第一篇 感染症免疫诊断技术基本知识 1
一、感染症发展变化及诊断技术的发展 1
(一)感染症 1
1.感染症仍属危害人类的重要疾病 1
2.对感染症的认识 2
3.感染症病原微生物的概念 4
4.考虑感染症对策中须注意的问题 4
5.感染症的诊断 5
(二)感染症诊断技术的发展 5
1.显微镜检查法 6
2.细菌分离培养法 6
3.免疫学检查法 11
4.鸟嘌呤(G)加胞嘧啶(C)的摩尔百分数法 13
5.气、液相色谱法(GLC) 14
6.去氧核糖核酸探针法(DNA-probe) 16
二、人体免疫反应 21
(一)体液免疫 22
(二)细胞免疫 26
三、抗原及抗体 28
(一)抗原 28
(二)抗体及免疫球蛋白 30
四、抗原抗体反应 37
(一)抗原抗体反应的基本性质 37
1.抗原抗体结合力的性质 37
2.抗原抗体结合物的解离 38
3.简单半抗原与抗体的结合 39
4.抗原抗体结合部位 39
5.抗原抗体反应的特异性和亲和性 40
6.可溶性多价抗原与抗体间的沉淀反应 41
7.抗原抗体反应的可逆性和不可逆性 42
8.对抗原抗体反应的影响因素 43
9.抗原的免疫活性及生物活性 44
(二)机体外抗原抗体间相互作用 45
1.沉淀反应 45
2.放射活性结合法 48
3.免疫荧光法 50
4.同细胞表面抗原的反应 52
五、感染症免疫诊断原理 55
(一)以抗血清作为试剂的方法 55
(二)以抗原作为试剂的方法 56
(三)作为诊断法的细胞免疫检查 58
(四)免疫诊断试验的敏感性和特异性 59
(五)各种感染症的主要检查法及参考数据 61
六、免疫球蛋白制剂制备原理 65
(一)利用物理化学特性来提取纯化免疫球蛋白(Ig)制剂 66
(二)根据Ig在机体正常或病态下的特点制备免疫球蛋白制剂 68
(三)利用同免疫球蛋白的亲和性制备或检查免疫球蛋白 69
(四)使用免疫球蛋白制剂或检查免疫球蛋白时应注意的问题 69
七、单克隆抗体和免疫测定 73
(一)单克隆抗体原理及其用途 73
1.动物抗血清存在的问题 73
2.单克隆抗体的特点 74
3.应用单克隆抗体研究各种微生物 75
4.应用单克隆抗体存在的问题 77
1.单克隆抗体应用于免疫测定的优越性 78
(二)单克隆抗体免疫测定新技术 78
2.适用于免疫测定的单克隆抗体 80
3.单克隆抗体免疫测定法的特点 82
4.抗菌单克隆抗体的发展趋势 85
八、感染中的免疫复合物 88
(一)免疫复合物形成与致病 89
(二)与感染有关的免疫复合物病 92
1.细菌性感染 92
2.病毒性感染 100
3.寄生虫感染 102
(三)免疫复合物检测原则 103
九、感染症与C反应性蛋白(CRP) 110
(一)各种感染症等疾病的C反应性蛋白水平 110
(二)C反应性蛋白的结构与结合特性 112
(三)C反应性蛋白与某些细菌结合的特性 113
(四)C反应性蛋白的检查方法及试剂制备 113
十、葡萄球菌蛋白A及其制剂 116
(一)葡萄球菌蛋白A(SpA)及其在免疫测定方面的应用 116
1.蛋白A的存在情况 117
2.带蛋白A葡萄球菌的培养 119
3.蛋白A在金黄色葡萄球菌体上的部位 120
4.葡萄球菌蛋白A的物理化学性质 121
5.葡萄球菌蛋白A的氨基酸组成及结构 122
6.葡萄球菌蛋白A与免疫球蛋白的反应性 122
7.葡萄球菌蛋白A与人体免疫球蛋白 125
8.葡萄球菌蛋白A在免疫诊断等方面的应用 128
1.产生蛋白A的葡萄球菌菌株的选择方法 130
(二)葡萄球菌蛋白A(SpA)试剂的制备和用途 130
2.蛋白A的提取纯化法 133
3.各种SpA试剂的制备及其用途 135
第二篇 各种感染症免疫诊断 139
十一、细菌感染症 139
(一)葡萄球菌感染症 139
(二)链球菌感染症 145
1.A群链球菌感染症 146
2.B群及A、B群以外链球菌感染症 147
3.A群链球菌成分及菌体外抗原 147
(三)流感嗜血杆菌感染症免疫诊断法 154
1.关于HIB脑脊髓膜炎免疫诊断方法 155
2.病原菌快速诊断法的问题 160
3.特异性抗原PRP的制备 161
(四)化脓性脑膜炎快速诊断法 165
(五)流行性脑脊髓膜炎 169
(六)绿脓杆菌感染 172
(七)白喉 173
1.基本特征 174
2.免疫诊断 175
(八)百日咳 176
1.基本特征 176
2.免疫诊断 177
(九)军团菌病 179
1.概述 179
2.免疫诊断方法 181
(十)肠伤寒症 184
1.免疫诊断 185
2.检查结果的分析 186
(十一)肠伤寒以外的沙门氏菌感染 187
(十二)大肠杆菌感染症 189
1.大肠杆菌与感染性肠炎 189
2.大肠杆菌肠道外感染症 191
(十三)细菌性痢疾 192
(十四)霍乱 193
1.免疫检菌法 194
2.SpA-协同凝集试验 194
3.ELISA法检测霍乱肠毒素 195
(十五)空肠弯曲菌病 196
1.弯曲菌病临床症状 196
2.荧光抗体法 196
1.基本特征 198
(十六)小肠结肠炎耶尔森氏菌病 198
2.免疫诊断 199
(十七)厌氧菌感染 201
(十八)梭状芽孢杆菌感染症 204
1.气性坏疽菌群和感染症 206
2.破伤风菌和破伤风感染症 208
3.肉毒梭菌感染 210
4.细菌免疫学诊断 211
(十九)假膜性结肠炎 211
1.临床 211
2.细菌学诊断 212
3.检查难辩梭状芽孢杆菌毒素的特异性方法 213
1.基本特征 216
(二十)布鲁氏菌病 216
2.免疫诊断 217
(二十一)鼠疫 219
1.被动血球凝集试验 220
2.关于免疫诊断的其他方法 224
(二十二)炭疽 225
1.基本特征 225
2.免疫诊断 226
(二十三)李司忒菌病 228
(二十四)土拉伦菌病 230
1.土拉伦菌病临床症状 230
2.血清学检查法 231
3.迟发性过敏反应试验 233
1.免疫学诊断法 234
(二十五)马鼻疽症 234
2.检查结果的分析 237
(二十六)钩端螺旋体病 238
1.基本特征 238
2.免疫诊断 239
(二十七)莱姆(Lyme)病 242
1.基本特征 242
2.免疫诊断 243
(二十八)梅毒 245
1.基本特征 245
2.免疫诊断 246
(二十九)结核病 248
1.基本特征 248
2.免疫诊断 249
(三十)麻风 251
1.基本特征 251
2.免疫诊断 252
(三十一)支原体感染症及免疫诊断 254
1.支原体感染检查法 255
2.关于支原体抗体的意义 264
(三十二)内毒素血症及检查法 268
十二、病毒感染症 277
(一)病毒感染症的免疫诊断 277
1.检测抗体 277
2.病毒感染症中的抗体反应 278
(二)水痘-带状疱疹 281
1.感染症 281
2.免疫学诊断 282
3.ELISA法测定水痘-带状疱疹病毒抗体 283
4.对实验结果的分析 284
(三)巨细胞病毒感染症 285
1.间接荧光抗体和抗补体免疫荧光试验 286
2.间接血凝试验 286
3.ELISA试验 288
(四)EB病毒感染症 289
1.EB病毒的相关抗原及抗体检测方法概况 290
2.间接荧光抗体试验检测VCA抗体 291
3.核抗原抗体的检测——抗补体荧光技术 292
4.嗜异性抗体的检测 293
(五)呼吸道合胞病毒和副流感病毒感染症 294
1.补体结合试验 295
3.中和试验 296
2.血凝抑制试验 296
(六)腺病毒感染症 299
1.补体结合试验 300
2.ELISA试验 301
3.血凝抑制试验 302
4.血清中和试验 302
(七)麻疹和腮腺炎 303
1.血凝抑制试验 305
2.中和试验 306
(八)风疹病毒感染症 306
1.辐射状溶血试验 307
2.血凝抑制试验 308
4.试剂的制备 309
3.其他方法 309
5.结果分析 310
(九)虫媒病毒感染症 310
1.常用的免疫诊断方法 311
2.方法的选择 313
3.抗原和抗血清的制备 314
(十)病毒性肝炎 315
1.甲型肝炎 315
2.乙型肝炎 318
3.D型肝炎 322
(十一)病毒性腹泻 323
1.抗原检测 324
2.抗体检测 325
4.底物的配制 327
3.生物素标记免疫球蛋白方法 327
十三、真菌感染症 331
(一)新型隐球菌病 331
1.概述 331
2.临床症状 331
3.免疫学诊断 332
(二)念珠菌病 337
1.概述 337
2.临床症状 337
3.免疫学诊断 338
(三)孢子丝菌病 344
1.概述 344
2.临床症状 344
3.免疫学检查 345
(四)曲霉菌病 346
1.概述 346
2.临床症状 347
3.免疫学检查 347
(五)组织胞浆菌病 349
1.概述 349
2.临床症状 349
3.免疫学诊断 349
(六)球孢子菌病 352
1.概述 352
2.临床症状 352
3.免疫学检查 353
1.概述 355
(七)着色真菌病 355
2.临床症状 356
3.免疫学检查 356
(八)芽生菌病 356
1.概述 356
2.临床症状 356
3.免疫学检查 357
(九)副球孢子菌病 358
1.概述 358
2.临床症状 358
3.免疫学检查 359
1.概述 360
2.临床症状 360
(十)青霉菌病 360
3.免疫学检查 361
(十一)深部真菌病的皮肤试验 361
(十二)一项新的特异性诊断试验——外抗原试验 362
十四、立克次体病的免疫诊断 364
(一)检测血清中立克次体抗体 365
1.间接免疫荧光法(IFA) 365
2.间接血凝试验(IHA) 367
3.乳胶凝集试验(LA) 369
4.免疫酶联吸附试验(ELISA) 370
5.补体结合试验(CF) 371
6.微量凝集试验(MA) 374
7.外斐氏试验 375
8.间接免疫酶标染色法(IP) 376
(二)组织活检 377
十五、衣原体病的免疫学诊断 379
(—)衣原体的血清学诊断 379
1.补体结合试验 380
2.微量免疫荧光法 382
(二)细胞涂片或组织切片检查 384
1.免疫荧光法 384
2.Giemsa染色法 385
3.碘染色法 385
附录 各种感染症免疫诊断方法 387
第三篇 感染症免疫诊断技术 401
十六、免疫诊断技术概要 401
(一)免疫沉淀 402
1.单向放散免疫扩散法(SRID) 402
2.免疫电泳 403
(二)凝集反应 405
1.细菌凝集试验 406
2.血球凝集试验 406
3.胶乳凝集及凝集抑制试验 406
4.SpA凝集试验 407
5.颗粒放大免疫测定 407
(三)与补体有关的检测法 409
(四)标记免疫测定法 409
1.非同位素标记免疫测定法 410
2.异质性免疫测定 412
3.均质性免疫测定 414
(五)免疫传感器测定法 421
3.免疫反应器型传感器 422
1.电极型免疫传感器 422
2.酶免疫传感器 422
4.脂质体免疫传感器 423
5.光免疫传感器 423
6.其他 424
十七、非标记免疫诊断法 426
(一)单向放散免疫扩散法(SRID) 426
1.测定原理 426
2.测定方法 429
3.存在的问题 431
(二)免疫电泳法 432
1.测定原理 433
2.测定方法 434
1.器材和试剂 438
(三)对流免疫电泳试验 438
2.操作方法及结果判断 439
(四)光散射测定法 441
1.光散射测定原理 441
2.测定法的应用 443
3.测定中存在的问题 444
(五)抗球蛋白试验(Coombs试验) 445
1.原理与目的 445
2.抗球蛋白试验方法 447
3.布氏菌病血清中不完全抗体检查法 448
4.抗球蛋白血清制备 449
(六)补体结合试验 450
1.培养基及试剂 460
(七)被动免疫溶血反应(PIH) 460
2.被检材料的调制 461
3.实验方法 462
4.结果判定 463
5.应注意之点 463
十八、标记法免疫测定 465
(一)放射免疫分析 465
1.材料和试剂的准备 465
2.测定方法的种类及基本原理 469
3.方法实例 470
(二)荧光抗体技术 476
1.酶免疫测定法(EIA)的种类 488
(三)酶免疫测定法 488
2.酶免疫测定的原理 490
3.几种测定方法的操作程序 491
4.材料和试剂 494
5.固相载体及可吸附于载体的材料 495
6.辣根过氧化物酶抗体结合物的制备 496
7.ELISA法中的干扰现象 499
8.细菌性感染的酶免疫测定 500
(四)生物素-亲和素系统(BAS)原理及使用方法 501
1.原理 501
2.使用方法 502
(五)化学、生物发光免疫测定 503
(六)免疫印迹法 504
1.原理 509
(七)免疫学的定量测定法 509
2.竞争法 512
3.非竞争测定法 515
十九、皮肤试验检查法 517
(一)皮肤试验 517
(二)速发性过敏症的诊断 517
(三)迟发性过敏症的诊断 519
二十、感染症诊断中病因微生物抗原或毒素物质等的快速免疫诊断法 522
(一)微生物抗原检测法的特点 522
(二)抗原检测法存在的问题 523
(三)感染症抗原检测诊断例症 524
1.流感嗜血杆菌抗原检测 524
3.流行性脑脊髓膜炎 525
2.肺炎链球菌肺炎 525
4.淋病诊断 528
5.葡萄球菌抗原检查 529
6.内毒素血症的检查 530
7.难辨梭菌毒素检查 531
8.肉毒梭菌食物中毒 531
9.肠毒素原性大肠菌定居因子(CFA／I)的检查 532
10.霍乱弧菌肠毒素的检查法 532
11.隐球菌感染症抗原检查法 533
12.轮状病毒电镜检查法 534
13.乙型肝炎抗原检测 534
14.免疫复合物中抗原检查 534
15.Becet＇s病检查 535
16.有希望以检查抗原进行诊断的其他感染症 535
(一)毒素的免疫学检查法 537
二十一、微生物毒素的免疫学检查法 537
(二)Elek法及其改良法 539
(三)葡萄球菌蛋白A协同凝集反应 540
(四)用ELISA法检查肠毒素 542
二十二、免疫复合物的检测方法 545
(一)关于免疫复合物中的抗原检定法 545
1.外因性抗原 546
2.内因性抗原 546
(二)单克隆类风湿因子法(mRF) 552
1.mRF精制法 552
2.亲和层析法 552
3.测定方法 553
(三)用抗-抗体法检查免疫复合物 553
1.抗-抗体筛选方法 554
2.用抗-抗体法检查免疫复合物 555
二十三、其他有关技术方法 556
(一)细菌尿简易证明法 556
1.TTC还原法 556
2.亚硝酸盐试验 556
3.微量尿糖检查法 557
4.培养法 557
5.抗体包被细菌的检查 557
6.过氧化氢酶试验法 558
7.感染症病人脑脊髓膜炎脑脊液中蛋白质、糖及乳酸水平检查 558
(二)硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验 559
1.NBT试验种类和方法 559
2.观察结果 561
1.保罗-邦内尔方法 563
(三)保罗-邦内尔试验 563
2.Davidsohn吸收试验 564
(四)亲和层析技术 565
1.亲和层析原理 565
2.亲和层析用试剂制备 565
(五)杂交瘤技术及单克隆抗体制备技术 569
1.单克隆抗体制作原理及制备程序 570
2.HAT-RPMI-1640培养基培养杂交瘤细胞的原理 570
3.特异性抗体生成的杂交瘤细胞筛选方法 573
4.免疫细胞和淋巴细胞融合技术 573
5.融合细胞克隆化 575
6.可用于融合的骨髓瘤细胞株 576
7.细胞系培养生长传代方法 577
8.瘤细胞保存方法 578
9.骨髓瘤细胞传代用培养基 579
10.细胞融合用培养基及有关试剂和方法 581
附录Ⅰ 常用缓冲液 586
(一)磷酸盐缓冲液 586
(二)巴比妥缓冲液 588
(三)碳酸盐缓冲液 589
(四)醋酸缓冲液 591
(五)硼酸缓冲液 591
(六)枸橼酸缓冲液 592
(七)Tris(三羟甲基氨基甲烷)缓冲液 594
(八)甘氨酸缓冲液 595
(九)邻苯二甲酸缓冲液 596
(十)琥珀酸-NaOH缓冲液 597
附录Ⅱ 感染症免疫诊断技术目录 599