第一章 绪论 1
一、分子生物学检验技术形成的理论基础 1
二、分子生物学检验技术在实验诊断中的应用 3
三、分子生物学检验技术的展望 4
第二章 原核生物基因组与病毒基因组 5
第一节 原核生物基因组 5
一、原核生物基因组特征 5
二、大肠杆菌基因组特征 7
三、细菌基因组学研究及意义 8
第二节 质粒 10
一、质粒的概念 10
二、质粒的类型 10
三、质粒的一般性质 11
四、转位因子 12
第三节 病毒基因组 13
一、病毒基因组特征 14
二、DNA 病毒 15
三、RNA 病毒 19
第四节 朊病毒 23
一、朊病毒的生物学特性 23
二、朊病毒蛋白基因结构 24
三、朊病毒的复制过程 24
四、朊病毒病 25
第三章 真核生物基因组 27
第一节 真核生物基因组特点 27
一、细胞核基因组与细胞质基因组 27
二、单顺反子结构 28
三、断裂基因 28
四、重复序列 29
五、多基因家族与假基因 32
六、多态性 32
七、基因重叠 33
第二节 基因组结构与疾病 33
一、人类染色体的结构与疾病 33
二、基因结构与疾病 36
三、端粒与端粒酶 39
第三节 人类基因组与人类基因组计划 42
一、人类基因组 42
二、人类基因组计划 42
第四章 癌基因与抑癌基因 46
第一节 癌基因 46
一、癌基因及其表达产物的作用 46
二、原癌基因的激活机制 49
第二节 抑癌基因 50
一、抑癌基因及其表达产物 50
二、抑癌基因失活机理 51
三、肿瘤发生中的基因变化 52
第三节 原癌基因与抑癌基因的检测及评价 54
一、主要检测技术 54
二、原癌基因与抑癌基因的检测 55
三、肿瘤相关基因检测的评价 55
第五章 蛋白质组与蛋白质组学 57
第一节 蛋白质组学研究特点 57
第二节 蛋白质组学研究范畴 58
一、蛋白质-蛋白质相互作用的研究 58
二、蛋白质-核酸间相互作用的研究 61
三、蛋白质组及其质点的分离与分析 64
第三节 蛋白质数据库及其应用 68
一、蛋白质数据库 68
二、蛋白数据库的应用 70
第四节 蛋白质组研究在医学中的应用 70
一、用于疾病诊断的研究 70
二、用于发病机制的研究 71
三、用于致病菌耐药性的研究 72
第六章 核酸的分离与纯化 73
第一节 核酸分离与纯化的设计与原则 73
一、材料与方法的选择 73
二、技术路线的设计 74
三、鉴定与保存 75
第二节 基因组 DNA 的分离与纯化 77
一、分离与纯化的方法 77
二、DNA 片段的回收 80
三、基因组 DNA 分离纯化的方法学评价与质量保证 81
第三节 质粒 DNA 的提取与纯化 82
一、提取与纯化方法 82
二、质粒 DNA 的回收 84
三、质粒 DNA 提取纯化的方法学评价与质量保证 84
第四节 RNA 的分离与纯化 85
一、RNA 制备的条件与环境 85
二、总 RNA 的分离与纯化 86
三、mRNA 的分离与纯化 87
第七章 DNA 重组技术 89
第一节 工具酶 89
一、限制性内切酶 89
二、DNA 聚合酶 91
三、DNA 连接酶 92
四、T4多核苷酸激酶 92
五、碱性磷酸酶 93
第二节 DNA 重组载体 93
一、质粒载体 93
二、噬菌体载体 95
三、真核细胞的克隆载体 98
四、人工染色体 99
第三节 DNA 重组与鉴定 100
一、DNA 重组 100
二、重组子的筛选与鉴定 105
第四节 外源基因的蛋白表达 107
一、原核表达体系 107
二、真核表达体系 110
三、表达产物的分离、纯化与鉴定 113
第五节 DNA 序列测定 115
一、双脱氧末端终止法测序 115
二、Maxam-Gilbert 化学降解法测序 118
三、DNA 序列分析的自动化 122
四、测序策略 123
第八章 聚合酶链式反应及其在基因诊断中的应用 125
第一节 聚合酶链式反应 125
一、PCR 的原理和反应过程 125
二、PCR 的反应体系和反应条件 125
三、PCR 技术的质量控制 128
第二节 以 PCR 为基础的相关技术 129
一、逆转录 PCR 129
二、定量 PCR 131
三、多重 PCR 131
四、免疫 PCR 131
五、差异显示 PCR 133
六、PCR 诱导定点突变 133
七、原位 PCR 134
第三节 PCR 产物的检测 135
一、PCR-限制性片段长度多态性 135
二、等位基因特异性寡核苷酸 135
三、单链构象多态性 136
四、变性梯度凝胶电泳 136
五、融点曲线分析 137
六、PCR 产物的序列分析 137
第四节 PCR 技术在分子诊断中的应用 137
一、标本制备 137
二、PCR 在病原体基因检测中的应用 138
三、PCR 技术在单基因病致病基因检测中的应用 143
四、PCR 技术在疾病相关基因检测中的应用 151
五、PCR 技术在移植配型和法医学鉴定中的应用 153
第九章 核酸分子杂交技术与应用 156
第一节 核酸分子杂交的基本原理与分类 156
一、核酸分子杂交的基本原理 156
二、核酸分子杂交分类 157
第二节 杂交反应的影响因素 160
一、长探针杂交 160
二、短小募核苷酸探针的杂交 164
第三节 探针的设计 165
一、核酸探针的种类 166
二、核酸探针标记方法的选择 167
三、探针的长度 168
第四节 核酸分子与固相介质的结合 168
一、支持介质的类型和性质 168
二、核酸分子的转移 169
三、核酸的固定 170
第五节 探针的标记 171
一、全程标记 171
二、末端标记 173
第六节 杂交与杂交后检测 174
一、杂交 174
二、杂交信号的检测 176
三、滤膜和探针的重复使用 179
第七节 核酸分子杂交方法学评价与应用 179
一、点/狭缝杂交方法学评价与应用 179
二、Southern 杂交方法学评价与应用 180
三、Northern 杂交方法学评价与应用 180
四、原位杂交方法学评价与应用 180
第十章 蛋白质分析技术 182
第一节 蛋白质的分离纯化 182
一、材料的选择 182
二、细胞破碎的方法 183
三、蛋白质混合物的分离方法 184
四、蛋白质分离纯化的条件 188
第二节 Western 印迹技术 190
一、蛋白质样品的制备 190
二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 191
三、蛋白质的电转移 191
四、靶蛋白的免疫学检测 192
第十一章 生物芯片技术与应用 193
第一节 DNA 芯片技术 193
一、在片化学合成法探针的设计、合成与芯片制作 193
二、微阵列法探针的制备与芯片制作 197
二、待测样品的准备 198
四、杂交与结果分析 198
五、DNA 芯片技术的应用 199
第二节 蛋白质芯片与缩微芯片技术 200
一、蛋白质芯片技术 200
二、缩微芯片技术 200
第十二章 细胞凋亡与检测技术 201
第一节 细胞凋亡的生物学意义及其相关基因 201
一、细胞凋亡的概念与生物学意义 201
二、细胞凋亡的相关基因 201
第二节 细胞凋亡信号的传递 202
一、经典的信号传递途径 202
二、死亡受体介导的信号传递 204
第三节 细胞凋亡与人类疾病 204
一、肿瘤与细胞凋亡 204
二、系统性红斑狼疮与细胞凋亡 205
三、肾脏疾病与细胞凋亡 205
四、Alzheimer 疾病与细胞凋亡 206
第四节 细胞凋亡的形态学与生物化学特征 206
一、细胞凋亡的形态学特征 206
二、细胞凋亡的生物化学特征 207
第五节 细胞凋亡的检测技术 207
一、细胞凋亡的形态学检测技术 208
二、细胞凋亡的生物化学检测技术 209
三、细胞凋亡的分子生物学检测技术 210
四、细胞凋亡的免疫学检测技术 212
参考文献 214
汉英对照索引 216