第1章 工具 1
1.1 前言 1
1.2 切害 1
1.3 修饰 7
1.4 连接 10
1.5 转化 12
1.6 从大肠杆菌中纯化质粒DNA 14
1.7 核酸的凝胶电泳 15
1.8 寡核苷酸合成 19
1.9 微阵列 20
第2章 聚合酶链反应 21
2.1 基本技术 21
2.2 预防措施和缺点 27
2.3 改良 30
第3章 简单克隆 36
3.1 基本实验 36
3.2 载体、转化和宿主 40
3.3 修饰 45
3.4 接头、衔接子和序列盒 48
第4章 用于大肠杆菌的其他载体系统 52
4.1 前言 52
4.2 BAC载体 52
4.3 M13噬菌体载体 53
4.4 λ噬菌体 57
4.5 黏粒 65
4.6 Mu噬菌体 65
4.7 Pl噬菌体 66
第5章 文库构建 69
5.1 前言 69
5.2 基因组文库 69
5.3 cDNA文库 70
5.4 专业文库 75
第6章 文库筛选 81
6.1 前言 81
6.2 数据库筛选 81
6.3 编码功能的实验筛选 82
6.4 其他功能的筛选：报告基因 94
第7章 改造与诱变 100
7.1 前言 100
7.2 基于限制性内切核酸酶的方法 100
7.3 寡核苷酸定向诱变 102
7.4 选择正确的突变 107
7.5 灭活基因 108
第8章 克隆化DNA的应用 114
8.1 作为DNA使用 114
8.2 RNA的合成 114
8.3 蛋白质的合成 115
8.4 体外翻译 116
8.5 体内表达 116
8.6 研究基因功能：报告基因和标签 125
第9章 使用其他生物 128
9.1 前言 128
9.2 细菌 128
9.3 酿酒酵母 133
9.4 其他真菌 139
9.5 藻类 141
9.6 维管植物 142
9.7 细胞器转化 149
9.8 秀丽隐杆线虫 153
9.9 昆虫 153
9.10 哺乳动物 158
第10章 实例 172
10.1 前言 172
参考文献 177
索引 184