1黄曲霉毒素概述 1
1.1 黄曲霉简介 1
1.2 黄曲霉毒素来源 1
1.3 黄曲霉毒素分类和性质 2
1.4 黄曲霉毒素污染危害现状 3
1.5 黄曲霉毒素限量标准 5
1.6 黄曲霉毒素的检测方法 6
参考文献 8
2黄曲霉毒素合成途径及代谢 11
2.1 黄曲霉毒素生物合成途径 11
2.2 黄曲霉合成中相关基因的表达与调控 11
2.3 囊泡理论与黄曲霉毒素合成运输 13
2.4 影响黄曲霉毒素合成的环境因素 14
2.5 黄曲霉毒素在水产生物中的代谢 15
参考文献 18
3黄曲霉毒素控制研究进展 20
3.1 黄曲霉及黄曲霉毒素的污染控制 20
3.1.1 黄曲霉及毒素污染的前期控制 21
3.1.2 黄曲霉毒素污染的后期控制 22
3.2 饲料中AFB1控制研究进展 23
3.2.1 物理脱毒 23
3.2.2 化学脱毒 24
3.2.3 生物降解法脱毒 24
3.2.4 抗氧化剂 25
3.2.5 免疫增强剂 25
3.2.6 多效性AFB1干预剂 26
3.3 葡聚糖控制黄曲霉毒素污染的新视角和前景 27
3.3.1 葡聚糖简介 27
3.3.2 葡聚糖控制黄曲霉毒素污染 27
3.4 多糖与其生物活性相关的分子特性 28
3.4.1 多糖的聚合度(分子大小) 28
3.4.2 多糖高级结构 28
3.4.3 支链分支度 29
3.4.4 多糖的化学结构修饰 29
3.4.5 受体结构决定的特异性多糖分子 29
3.5 展望 29
参考文献 30
4水产中黄曲霉毒素概述 36
4.1 水产中黄曲霉毒素的来源 36
4.2 影响水产对黄曲霉毒素敏感度的因素 37
4.3 黄曲霉毒素对水产的危害 38
4.3.1 降低生长性能 38
4.3.2 引起组织病理损伤 39
4.3.3 对免疫系统的影响 39
4.3.4 对抗氧化系统的影响 40
4.3.5 致畸致癌、诱导细胞凋亡 40
4.3.6 黄曲霉毒素积累残留 41
参考文献 41
5 AFB1对黄河鲤鱼的急性毒性研究 45
5.1 材料与方法 46
5.1.1 主要试剂 46
5.1.2 主要仪器 46
5.1.3 试验动物及条件 46
5.1.4 AFB1对黄河鲤鱼的LD50测定试验 46
5.1.5 AFB1急性毒性试验 47
5.1.6 样本采集 47
5.1.7 黄河鲤鱼血液生化分析 47
5.1.8 黄河鲤鱼肝脏酶活性测定 48
5.1.9 AFB1对黄河鲤鱼免疫基因表达的影响 48
5.1.10 数据分析 50
5.2 结果与分析 50
5.2.1 AFB1对黄河鲤鱼的LD50及安全浓度 50
5.2.2 黄河鲤鱼血液生理生化分析 51
5.2.3 肝脏组织SOD活性、GSH含量及脂质过氧化分析 55
5.2.4 AFB1对相关免疫基因表达的影响 56
5.3 小结 59
参考文献 59
6 AFB1对黄河鲤鱼的慢性毒性研究 61
6.1 材料与方法 61
6.1.1 主要试剂 61
6.1.2 主要仪器 62
6.1.3 试验动物及条件 62
6.1.4 黄曲霉毒素制备 62
6.1.5 试验饲料制备及分组 62
6.1.6 黄河鲤鱼生长性能营养指标 63
6.1.7 黄河鲤鱼组织中毒素积累分析 63
6.1.8 组织病理学研究 64
6.2 结果与分析 65
6.2.1 AFB1对黄河鲤鱼生长性能的影响 65
6.2.2 AFB1对黄河鲤鱼鱼体组成成分的影响 66
6.2.3 AFB1在黄河鲤鱼不同组织中的积累 68
6.2.4 AFB1对黄河鲤鱼组织病理学的影响 68
6.2.5 AFB1对黄河鲤鱼的肝脏细胞凋亡的影响 71
6.2.6 AFB1对鲤鱼肾脏细胞凋亡的影响 73
6.3 小结 75
参考文献 75
7茶叶中黄曲霉毒素污染状况 78
7.1 材料 78
7.1.1 材料与试剂 78
7.1.2 仪器与设备 79
7.1.3 主要溶液的配制 79
7.2 试验方法 80
7.2.1 液相色谱-质谱分析法 80
7.2.2 茶叶中黄曲霉毒素B1的间接竞争酶联免疫吸附法的建立 81
7.2.3 市售茶叶中黄曲霉毒素的调查 83
7.3 结果与分析 83
7.3.1 液相色谱-质谱检测结果 83
7.3.2 茶叶中黄曲霉毒素B1的间接竞争酶联免疫吸附法测定结果分析 86
7.3.3 市售茶叶中黄曲霉毒素的调查结果 89
7.4 讨论 90
7.4.1 茶叶中黄曲霉毒素的液相色谱-串联质谱法 90
7.4.2 茶叶中黄曲霉毒素B1的间接竞争酶联免疫吸附测定 90
7.5 小结 91
参考文献 91
8茶叶水提物中抑毒活性组分筛选 93
8.1 材料 93
8.1.1 材料与试剂 93
8.1.2 仪器与设备 94
8.2 试验方法 94
8.2.1 培养基与孢子液制备 94
8.2.2 茶多酚抑毒抑菌活性检测 94
8.2.3 AFB1提取及含量测定 94
8.3 结果与分析 95
8.3.1 总茶多酚对黄曲霉产毒的抑制 95
8.3.2 常见茶多酚单体对黄曲霉产毒的抑制 95
8.3.3 非酯型儿茶素类茶多酚对黄曲霉菌产毒的抑制 95
8.3.4 酯型儿茶素类茶多酚对黄曲霉菌产毒的抑制 96
8.3.5 茶多酚和茶多酚单体对黄曲霉生长的抑制作用 97
8.4 讨论 98
8.5 小结 99
参考文献 99
9槲皮素抑制黄曲霉毒素产生的机制 101
9.1 材料 101
9.1.1 材料与试剂 101
9.1.2 仪器与设备 102
9.2 试验方法 102
9.2.1 胞内活性氧(ROS)水平 102
9.2.2 脂质过氧化分析 102
9.2.3 SOD、CAT和POD活性测定 102
9.2.4 同工酶电泳 103
9.2.5 RT-PCR 104
9.3 结果与分析 104
9.3.1 槲皮素处理缓解黄曲霉菌丝内氧化胁迫 104
9.3.2 槲皮素激发了黄曲霉体内抗氧化系统 105
9.3.3 槲皮素抑制产毒相关基因的表达 107
9.4 讨论 108
9.5 小结 109
参考文献 109
10几种多糖对黄曲霉菌生长及产毒的抑制作用 111
10.1 材料与方法 112
10.1.1 供试菌株 112
10.1.2 培养基 112
10.1.3 试剂 112
10.1.4 仪器 112
10.2 实验设计 112
10.2.1 培养条件 112
10.2.2 孢子悬浮液制备 113
10.2.3 纤维素提取 113
10.2.4 绿豆多糖提取 113
10.2.5 黄曲霉菌丝产量测定 113
10.2.6 AFB1提取及含量测定 113
10.2.7 数据分析 114
10.3 多糖对黄曲霉生长及产毒的影响 114
10.4 结语 115
参考文献 116
11改性香菇多糖抑制黄曲霉活性研究 118
11.1 实验材料 118
11.1.1 供试菌株 118
11.1.2 培养基 118
11.1.3 试剂 118
11.1.4 仪器 119
11.2 实验方法 119
11.2.1 香菇多糖磷酸化修饰 119
11.2.2 香菇多糖硫酸化修饰 119
11.2.3 香菇多糖羧甲基化修饰 119
11.2.4 改性香菇多糖的结构鉴定 120
11.2.5 改性香菇多糖抑制黄曲霉活性 120
11.2.6 数据分析 121
11.3 结果与分析 121
11.3.1 改性香菇多糖的结构鉴定 121
11.3.2 改性香菇多糖抑制黄曲霉活性 123
11.4 小结 125
参考文献 125
12改性香菇多糖抑制黄曲霉机制研究 127
12.1 材料与仪器 127
12.1.1 实验试剂 127
12.1.2 主要仪器 127
12.2 黄曲霉菌产毒调控基因RT-PCR分析 127
12.2.1 样品采集 127
12.2.2 RNA提取专用器皿及试剂的RN ase处理 128
12.2.3 黄曲霉菌丝RNA提取 128
12.2.4 RNA完整性检测 129
12.2.5 RNA中的DNA的除去 129
12.2.6 RNA的反转录 129
12.2.7 RT-PCR所用引物、反应体系及程序 129
12.3 结果与分析 130
12.4 小结 131
参考文献 132
13纳米化肉桂醛对黄曲霉的抑制作用研究 133
13.1 材料与仪器 133
13.1.1 主要试剂 133
13.1.2 主要仪器 134
13.2 纳米化肉桂醛的制备 134
13.2.1 油相的选择 134
13.2.2 助表面活性剂的选择 134
13.2.3 表面活性剂的选择 134
13.2.4 表面活性剂与助表面活性剂质量比(Km)的选择 134
13.3 纳米化肉桂醛的表征 135
13.3.1 纳米化肉桂醛的粒径分布 135
13.3.2 纳米化肉桂醛的透射电镜 135
13.3.3 纳米化肉桂醛的稳定性考察 135
13.4 纳米化肉桂醛抑菌活性 135
13.4.1 黄曲霉菌孢子悬浮液制备 135
13.4.2 肉桂醛和纳米化肉桂醛处理对黄曲霉孢子的生长抑制 136
13.4.3 肉桂醛和纳米化肉桂醛处理对花生酱抗感染能力的测定 136
13.4.4 黄曲霉胞内ROS水平测定 136
13.5 纳米化肉桂醛处理黄曲霉孢子胞内Ca 2+含量的变化 136
13.5.1 细胞内钙离子的测定 136
13.5.2 细胞外钙离子的测定 137
13.6 结果与分析 137
13.6.1 纳米化肉桂醛的制备 137
13.6.2 纳米化肉桂醛的粒径分布 138
13.6.3 纳米化肉桂醛的透射电镜 138
13.6.4 纳米化肉桂醛的稳定性考察 138
13.6.5 肉桂醛和纳米化肉桂醛抑制黄曲霉菌活性 139
13.6.6 肉桂醛和纳米化肉桂醛对黄曲霉胞内R05影响 139
13.6.7 纳米化肉桂醛处理黄曲霉菌孢子胞内钙离子的变化 140
13.6.8 肉桂醛和纳米化肉桂醛对花生酱抗感染能力的影响 141
13.7 小结 142
参考文献 142
14吲哚对黄曲霉生长及产毒的抑制作用 145
14.1 材料与方法 146
14.1.1 材料与试剂剂 146
14.1.2 仪器与设备 146
14.1.3 实验方法 146
14.1.4 数据分析 147
14.2 结果与分析 147
14.2.1 吲哚对黄曲霉孢子生长的抑制作用 147
14.2.2 吲哚对黄曲菌丝的生长及产毒的抑制作用 148
14.2.3 吲哚对黄曲霉相关产毒基因转录的影响 149
14.3 讨论 149
14.4 结论 150
参考文献 150
15拮抗菌B-FS06的鉴定及其发酵产物对黄曲霉的抑制作用 152
15.1 材料与方法 152
15.1.1 培养基及供试菌株 152
15.1.2 B-FS06的鉴定 153
15.1.3 B-FS06对黄曲霉的拮抗作用 153
15.1.4 B-FS06蛋白粗提液的制备 153
15.1.5 最低抑菌浓度测定 153
15.1.6 硫酸铵分级沉淀及抑菌实验 154
15.1.7 蛋白粗提液温度敏感性实验 154
15.2 结果与分析 154
15.2.1 拮抗菌B-FS06的鉴定 154
15.2.2 B-FS06对黄曲霉的拮抗活性 155
15.2.3 最低抑菌浓度 155
15.2.4 硫酸铵分级沉淀后的抑菌结果比较 156
15.2.5 蛋白粗提液热稳定性实验结果 156
15.3 讨论 157
参考文献 157
附录一 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定(GB 5009.22—2016) 160
附录二 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量(GB 2761—2017) 198