第1章 免疫荧光基础与技术导言 1
1.1 原发与继发荧光 1
1.2 免疫荧光原理 1
1.3 免疫荧光术语 3
1.4 直接免疫荧光主要过程简述 3
第2章 抗体制备及用荧光染料标记 4
2.1 抗体的结构与功能 4
缩写词 6
2.2 抗血清的制备 6
2.3 从血清中分离免疫球蛋白 6
目录 6
2.4.1.2 异硫氰酸荧光素 8
2.4.1.3 四甲基异硫氰酸若丹明（TRITC） 8
2.4.1.4 其他荧光染料 8
2.4.1.1 荧光染料的要求 8
2.4.1 荧光染料 8
2.4 抗血清的荧光染料标记 8
2.4.2 与FITC偶联 9
2.4.3 与TRITC偶联 10
2.5 偶联物的净化 11
2.5.1 用葡聚糖凝胶G-25和G-50作凝胶过滤 11
2.5.2 用生物胶P-6作凝胶过滤 12
2.5.3 在DEAE葡聚糖凝胶A-50上进行分级 12
2.5.4 吸附与免疫学净化 13
2.6 稀释蛋白溶液的浓缩 14
第3章 抗血清与偶联物的鉴定和质量监测 15
3.1 偶联物的认定指标 15
3.2 鉴定抗血清的方法 15
3.2.1 游离染料的测试 15
3.2.2 染料／蛋白比例的测定（F/P系数） 16
3.2.2.1 对FITC偶联物F/P系数的测定 16
3.2.2.2 对TRITC偶联物的克分子F/P比的测定 18
3.2.2.3 其他荧光染料偶联物的F/P比值的测定 18
3.2.3 用醋酸纤维素薄膜电泳测定蛋白质分布 19
3.2.4 用琼脂凝胶双向免疫扩散法检测抗血清的活性 20
3.2.5 用反向免疫扩散法检测抗体浓度 21
3.2.6 用标准凝胶双向扩散法检测抗体蛋白含量的沉淀单位 21
3.2.7 用抗原偶联于人工底物法作特异性检查——DASS法 22
3.2.8 用生物系统作特异性检查 22
3.2.8.1 骨髓细胞检查 22
3.2.8.2 膜免疫荧光的专用检查 23
3.3 适用性的偶联物最佳工作浓度检测法 23
第4章 免疫荧光技术 28
4.1 血清的保存 28
4.2 切片的准备与制作 28
4.2.1 切片技术 28
4.2.1.1 冷冻切片 28
4.2.1.2 石蜡包埋 30
4.2.2.2 室温下免固定的简单间接法的步骤 31
4.2.2.1 直接法的步骤 31
4.2.1.3 冷冻干燥 31
4.2.2 免疫组织学染色 31
4.2.2.3 “双”间接法检测补体结合抗体 32
4.2.2.4 特殊方法 33
4.2.3 背景染色与后染色 34
4.2.4 包埋 34
4.3 膜免疫荧光标本的准备与制作 34
4.3.1.2 孵育 35
4.3.1.3 包埋与永久性标本的制备 35
4.3.1.1 淋巴细胞的分离 35
4.3.1 淋巴细胞的膜免疫荧光 35
4.3.2 肝细胞的膜免疫荧光 36
4.3.2.1 肝细胞的制备 36
4.3.2.2 孵育 36
4.4 免疫荧光检查中的额外荧光与特异性监测 36
4.4.1 用以检测抗体的间接免疫荧光的监测 37
4.4.2 直接免疫荧光的监测 37
4.4.3 检验补体结合抗体的监测 38
5.1 显微镜 39
第5章 仪器技术与检查结果的记录 39
5.2 附属器械 42
5.2.1 显微摄影装置 42
5.2.2 共聚焦激光扫描荧光显微镜检查 43
第6章 一般注意事项 47
6.1 血清、抗体、偶联物和抗原底物 47
6.2 检测结果的提取 47
第7章 免疫荧光的应用 49
7.1 应用领域概述 49
7.2 免疫活性物在活检材料中的验证 49
7.2.1 肾活检 49
7.2.2 肝活检 54
7.2.3 皮肤活检 59
7.3 循环抗体的验证 63
7.3.1.1 抗肝细胞膜抗体 64
7.3.1 抗细胞膜抗原的抗体 64
7.3.1.2 抗甲状腺细胞膜抗体 65
7.3.1.3 抗胰岛细胞膜抗体 65
7.3.1.4 抗淋巴细胞膜抗体 65
7.3.1.5 抗肿瘤细胞膜抗体 65
7.3.2 抗细胞质成分抗体 65
7.3.2.1 抗甲状腺抗原的抗体 65
7.3.2.2 抗胃细胞抗体 68
7.3.2.3 抗胰腺细胞抗体 70
7.3.2.4 抗肾上腺、睾丸、卵巢及胎盘等类甾醇生成细胞的抗体 71
7.3.2.5 抗甲状旁腺细胞抗体 73
7.3.2.6 抗垂体细胞抗体 73
7.3.2.7 抗下丘脑细胞抗体 74
7.3.2.8 抗涎腺导管细胞抗体 74
7.3.2.9 抗肾细胞抗体 75
7.3.2.10 抗肠细胞抗体 80
7.3.2.12 抗神经组织抗体 82
7.3.2.11 抗子宫内膜抗体 82
7.3.2.13 抗视网膜细胞抗体 84
7.3.2.14 抗粒细胞及单核细胞抗体 86
7.3.2.15 抗血小板抗体 89
7.3.2.16 抗肝细胞胞浆抗体 90
7.3.2.17 抗内质网（肝及肾微粒体）抗体 91
7.3.2.18 抗线粒体抗体 96
7.3.2.19 抗核糖体抗体 101
7.3.3 抗细胞核抗体 102
7.3.3.1 伴核膜荧光的抗体 107
7.3.3.2 伴均匀核荧光的抗体 108
7.3.3.3 伴斑状核荧光的抗体 110
7.3.3.4 伴点状核荧光的抗体 112
7.3.3.5 伴抗核仁荧光的抗体 115
7.3.3.6 伴核分裂相关荧光的抗体 116
7.3.4.1 伴颗粒状胞浆荧光的抗体 123
7.3.4 抗培养细胞胞浆抗原的抗体 123
7.3.4.2 伴线状胞浆荧光的抗体 126
7.3.5 抗特殊成分的抗体 126
7.3.5.1 抗精子抗体 126
7.3.5.2 抗表皮抗体 131
7.3.5.3 抗平滑肌抗体 140
7.3.5.4 抗骨骼肌抗体 146
7.3.5.5 抗心肌抗体 150
7.3.5.7 抗结缔组织抗体 151
7.3.5.6 抗血管内皮抗体 151
7.3.5.8 抗肾小球基底膜抗体 156
7.3.5.9 抗肾小管基底膜抗体 161
7.3.5.10 抗胆管、胆管上皮及胆小管抗体 161
7.4 淋巴细胞免疫球蛋白受体的检测 166
7.5 球形人造底物荧光 168
7.5.1 用联接半抗原的葡聚糖凝胶小球检测抗D-青霉胺抗体 170
7.6 用C-反应蛋白检测补体活化 170
参考文献 173