丙氨酸扫描诱变 1148
诱变寡核苷酸 1149
排除野生型DNA的定点诱变筛选 1151
N6－甲基化腺嘌呤，DAM甲基化酶和甲基化敏感限制酶 1154
定点突变的商业试剂盒 1156
甘油 1156
突变检测 1158
第14章表达文库的筛选导言 1172
方案1筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库 1175
方案2筛选质粒载体构建表达的文库 1183
方案3去除抗血清中交叉反应的抗体：假筛选 1190
方案4从抗血清中去除交叉反应性抗体：与大肠杆菌裂解液共同温育 1192
·替代方案：用噬菌体感染细胞裂解液吸收抗体 1192
方案5从抗血清中去除交叉反应性抗体：亲和层析法 1194
方案6利用λ噬菌体文库筛选DNA结合蛋白 1196
方案7 制备含有由λ噬菌体溶源菌所编码融合蛋白质的裂解液：细菌克隆的溶解 1201
方案8 含有λ噬菌体编码融合蛋白质裂解液的制备：琼脂板上裂解性感染 1205
方案9 含有λ噬菌体编码融合蛋白裂解液的制备：液体培养液中裂解感染 1207
信息栏 1209
质粒及λ噬菌体表达载体 1209
基因组DNA和cDNA表达文库 1211
抗体在免疫筛选中的应用 1212
第15章 在大肠杆菌中表达克隆化基因导言 1217
方案1用IPTG诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因 1228
方案2用T7噬菌体启动子在大肠杆菌中表达克隆基因 1232
方案3用λ噬菌体PL启动子在大肠杆菌中表达克隆基因 1236
方案4用碱性磷酸酶启动子（phoA）和信号序列在大肠杆菌中分泌表达外源蛋白 1241
附加方案：PhoA融合蛋白的亚细胞定位 1244
方案5谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白 1245
方案6直链淀粉树脂亲和层析纯化麦芽糖结合融合蛋白 1248
方案7用固化Ni2＋吸收色谱纯化带组氨酸标签的蛋白 1252
替代方案：用pH递降的缓冲液从金属亲和柱洗脱多聚组氨酸标签蛋白 1255
附加方案：NTA-Ni2＋－琼脂糖再生 1255
方案8从包涵体中纯化表达蛋白 1256
附加方案：重折叠从包涵体提取的溶解蛋白 1259
信息栏 1260
克隆基因的表达 1260
大肠杆菌表达系统 1261
LacZ融合 1263
离液剂 1265
第16章哺乳动物培养细胞中导入克隆化基因导言 1271
方案1脂染介导的DNA转染 1276
·附加方案：单层细胞组化染色鉴定β－葡萄糖醛酸酶 1282
方案2磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞 1282
·替代方案：高效率的磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞 1286
方案3磷酸钙介导的高分子量基因组DNA转染细胞 1287
·替代方案：磷酸钙介导的贴壁细胞的转染 1290
·替代方案：磷酸钙介导的悬浮细胞的转染 1291
方案4DEAE－葡聚糖介导的高效率转染 1291
·替代方案：DEAE介导的转染：增强细胞生存力 1295
方案5 电穿孔转染DNA 1296
方案6 生物粒子介导的DNA转染 1299
·附加方案：单层细胞组化染色鉴定β－葡萄糖醛酸酶 1303
方案7利用Polybrene进行DNA转染 1303
信息栏 1306
共转化 1306
稳定转染的筛选试剂 1307
脂染 1309
磷酸钙－DNA沉淀物转染哺乳动物细胞 1311
二磷酸氯喹 1312
电穿孔 1313
第17章哺乳动物培养细胞的基因表达分析导言 1322
方案1 DNA酶Ⅰ足迹法对DNA上的蛋白质结合位点作图 1323
·替代方案：羟自由基足迹法对DNA上的蛋白质结合位点作图 1331
方案2 DNA结合蛋白的凝胶阻滞分析 1332
·附加方案：超迁移分析 1335
·附加方案：竞争分析 1336
方案3 DNA酶Ⅰ超敏感位点作图 1336
方案4连缀转录分析 1341
报道分子测定：CAT、荧光素酶和β－半乳糖苷酶（方案5、6和7的导言） 1347
方案5 薄层层析法测定哺乳动物细胞提取物中氯霉素酰基转移酶含量 1350
·替代方案：通过把反应产物分散到闪烁液的方法测量CAT 1356
·替代方案：有机溶剂萃取法测量CAT 1356
方案6哺乳动物细胞抽提物中荧光素酶的测定 1357
·替代方案：用闪烁计数器测量荧光素酶活性 1361
·替代方案：测量96孔板上培养细胞的荧光素酶活性 1361
方案7哺乳动物细胞提取物中β－半乳糖苷酶的测定 1362
方案8 四环素作为哺乳动物细胞中可诱导基因表达的调控物 1366
阶段1：pTet-tTAk稳定转染成纤维细胞 1373
阶段2：四环素调控的靶基因稳定转染可诱导表达tTA的NIH－3T3细胞 1378
阶段3：分析转染细胞中的蛋白质表达 1381
·替代方案：用tTA自调控系统在瞬时转染细胞中进行四环素调控的基因诱导表达 1383
方案9蜕皮激素作为调控物诱导哺乳动物细胞中的基因表达 1384
信息栏 1388
DNA足迹法 1388
凝胶阻滞分析 1392
杆状病毒和杆状病毒表达系统 1395
绿色荧光蛋白 1399
抗原表位标记 1405
氯霉素酰基转移酶 1409
荧光素酶 1412
β－半乳糖苷酶 1413
第18章蛋白质相互作用研究技术导言 1428
方案1双杂交和其他双成分系统 1431
第一阶段诱饵－LexA融合蛋白的鉴定 1442
·替代方案：通过氯仿覆盖分析β－半乳糖苷酶活性 1454
第二阶段筛选一个相互作用子 1455
第三阶段阳性相互作用的再次确定 1464
·替代方案：相互作用陷阱阳性克隆的快速筛选 1473
方案2用GST融合蛋白进行Far Western印迹来检测蛋白质一蛋白质相互作用 1474
·附加方案：膜结合蛋白的再折叠 1480
·替代方案：用抗GST抗体检测蛋白质－蛋白质相互作用 1480
方案3用GST融合蛋白沉降技术检测蛋白质－蛋白质相互作用 1481
方案4通过免疫共沉淀确定结合蛋白 1486
方案5采用GFP和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用 1495
第一阶段用荧光染料标记蛋白质 1506
第二阶段FLIM-FRET分析的细胞制备 1510
·替代方案：FILM-FRET分析时固定细胞的制备 1512
·替代方案：活细胞的微注射 1513
第三阶段FLIM-FRET测量 1515
方案6利用BIAcore通过表面胞质基因共振光谱学分析相互作用的蛋白质 1520
第一阶段捕获表面的制备和结合试验 1527
第二阶段抗原－抗体相互作用的动力学分析 1531
信息栏 1539
丝状噬菌体展示 1539
基因组学和相互作用陷阱 1548
相互作用陷阱和相关技术 1550
附 录附录1分子克隆中使用的缓冲液和试剂的配制 1564
附录2培养基 1595
附录3载体和细菌菌株 1605
附录4分子克隆所用的酶 1616
附录5酶的抑制物 1651
附录6核酸 1661
附录7密码子和氨基酸 1673
附录8分子克隆中的常用技术 1681
附录9检测系统 1727
附录10 DNA阵列技术 1775
附录11生物信息学 1796
附录12告诫 1820
附录13供应商 1835
附录14商标 1836
索引 1859